INFORME DE LABORATORIO 4 y 5:

DIVERSIDAD CELULAR RELACIONADA CON EL AGUA

JESSICA CÁCERES OVALLOS CÓDIGO: 19281007

SANDRA MILENA PEÑARANDA RIVERA CÓDIGO: 19281044
EMILY YULIETH HERNANDEZ FIGUEREDO CÓDIGO: 19281039
SMITH NATALIA ATUESTA MURILLO CÓDIGO: 19281005

DOCENTE: ROSA HAYDEE MEDINA IBARRA

UNIVERSIDAD DE SANTANDER-UDES CUCUTA

FACULTAD DE LA SALUD
PROGRAMA DE ENFERMERIA
BIOLOGIA: INFORME DE LABORATORIO DE BIOLOGIA
CUCUTA, NORTE DE SANTANDER –COLOMBIA
 RESUMEN

En la realización de este laboratorio se efectuó un procedimiento acerca de la diversidad

celular, tomado muestras de diferentes aguas observando mediante el microscopio para así
registrar variables de los diferentes tipos de células que se observaron y obteniendo datos
para analizar sus características morfológicas, afinidad por el Gram.
Con la aparición del microscopio y la utilización de tinciones la observación de células se
facilitó enormemente llegando al punto de clasificarlas en dos grandes grupos: los eucariontes
y los procariontes quienes presentan marcadas diferencias en su estructura morfológica.
Mediante la preparación de diferentes muestras se busca encontrar las disparidades
estructurales de las células de cada tejido.
 INTRODUCCION

Una célula es un microcosmo de vida, es la unidad más pequeña que puede llevar a cabo toda
la actividad propia de los seres vivos. El concepto de célula como unidad funcional de los
seres vivos apareció entre los años 1830 y 1880. La invención del microscopio establece el
punto de partida para el descubrimiento de la célula y el desarrollo científico de la teoría
celular. En el presente trabajo estaremos dando a conocer las estructuras de las diferentes
células observadas en la práctica de laboratorio. Presentaremos las fotografías del resultado
de la observación.
Problemas de investigación y objetivos
¿Qué pasaría si no traemos buena muestra de agua para ser observada por medio del
microscopio?

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
• Conocer la célula como unidad estructural y funcional de todo ser vivo con el apoyo de
información suministrada por la profesora y las prácticas desarrolladas en el laboratorio.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
 Comparar la morfología y estructura de diferentes tipos de células.
 Identificar algunas estructuras celulares como: membrana celular, pared celular,
núcleo y cloroplastos, entre otros.
 Describir las principales diferencias entre una célula animal y vegetal y reconocer
algunas de las adaptaciones de dichas células para la realización de sus funciones.
 Reconocer que una sola célula puede constituir un organismo.
 Conocer algunas técnicas de coloración utilizadas para la identificación de estructuras
celulares.
 Afianzar el aprendizaje en el manejo del microscopio óptico.
 MARCO TEORICO

¿CUÁL ES LA DIFERENCIA BÁSICA ENTRE CÉLULAS PROCARIOTAS Y

EUCARIOTAS?

Procariota Eucariota

Definición Célula sin núcleo celular definido, su Célula con un núcleo definido
material genético se encuentra y con una membrana nuclear
disperso en el citoplasma. que contiene su material
genético.

Tamaño Pequeña, entre 1 y 10 micrones. Generalmente grande, entre

10 y 100 micrones.

Forma Puede ser esférica, de bastón, de coma Muy variadas, pueden

ortográfica, o de espiral. Aunque son constituir organismos
unicelulares, pueden formar colonias. unicelulares o pluricelulares.

Información Localizada en un nucleótido, sin ser ADN y proteínas

genética rodeado por una membrana. fragmentados en cromosomas,
rodeados por una membrana.

Sistemas sexuales Escasos. Existe intercambio sexual por Frecuentes. Alternancia de

transferencia de un donador a un fases haploides y diploides
receptor. mediante meiosis y
fecundación.

División celular Directa, principalmente por fisión Por mitosis y meiosis.

binaria. No hay huso mitótico ni micro Presenta huso mitótico, o
túbulos. alguna forma de ordenación
de micro túbulos.

Tejidos Ausencia de desarrollo de tejidos. En los organismos

multicelulares se demuestra
desarrollo de tejidos.
 Flagelo Simple, formado por la proteína Compuesto, formado por
flagelina. tubulina y otras proteínas.

Enzimas Están ligadas a las membranas de las Se encuentran en los

especies fotosintéticas. cloroplastos preparadas para
la fotosíntesis.

Multicelularidad Solo en mixobacterias. En animales, plantas,

macroalgas, hongos y diversos
mohos.

Cromosomas Uno, el nucleótido. Múltiples. Cada uno con dos

cromátidas, centrómero y
telómeros.

Ejemplos Bacterias y arqueas. Animales, plantas y hongos.

¿CUÁLES SON LAS ESTRUCTURAS EXCLUSIVAS DE CÉLULAS ANIMALES Y

VEGETALES RESPECTIVAMENTE?
ORGANELOS EXCLUSIVOS EN CÉLULAS VEGETALES:
- PLASTIDIOS:
- amiloplastos: plastidos que acumulan gran cantidad de almidón.
- leucoplastos: son plastidos incoloros.
- licopeno: plastidios de color rojo, característico del tomate.
- carotenoides: plastidios que poseen carotenos.
- cromoplastos: conforman un grupo de plastidios de colores desde amarillo hasta naranja.
- proteinoplastos: plastidios que acumulan proteínas.
- elaioplastos: plastidios que almacenan aceites y grasas.
- cloroplastos: plastidios que poseen un pigmento de color verde llamado clorofila.
- vacuolas: organelo celular que acumula gran cantidad de agua y sales.
- pared celular: organelo propio de células vegetales y cumple la función de protección de
la membrana plasmática y por el cual ingresan las sustancias a través de sus plasmodesmos.
 ORGANELOS EXCLUSIVOS EN CÉLULAS ANIMALES:
- centriolos: organelos que forman el huso acromático durante la reproducción, en donde los
cromosomas se adhieren a él.
- glucógeno: se llama así al almidón animal y es exclusivo de la célula animal. la célula
animal presenta gran cantidad de lisosomas, pero no son exclusivos de ellos, ya que las
células vegetales también lo presentan, pero en menor cantidad.

Segunda parte: ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Gram y cuál es su uso?

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de
laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias. Fue
diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era
conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para
así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en
una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino también para poder
identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para
tratarla.
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un
lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría
de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram
negativas
4. ¿CÓMO SE PREPARA UNA MUESTRA DE AGUA CON MICROORGANISMOS
PARA COLOREARLA CON GRAM Y LUEGO OBSERVARLA AL
MICROSCOPIO?

Prepárate para el trabajo de laboratorio. Colócate guantes y amárrate el cabello si lo

tienes largo para evitar contaminar la muestra de bacteria que vayas a analizar. Desinfecta un
espacio de trabajo debajo de la campana extractora o en otra área bien ventilada. Antes de
comenzar, revisa que el mechero Bunsen y el microscopio estén operativos.
Esteriliza un portaobjetos de vidrio para microscopio. Si el portaobjetos está sucio, lávalo
con agua jabonosa para eliminar la grasa y la suciedad. Desinféctalo con etanol, limpiador
de vidrios o el método que recomiende tu laboratorio.
Preparar el portaobjetos
1. Prepárate para el trabajo de laboratorio. Colócate guantes y amárrate el cabello si lo
tienes largo para evitar contaminar la muestra de bacteria que vayas a analizar. Desinfecta un
espacio de trabajo debajo de la campana extractora o en otra área bien ventilada. Antes de
comenzar, revisa que el mechero Bunsen y el microscopio estén operativos.
2. Esteriliza un portaobjetos de vidrio para microscopio. Si el portaobjetos está sucio,
lávalo con agua jabonosa para eliminar la grasa y la suciedad. Desinféctalo con etanol,
limpiador de vidrios o el método que recomiende tu laboratorio.
3. Coloca la muestra en el portaobjetos. Puedes usar el método de la tinción de Gram para
ayudar a identificar las bacterias presentes en muestras médicas o en cultivos de bacterias en
una placa de Petri. Para que la tinción de Gram sea útil, coloca una capa delgada de la
muestra sobre el portaobjetos. Es recomendable una muestra que tenga menos de 24 horas,
ya que las bacterias más antiguas pueden tener paredes celulares dañadas que responderán de
forma menos predecible a la tinción de Gram.
 Si vas a usar una muestra de tejido, coloca de 1 a 2 gotas de la muestra en el
portaobjetos de vidrio. Extiéndela uniformemente sobre el portaobjetos para formar
una mancha delgada usando el borde de un segundo portaobjetos de vidrio
esterilizado. Deja que se seque con el aire antes de continuar.
 Si vas a tomar bacterias de una placa de Petri, esteriliza un asa bacteriológica en la
llama de un mechero Bunsen hasta que brille, luego deja que se enfríe. Úsala para
colocar una gota de agua esterilizada sobre el portaobjetos y luego esteriliza y enfría
el asa otra vez antes de transferir una pequeña muestra de bacteria al portaobjetos y
revolverla suavemente en el agua.
 Las bacterias en un medio de cultivo deben mezclarse en un agitador de vórtice y
luego colocarse en el portaobjetos con un asa bacteriológica, como se indica
anteriormente, pero sin agregar el agua adicional.
 Si tienes una muestra en un hisopo, pásalo ligeramente por encima del portaobjetos.
4. Fija la muestra por calor. El calor fijará las bacterias al portaobjetos de forma que no se
enjuaguen tan fácilmente durante la tinción. Pasa rápidamente el portaobjetos dos o tres veces
por la llama de un mechero Bunsen o caliéntalo sobre un calentador de portaobjetos eléctrico.
No lo sobrecalientes o las muestras podrían distorsionarse. Si vas a usar un mechero Bunsen,
la llama debe ser un cono pequeño y azul, no uno alto y anaranjado.
 Alternativamente, la muestra puede fijarse con metanol, agregando 1 o 2 gotas sobre
la mancha seca, drenando el exceso de metanol y dejando que se seque con el aire.
Este método minimiza el daño a las células huésped, dándoles un fondo más limpio.
5. Posiciona el portaobjetos en una bandeja para tinción. Una bandeja para tinción es una
bandeja poco profunda de metal, vidrio o plástico con una pequeña malla o soporte de
alambre a lo largo de la parte superior. Coloca el portaobjetos sobre este soporte de forma
que los líquidos que vayas a usar puedan drenarse sobre la bandeja.
 Si no tienes una bandeja para tinción, el portaobjetos puede colocarse directamente
sobre una cubeta de plástico para hielo.
Parte2
Realizar la tinción de Gram

1. Empapa la muestra con cristal violeta. Usa una pipeta para empapar la muestra de la
bacteria con varias gotas de tinte cristal violeta, a veces llamado violeta de genciana. Espera
de 30 a 60 segundos. En una solución acuosa, el cristal violeta (CV) se disocia en CV+ e
iones de cloruro (Cl-). Estos iones penetran a través de la pared celular y la membrana celular
de células tanto Gram positivas como Gram negativas. El ion CV+ interactúa con los
componentes con carga negativa de las células bacterianas para mancharlas de violeta.
 Muchos laboratorios usan el cristal violeta de "Hucker", el cual agrega oxalato de
amonio para evitar la precipitación.
2. Enjuaga suavemente el cristal violeta. Inclina el portaobjetos y usa un matraz de lavado
para rociar un pequeño chorro de agua destilada o de grifo sobre la parte superior del
portaobjetos. El agua debería escurrirse sobre la superficie de la mancha pero no estar
apuntada directamente a ella. No enjuagues excesivamente, lo cual puede quitar la tinción de
las bacterias Gram positivas.
3. Empapa la mancha con yodo y luego enjuaga. Usa una pipeta para cubrir la mancha con
yodo. Déjala reposar por lo menos por 60 segundos, luego enjuágala cuidadosamente con el
mismo método. El yodo, en la forma de iones con carga negativa, interactúa con los iones
CV+ para formar grandes compuestos de cristal violeta y yodo (compuestos CV-I) dentro de
las capas interiores y exteriores de la célula. Esto atrapa el color del cristal violeta en la célula,
en el lugar en el que la haya teñido.
 El yodo es corrosivo. Evita su inhalación, ingestión o contacto con la piel.

4. Agrega un decolorante y luego enjuaga rápidamente. Para este paso crítico, se usa
normalmente una mezcla de acetona y etanol en una proporción de 1:1. La realización de este
paso debe calcularse cuidadosamente. Sujeta el portaobjetos en ángulo, luego agrega el
decolorante hasta que nada del color violeta sea visible en la escorrentía. Esto normalmente
toma menos de 10 segundos o incluso menos tiempo si el decolorante contiene una alta
concentración de acetona. Detente inmediatamente o el decolorante retirará la tinción de
cristal violeta de células tanto Gram positivas como Gram negativas y la tinción tendrá que
repetirse. Enjuaga inmediatamente el exceso de decolorante usando la técnica mencionada
anteriormente.
 Puede usarse acetona pura (95%+) en su lugar. Mientras más acetona haya, el
decolorante trabajará más rápido, lo que requerirá un cálculo más preciso del tiempo.
 Si estás teniendo problemas para calcular la realización de este paso, considera
agregar el decolorante gota a gota.
5. Empapa la mancha con un colorante secundario y luego enjuaga. Se usa un colorante
secundario, normalmente safranina o fucsina, para agregar un contraste adicional entre las
bacterias Gram positivas y Gram negativas, tiñendo las bacterias decoloradas (Gram
negativas) de rosado o rojo.Deja el colorante en la muestra por lo menos por 45 segundos,
luego enjuágalo.
 La fucsina teñirá muchas bacterias Gram negativas de forma más intensa, como las
especies Haemophilus y Legionella. Esto puede convertirla en una mejor opción para
principiantes.
6. Seca el portaobjetos. Puedes dejar que el portaobjetos se seque con el aire o secarlo usando
papel absorbente que se venda para este propósito. La tinción de Gram está terminada.
Parte3
Examinar el resultado
1. Prepara el microscopio óptico. Coloca el portaobjetos bajo el microscopio óptico. Las
bacterias varían en gran medida en tamaño, así que la magnificación total requerida variará
de 400x a 1000x. En el extremo más alto de estas magnificaciones, se recomienda usar una
lente objetiva con aceite de inmersión para una mayor claridad. Coloca una gota de aceite de
inmersión en el portaobjetos, evitando el movimiento durante la aplicación para evitar las
burbujas. Mueve el revólver del microscopio de forma que la lente objetiva se posicione en
su lugar con un clic, tocando el aceite.
 El aceite de inmersión solo puede usarse en lentes diseñadas especialmente, no en
una lente "seca".
2. Identifica las bacterias Gram positivas y Gram negativas. Examina el portaobjetos bajo el
microscopio óptico. Las bacterias Gram positivas se verán violetas debido al cristal violeta
atrapado en sus gruesas paredes celulares. Las bacterias Gram negativas se verán rosadas o
rojas, ya que el violeta se enjuagó a través de las delgadas paredes celulares y luego ingresó
a ellas el colorante secundario rosado.
 Si la muestra es demasiado gruesa, puedes obtener falsos positivos. Tiñe una nueva
muestra si todos tus resultados son Gram positivos, para asegurarte de que el resultado
sea correcto.
 Si el decolorante se escurrió por mucho tiempo, puedes obtener falsos negativos. Tiñe
una nueva muestra si todos tus resultados son Gram negativos para revisar los
resultados dos veces.
3. Busca imágenes referenciales. Si no estás seguro de lo que es una bacteria, busca en
colecciones de imágenes referenciales clasificadas por forma y resultado de la tinción de
Gram. Puedes encontrar bases de datos en línea en la Base de Datos Nacional de Patógenos
Microbianos de los EE.UU., Bacterias en fotos y muchos otros sitios. Para facilitar más la
identificación, los ejemplos comunes o importantes para el diagnóstico están clasificados a
continuación por estado de Gram y forma.
4. Identifica bacterias Gram positivas por su forma. Las bacterias se clasifican más a fondo
por su forma bajo el microscopio, más comúnmente como cocos (esféricas) o varas
(cilíndricas). Estas son algunas bacterias Gram positivas (teñidas de violeta) comunes
clasificadas por forma:
 Los cocos Gram positivos generalmente son ya sea estafilococos (que significa cocos
en grupos) o estreptococos (que significa cocos en cadenas).
 Las varas Gram positivas incluyen los bacilos y las
bacterias Clostridium, Corynebacterium y Listeria. Las varas de la
especie Actinomyces a menudo tienen ramas o filamentos.
5. Identifica bacterias Gram negativas. Las bacterias Gram negativas (teñidas de rosado) a
menudo se clasifican en tres grupos. Los cocos son las bacterias esféricas, las varas son las
bacterias largas y delgadas, y las varas cocoides están en un punto intermedio.
 Los cocos Gram negativos son más comúnmente la especie Neisseria.
 Las varas Gram negativas incluyen las bacterias E.
coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, P
seudomonas y muchas otras. La bacteria Vibrio cholerae puede aparecer como varas
normales o varas curvas.
 Las varas Gram negativas "cocoides" (o "cocobacilos") incluyen
la Bordetella, Brucella, Haemophilus y Pasteurella.

6. Evalúa los resultados mixtos. Algunas bacterias son difíciles de teñir con precisión debido
a la fragilidad de sus paredes celulares o a cuán cerosas sean. Pueden tener una mezcla de
una tinción violeta o rosada en la misma célula o entre diferentes células en la misma muestra.
Cualquier muestra de bacteria que tenga más de 24 horas puede tener este problema, pero
algunas especies son difíciles de teñir a cualquier edad. Pueden requerir pruebas más
especializadas para reducir el número de posibilidades para su identificación, como la tinción
de Ziehl-Neelsen, la observación del crecimiento de cultivos, el agar TSI o pruebas genéticas.
 Las especies Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium y
Propionibacterium se consideran bacterias Gram positivas, pero a menudo aparecen
teñidas de forma no concluyente.
 Las bacterias pequeñas y delgadas, como las
especies Treponema, Chlamydia y Rickettsia, son difíciles de teñir correctamente.
7. Desecha los materiales. Los procedimientos para la eliminación de desechos varían entre
laboratorios y según los materiales usados. Normalmente, el líquido en la bandeja para
tinción se desecha como residuo peligroso en botellas selladas. Sumerge los portaobjetos en
una solución con un 10% de lejía y luego deséchalos en recipientes para instrumentos
afilados.
 PROCEDIMIENTO
MUESTRAS EN FRESCO:
AGUA DE PETALOS DE FLORES AGUA DE ARROZ
( 2 semanas estancada ) (2 semanas estancada)

Fig:1 Fig:3

Fig:2
Obj: Fig1: 40x Fig 2: 40x
Ampliación:400x
Observación microscópica: Se puede
observar en la primera imagen hay un
microorganismo unicelular, Euglena, en la
segunda imagen se puede observar que
tiene cloroplastos internos.
Fig:4
Obj: Fig 3:10x Fig 4: 40x
Ampliación: 40x
Observación microscópica: Se puede
observar residuos de la planta de arroz los
cuales se encuentran en toda la muestra.

Observación macroscópica: se puede Observación macroscópica: se puede

observar que es de color amarillo , se ven observar que es de color blanco , se ven
residuos al fondo del envase residuos al fondo del envase
 MUESTRAS EN FRESCO:
AGUA DE CONCHAS DE FRUTAS Y
VERDURAS
( 2 semanas estancada)
Fig:5
Fig: 6
Obj: fig5:40x fig6: 40x
Ampliación: 400x
Observación microscópica: se pueden
observar residuos de las conchas de
zanahoria y tomate, se observan
estructuras de diferentes tipos.
Observación macroscópica: se puede
observar que es color naranjado, se ven
residuos al fondo del envase
AGUA DE RIO
(1 semanas estancada)
Fig:7
Fig:8
Obj: fig7:10x y fig8: 40x
Ampliación: 100x y 400x
Observación microscópica: se puede
observar que el agua de rio se encuentran
solo residuos de suciedad, como la tierra,
en la muestra solo se encuentra una
estructura parecida al de una rama.
Observación macroscópica: se puede
observar que es de color trasparente, se ven
residuos al fondo del envase
 TINCION GRAM
El procedimiento indicado por el docente para montaje de la muestra en seco y colorearlas y
de esa manera reportarlas según su forma como Gram Positiva o Gram negativas.
El proceso de tinción gram negativas y gram positivas se llevó a cabo con los siguientes
reactivos en primer lugar, como es el cristal violeta, y otro de contraste, como la safranina.,
el lugol, y un decolorante como el alcohol/acetona.

MUESTRAS EN SECO:
AGUA DE PETALOS DE FLORES AGUA DE ARROZ
( 3 semanas) (3 semanas estancada)

Fig:9 Fig:10
Obj: 100x con aceite de inmersión Obj:100x con aceite de inmersión
Ampliación: 1000x Ampliación: 1000x

Observación microscópica: se puede Observación microscópica: se puede

observar en la muestra es gram negativa, se
encuentran bacilos aislados en las
diferentes partes de la muestra.
Observación macroscópica: es de color
entre morado y rojo de textura lisa la
muestra
observar en la muestra que es gram
positiva, solo se observa su estructura.
Observación macroscópica: se puede
observar es de color morado y de textura
lisa.
 MUESTRAS EN SECO:
AGUA DE CONCHAS DE FRUTAS Y
VERDURAS (2 semanas estancada)
( 3 semanas estancada)
Fig:11
Obj: 100x con aceite de inmersión
Ampliación : 1000x
Observación microscópica: se puede
observar es de gram negativa, y con bacilos
dispersos
Observación macroscópica: es de color
rojo y morado , de textura lisa
AGUA DE RIO
Fig:12
Obj:100x con aceite de inmersión
Ampliación: 1000x
Observación microscópica: se puede
observar de gram negativa, y de diferente
estructura de la muestra
Observación macroscópica: es de color
rojo y morado, de textura lisa.
 CONCLUSIONES
 Se puede concluir que sin los diferentes reactivos para la tinción gram, no se habría
observado la variedad de bacilos y cocos que hay en las diferentes muestras.
 Existen distintas clases de microorganismos productores con una gran diversidad de
tamaños
 La célula es la unidad estructural de los organismos, existen dos clases de células
eucariota y procariota.

BIBLIOGRAFIA

Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico Francisco Rodríguez “TINCION DE GRAM”

Recuperado de: https://www.franrzmn.com/tincion-de-gram/
Diferenciador “DIFERENCIAS DE CELULA EUCARIOTA Y PROCARIOTA”
Recuperado de:https://www.diferenciador.com/celula-eucariota-y-celula-procariota/
SCRIBD.COM “ORGANELOS DE LA CELULA VEGETAL” Recuperado
de:https://es.scribd.com/doc/66707109/ORGANELOS-exclusivos-en-CELULAS-
VEGETALES
WebConsultas.com “TINCION GRAM” Recuperado de:
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399