Protocolo Adision del etanol al tampón :

Reconstituir liofilizado
DNA/RNA Wash Buffer Reconstituir liofilizado Proteinasa K a 20 mg/ml con
(R1057) --> 96 ml de ADNasa I con Agua libre de Tampón de almacenamiento de
etanol al 100% (104 ml de DNasa/RNasa proteinasa K y mezclar por Agregue un volumen igual de
etanol al 95%) vortex. agua libre de nucleasas (no
I. Preparación del
Ya listo RNA Wash Buffer (R1058) E1009-A (250U), incluida) al Escudo de
tampón
--> 192 ml de etanol al añadir 275 μl agua D3001-2-20 (20 mg), ADN/ARN™ (1:1) y mezclar
100% (208 ml de etanol al E1009-AS (50U), añadir 1,04ml buffer bien.
95%) añadir 55 μl agua D3001-2-5 (5 mg),
DNA/RNA Wash Buffer añadir 0,26ml buffer
(R1057T) --> no requiere
etanol.

DNA/RNA Shield --> RNA

Lysis Buffer (1:1)

Eliminar los restos de Agregar ethanol 100% al

células --> centrifugar ≤ 500 partículas del tejido, sobrenadante (tomar 300μl
II. Preparación de la xg durante 1 min. Mezclar e incubar a 4° C centrifugue y transfiera el de muestra+ 300μl de etanol
muestra Suspender en RNA Lysis sobrenadante aclarado a un 100%)
Buffer tubo sin nucleasas. Mezclar bien

Muestras difíciles de lisar -->

homogenizar en ≥ 800 μl
DNA/RNA Shield

Trizol (red bottle) Descartar flujo continuo

2. ADNasa I4 tratamiento
- Lavar la columna con 400 μl
Tampón de lavado de ARN y 5.
1. 6.
centrífuga. descartar flujo continuo 400 μl RNA Wash
Transferir la 3. 4. Añadir 100 μl Agua
- En un tubo libre de nucleasas, Buffer. Centrifugar
muestra a un tubo Añadir 400 μl RNA Añadir 700 μl RNA libre de
III. Purificación de agregue 5 μl ADNasa I (1 U/μl)*, 75 durante 1 min.
de recogida con el Prep Buffer. Wash Buffer DNasa/RNasa y
ARN total μl DNA Digestion Buffer y mezclar Transferir a un tubo
filtro y centrifugar centrifugar.
- Incube la columna a temperatura libre de nucleasas
ambiente (20-30 °C) durante 15
minutos.