Prácticas de Bioquímica Mgr.

Soledad Bornás Acosta

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PRÁCTICA 6

LIPIDOS

1. INTRODUCCION

Los lípidos son compuestos orgánicos, de cadenas largas que forman parte de los tejidos y
fluidos corporales. Se caracterizan por ser insolubles en agua y solubles en solventes
orgánicos. Están constituidos por ácidos grasos (unidades básicas), los cuales pueden
unirse a otras sustancias para conformar estructuras lipídicas más complejas (triglicéridos,
fosfolípidos, ésteres de colesterol y otros).
Su importancia está dada por las funciones que cumplen en los organismos, como
componentes estructurales de membranas, depósitos de reserva, combustible metabólico,
forma de transporte, actividades enzimáticas, agentes de protección de bacterias,
exoesqueletos de insectos, piel de invertebrados. Los lípidos que se ingiere a través de los
alimentos son degradados, absorbidos y transportados por lipoproteínas por la vía linfática
y sanguínea para posteriormente ser metabolizados a partir de carbohidratos y aminoácidos.
Todos los lípidos tienen ácidos grasos libres; algunos lo tienen en mayor cantidad, ya sea
por acción enzimática, por acción microbiana, por descomposición o almacenamiento por
largo tiempo. Entonces se puede inferir la determinación de la acidez, por titulación con una
base, para ver el grado de deterioro de los lípidos.
Gran parte del interés de estudio es el aumento de estos compuestos, los cuales están
relacionados con la hiperlipemia y arteriosclerosis, diabetes y enfermedad cardiaca. Por lo
tanto, el diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio. Para determinar la concentración de lípidos a nivel de laboratorio se tiene que
aplicar métodos colorimétricos y espectrofotométricos. Ejemplo para la determinación de los
lípidos insaturados se los hace reaccionar con ácido sulfúrico en caliente y forman iones
carbonio. En una segunda etapa, éstos, en presencia de fosfovainillina dan una coloración
rosada. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de lípidos totales
presente en la muestra ensayada.

2. OBJETIVOS
 Determinar el grado de acidez de los lípidos presentes en una muestra biológica.
 Determinar la concentración de lípidos totales insaturados en suero sanguíneo.

3. MATERIAL Y METODOS

3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
 Suero o plasma
 Leche
 Vinagre

3.1.2. Materiales de vidrio

 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Pipetas automáticas
 Bureta
 Matraz
 fiolas
 Cubetas

3.1.3. Reactivos
 NaOH 0,1N
 Fenolftaleína 1%

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 Patrón primario acuoso de Lípidos Totales 750 mg/dL
 Ácido sulfúrico (SO4H2) concentrado
 Fosfovainillina 235 mmol/L
 Ácido fosfórico 2 mmol/L
 Agua destilada

3.1.4. Equipos y otros

 Espectrofotómetro
 Agitador magnético o mecánico
 Cocina eléctrica
 Termómetro

3.2. METODOS
Mediante la observación y exploración se aplicará el método colorimétrico, método de
espectrofotometría y método de titulación.

4. PROCEDIMIENTO

4.1. Determinación de acidez (ácidos grasos libres)

 En un matraz colocar 10mL de leche más 25mL de agua destilada y gotas de
fenolftaleína.
 En otro matraz colocar 2mL de vinagre más 25mL de agua destilada y gotas de
fenolftaleína.
 Titular ambos matraces con NaOH 0,1N hasta que vire el indicador de transparente
a rosado.

4.2. Determinación de lípidos totales insaturados

 Preparación de los hidrolizados en los siguientes sistemas:
S D
Ácido sulfúrico (SO4H2) concentrado 2,5 mL 2,5 mL
Estándar o patrón 100 uL
Muestra (suero o plasma) 100 uL
 Agitar vigorosamente con la ayuda de un agitador mecánico
 Incubar 10 minutos en un baño de agua hirviendo (100ºC).
 Enfriar en baño de agua fría y dosificar en cubetas:
B S D
Reactivo 1 mL 1 mL 1 mL
Hidrolizado del patrón 50 uL
Hidrolizado de la Muestra 50 uL
 Mezclar vigorosamente con ayuda de un agitador mecánico.
 Incubar 15 minutos a 37°C.
 Utilizar 520nm de longitud de onda para leer la absorbancia (A) del patrón (S) y la
muestra(D), frente al Blanco (B) de reactivo. El color es estable como mínimo 1 hora.

5. RESULTADOS
 Esquematizar y fundamentar el procedimiento de los experimentos.
 Mediante cálculos matemáticos determinar la concentración de los ácidos grasos
libres y lípidos totales insaturados.

6. CONCLUSIONES

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7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Cómo se determina la acidez de una muestra?
7.2. ¿Mediante qué otras pruebas podemos determinar a los lípidos?
7.3. ¿Cuál es el ácido graso representativo de la leche y del vinagre?
7.4. ¿Qué lípidos son de importancia clínica, explique?

8. BIBLIOGRAFIA