Quito – Ecuador

NORMA NTE INEN 2951

TÉCNICA 2015-12
ECUATORIANA

PRODUCTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIÓN DE PATULINA EN

ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURÉS DE MANZANA. MÉTODO
POR HPLC CON PURIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE
REPARTO LÍQUIDO/LÍQUIDO

FOODSTUFFS. DETERMINATION OF PATULIN IN CLEAR AND CLOUDY APPLE JUICE AND

PUREE. HPLC METHOD WITH LIQUID/LIQUID PARTITION CLEAN UP

DESCRIPTORES: Frutas y productos derivados, patulina, cromatografía líquida de alta eficiencia HPLC 12
ICS: 67.080.10; 67.160.20 Páginas
 Norma PRODUCTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIÓN DE PATULINA
NTE INEN
Técnica EN ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURÉS DE MANZANA.
2951:2015
Ecuatoriana MÉTODO POR HPLC CON PURIFICACIÓN POR
2015-12
Voluntaria CROMATOGRAFÍA DE REPARTO LÍQUIDO/LÍQUIDO

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta norma nacional especifica un método para la determinación de patulina en zumos de

manzana y en purés de manzana mediante la utilización de cromatografía líquida de alta
eficiencia (HPLC). El método se ha validado para la determinación de patulina mediante el análisis
de muestras contaminadas natural y artificialmente en zumos de manzana claros a niveles
comprendidos entre 26 µg/L y 128 µg/L, en zumos de manzana turbios a niveles comprendidos entre
26 µg/L y 106 µg/L, y en purés de manzana a niveles comprendidos entre 23 µg/kg y 121 µg/kg.

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

El siguiente documento en su totalidad o en parte, en referido en este documento y es

indispensables para su aplicación. Para referencias fechadas, solamente aplica la edición
citada. Para referencias sin fecha, aplica la última edición del documento de referencia (incluyendo
cualquier enmienda).

NTE INEN-ISO 3696, Agua para uso en análisis de laboratorio-Especificación y métodos de ensayo

3. FUNDAMENTO

Los zumos de manzana turbios y los purés de manzana se tratan enzimáticamente con una
pectinasa. La patulina procedente del zumo de manzana o del puré tratado enzimáticamente se
extrae con acetato de etilo. El extracto del disolvente se purifica mediante extracción líquido/líquido
con una disolución acuosa de carbonato sódico. El extracto de acetato de etilo se seca utilizando
sulfato sódico anhidro. Tras la evaporación del acetato de etilo, la patulina se determina
cuantitativamente mediante cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) utilizando detección
ultravioleta (UV).

4. REACTIVOS

4.1 Durante los análisis, y salvo que se indique lo contrario, se utilizan exclusivamente reactivos
de grado analítico reconocido y solamente agua destilada o agua de grado 1 según se define en
NTE INEN-ISO 3696. Los disolventes deben ser de una calidad adecuada para análisis mediante
HPLC.

4.2 Disolución de carbonato sódico, de una concentración en masa de ρ(Na 2CO3) ≈ 15 g/L

Se disuelven 1,5 g de carbonato sódico en 100 mL de agua.

4.3 Ácido acético, de concentración en volumen φ(CH3COOH) ≈ 98 %

4.4 Sulfato sódico anhidro

4.5 Agua a pH 4

Se ajusta el agua a un pH de 4 con ácido acético.

2015-0561 1 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

4.6 Etanol absoluto, φ(CH3CH2OH) ≥ 99,7 %

4.7 Acetato de etilo

4.8 Ácido perclórico, φ(HClO4) = 60 %

4.9 Acetonitrilo

4.10 Disolución enzimática de endogalacturonasa, de actividad típica de 1400 U/g

Definición de unidad: Cantidad de enzima que cataliza en 5 min un descenso en la viscosidad del
20 % de una disolución de pectina al 1 % a un pH de 3,4 y una temperatura de 25 ºC.

NOTA. Resultan prácticos los envases de 100 mL a 200 mL.

4.11 Fase móvil de HPLC

Se mezclan 95 partes por volumen de agua con 5 partes por volumen de acetonitrilo (4.9) y 0,095
partes por volumen de ácido perclórico (4.8), y se desgasifica.

4.12 Disolución concentrada de patulina

ATENCIÓN - Se sospecha que la patulina es mutagénica y se ha descrito que

presenta propiedades inmunotóxicas y neurotóxicas. Deberían utilizarse en todo momento
guantes y gafas de protección, y las etapas de preparación de todas las muestras y patrones
deberían realizarse en una cabina de gases.

Se disuelven 5 mg de patulina, en acetato de etilo (4.7), o bien el contenido de 1 ampolla (si la

patulina se encuentra cristalizada). Se lleva la disolución a un matraz aforado de 25 mL y se
enrasa con acetato de etilo, se obtiene una disolución que contiene aproximadamente 200 µg/mL de
patulina. La disolución concentrada de patulina se almacena en un congelador a una temperatura
inferior a 0 ºC.

4.13 Disolución patrón de patulina

Se evaporan 1000 µL de la disolución concentrada (4.12) bajo atmósfera de nitrógeno hasta

evaporación completa e inmediatamente se disuelve esta en 20 mL de etanol (4.6), y se obtiene
una concentración en masa de patulina de aproximadamente 10 µg/mL.

Para determinar la concentración exacta, se registra la curva de absorción entre 250 nm y 350 nm
en una cubeta de cuarzo de 1 cm, utilizando etanol como referencia. Se identifica la longitud
de onda de absorción máxima. La concentración en masa de patulina ρpat, en microgramos por
mililitro, se calcula utilizando la ecuación 1:

(1)

donde

es la concentración en masa de patulina, en microgramos por mililitro;

es la absorbancia determinada en el punto máximo de la curva de absorción (en este

caso, aproximadamente a 276 nm);

M es la masa molecular relativa de la patulina (M = 154,12 g/mol);

ε es el coeficiente de absorción molar relativo de la patulina en etanol [en este caso, 1460
2
m /mol, según se recoge en AOAC Official Methods, 1995, Natural Toxins, Patulin,
49.6.01.C(d)];

2015-0561 2 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

δ es la longitud de paso óptico de la cubeta de cuarzo, en centímetros.

La disolución patrón de patulina se almacena en un congelador a una temperatura inferior a

0 ºC. Las disoluciones almacenadas de esta forma son estables durante 2 meses. Antes de
utilizarse, se debe asegurar que la disolución patrón haya alcanzado la temperatura ambiente para
evitar la incorporación de agua de condensación.

4.14 Disolución patrón de patulina para calibración

Se evaporan 500 µL de la disolución patrón (4.13) o una alícuota equivalente a una cantidad absoluta
de 5 µg de patulina hasta evaporación completa y se disuelven en 5 mL de agua a pH 4 (4.5), se
obtiene una concentración en masa de patulina de 1 µg/mL.

Esta disolución puede almacenarse en una nevera a 4 ºC. Una disolución almacenada de esta
manera es estable durante 2 meses.

5. EQUIPOS

Los aparatos habituales de laboratorio y en particular, los siguientes:

5.1 Pipetas automáticas, de capacidades de 5 mL, 1 mL, 200 µL y 50 µL, junto con las puntas de
pipeta apropiadas.

5.2 Balanza analítica

5.3 Espectrofotómetro UV, de doble haz y registro, adecuado para realizar mediciones entre
250 nm y 350 nm.

5.4 Cubetas de cuarzo, de longitud de paso óptico de 1 cm.

5.5 Centrífuga, capaz de alcanzar más de 4500 FCR (más de 20 000 rpm; más de 2 094,39 rad/s)
(Ver Apéndice X).

5.6 Tubos de centrífuga, de 50 mL de capacidad con tapones de cierre de rosca.

5.7 Rotavapor, con baño de agua conectado a 40 ºC.

5.8 Papel de filtro, de un tamaño de poro de entre 20 µm y 25 µm.

5.9 Filtros para jeringas desechables, de un tamaño de poro de 0,2 µm (opcional).

Antes de su uso se analiza cada lote para asegurar que la patulina no se quede adsorbida en el
filtro.

5.10 Equipo de HPLC, que incluya lo siguiente:

5.10.1 Sistema de inyección, un sistema de inyección de válvula con un bucle de inyección de 50

µL.

5.10.2 Bomba isocrática, sin generación de pulsos y capaz de mantener una velocidad de flujo de
un volumen de 1 mL/min.

5.10.3 Detector UV, equipado con una cubeta de flujo analítica y ajustada a 276 nm.

5.10.4 Columna analítica de HPLC, en fase inversa, por ejemplo, C18 octildecilsilano (ODS) (una
carga de carbono de entre el 12 % y el 17 % de forma completa o sobre el extremo superior ha
demostrado ser adecuada), la cual asegura la resolución de la patulina respecto a todos los demás
picos. La altura máxima de los hombros de los picos solapantes debe ser inferior al 10 % de la

2015-0561 3 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

altura del pico más alto (podría ser necesario ajustar la fase móvil para conseguir una suficiente
resolución de la línea basal). Debería utilizarse una precolumna adecuada.

5.10.5 Sistema de tratamiento de datos

5.11 Válvula de conexión, o una segunda bomba de HPLC, opcional, para permitir el lavado de la
columna analítica entre inyecciones.

6. PROCEDIMIENTO

6.1 Preparación de las muestras para análisis

6.1.1 Zumo de manzana claro. No se requiere preparación. Se continúa según se describe en 6.2 a
6.4.

6.1.2 Zumo de manzana turbio. Se trasvasan 20 mL ± 0,1 mL del zumo turbio a un tubo de
centrífuga (5.7) y se añaden 150 µL de la disolución enzimática (4.10). Se tapa con el tapón de rosca
y se agita bien para mezclar. Se deja en reposo durante toda una noche a temperatura ambiente o
durante 2 h a 40 ºC, tras lo cual se centrifuga a 4500 FCR (aproximadamente 20 000 rpm;
aproximadamente 2094,39 rad/s), durante 5 min.

6.1.3 Puré de manzana. Se pesa dentro de un tubo de centrífuga (5.7) una porción para análisis de
10 g del puré, con una aproximación de 0,1 g, se añaden 150 µL de la disolución enzimática (4.10)
seguido de 10 mL de agua. Se tapa con el tapón de rosca y se agita bien para mezclar, utilizando un
homogeneizador si la muestra lo requiere. Se deja en reposo durante toda una noche a temperatura
ambiente o durante 2 h a 40 ºC, tras lo cual se centrifuga a 4500 FCR (aproximadamente 20 000
rpm; aproximadamente 2 094,39 rad/s), durante 5 min.

6.2 Extracción de patulina

Se pipetean 10 mL de zumo claro o de zumo turbio según quedó preparado en 6.1.2 y se introducen
en un decantador de 100 mL. Para el puré de manzana se pipetean 10 mL del puré de manzana
según quedó preparado en el apartado 6.1.3 y se introducen en un decantador de 100 mL. Esto es
equivalente a 5 g de puré de manzana. Se añaden 20 mL de acetato de etilo (4.7) y se agita
durante 1 min. Se deja que se separen las fases y a continuación se decantan respectivamente en
diferentes erlenmeyer. Se deposita otra vez la fase acuosa sobre el mismo decantador y se vuelve a
extraer con una segunda porción de 20 mL de acetato de etilo. Se deja que se separen las fases y
se decanta la fase acuosa inferior sobre un erlenmeyer vacío y la fase superior sobre el erlenmeyer
que contiene el acetato de etilo procedente de la primera extracción. Se repite este proceso de
extracción una tercera vez, pero después de haber dejado que se separen las fases, desechando la
fase inferior acuosa. Se juntan los tres extractos de acetato de etilo en el decantador. Se enjuaga el
erlenmeyer utilizado con otros 5 mL de acetato de etilo para recoger los extractos de acetato de etilo
y se añade este volumen al extracto de acetato de etilo presente en el decantador.

6.3 Eliminación de los compuestos ácidos interferentes

Se añaden 4 mL de la disolución de carbonato sódico (4.2) al decantador que contiene el extracto de

acetato de etilo y se agita durante 0,5 min. Se dejan separar las fases, vaciando a continuación la
fase acuosa inferior sobre un erlenmeyer. Se transfiere la fase superior sobre un matraz de fondo
redondo (5.12) a través de un embudo y un papel de filtro (5.9) que contenga aproximadamente 15 g
de sulfato sódico anhidro (4.4). Se transfiere la fase acuosa otra vez sobre el mismo decantador, se
aclara el erlenmeyer con 10 mL de acetato de etilo (4.7), se añade este al decantador y se agita
durante 0,5 min. Se dejan separar las fases, se desecha la fase inferior y se transfiere la fase superior
sobre el matraz de fondo redondo (5.12) haciéndola pasar a través del sulfato sódico. Se enjuaga el
decantador con 15 mL de acetato de etilo y se transfiere este, haciéndolo pasar a través del sulfato
sódico, sobre el matraz de fondo redondo.

Esta etapa debe completarse dentro de un intervalo de tiempo de 3 min.

2015-0561 4 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

6.4 Preparación de la disolución del extracto final de la muestra

Se evapora la disolución procedente de 6.3 hasta reducirla a un volumen pequeño (< 1 mL)
mediante vacío, utilizando un baño de agua a 40 ºC. Se trasvasa esta a un vial de vidrio. Se enjuaga
el interior del matraz de fondo redondo con acetato de etilo (4.7) para asegurar que se transfiera al
vial toda la patulina. Se evapora la disolución bajo corriente de nitrógeno en un bloque calefactor o en
un baño de agua conectado a 40 ºC, hasta que quede completamente seco. El residuo se vuelve a
disolver pipeteando dentro del vial 1 mL de agua (4.5) (500 µL para las muestras procedentes de
purés) (V1). Se asegura que la muestra se disuelve completamente haciendo que se mezcle bien
utilizando un mezclador vortex. Se transfiere la disolución de análisis de la muestra a un vial de
HPLC. En caso necesario, se filtra a través de un filtro de jeringa desechable (5.10).

7. PROCEDIMIENTO DE CONTAMINACIÓN ARTIFICIAL

7.1 Zumo de manzana claro

Se pipetean 10 mL del blanco de zumo claro en un decantador de 100 mL. Se pipetean 50 µL de la

disolución patrón (4.13) o una alícuota equivalente a una cantidad absoluta de 0,5 µg de patulina y
se añaden sobre el blanco de zumo. Se cierra el recipiente y se agita bien para mezclar. Se continúa
según se indica en 6.2 a 6.4.

7.2 Zumo de manzana turbio

Se pipetean 10 mL de zumo turbio en un tubo de centrífuga (5.7). Se pipetean 50 µL de la disolución

patrón (4.13) o una alícuota equivalente a una cantidad absoluta de 0,5 µg de patulina y se añaden
sobre el blanco de zumo. Se cierra el tubo y se agita bien para mezclar. Se continúa según se indica
en 6.1.2.

7.3 Puré de manzana

Se pesan, con una aproximación de 0,1 g, 10 g de la muestra blanco de puré de manzana en un tubo
de centrífuga (5.7). Se pipetean 50 µL de la disolución patrón (4.13) o una alícuota equivalente a una
cantidad absoluta de 0,5 µg de patulina y se añaden sobre el blanco de puré. Tras la adición de la
disolución de patulina, se agita bien para mezclar. Se continúa según se indica en 6.1.3.

8. CALIBRACIÓN

8.1 Curva de calibración

8.1.1 Generalidades. Se prepara una curva de calibración al inicio de cada día en que se realicen
los análisis.

8.1.2 Disoluciones de calibración de patulina para HPLC. Se preparan 5 disoluciones patrón

para HPLC en matraces aforados de 2 mL independientes, según se indica en la tabla 1. La
disolución patrón de calibración de patulina (4.14) se transfiere utilizando una pipeta. Los patrones se
enrasan (hasta 2 mL) con agua a pH 4 (4.5).

2015-0561 5 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

TABLA 1. Preparación de las disoluciones patrón

Disolución patrón de trabajo Concentración

Disolución patrón Agua (4.5) de patulina en masa
(µL) (µL) (µg/mL)
1 1000 1000 0,50
2 1200 800 0,40
3 1500 500 0,25
4 1800 200 0,10
5 1900 100 0,05

8.2 Condiciones de funcionamiento de HPLC

Cuando se utilizaron la columna descrita en 5.11 y la fase móvil indicada en 4.11, resultaron
adecuados los siguientes parámetros:

 Velocidad de flujo de la fase móvil (columna): 1,0 mL/min;

 Longitud de onda de detección UV: 276 nm;

 Volumen de inyección: 50 µL .

9. CÁLCULOS

La masa en nanogramos de patulina presente en la alícuota del extracto final de la muestra

inyectada en la columna de HPLC se obtiene mediante su lectura a partir de la curva de
calibración. La fracción en masa de patulina wpat, en nanogramos por mililitro (o en gramos en el
caso de los purés), se calcula utilizando la ecuación (2).

(2)

donde

es la fracción en masa de patulina;

es la masa de patulina presente en la alícuota del extracto final de la muestra

inyectada en la columna, en nanogramos;

es el volumen de la alícuota del extracto final de la muestra (6.4) inyectada en la columna,

en mililitros;

es el volumen del extracto final de la muestra (6.4), en mililitros (V1 = 1,0 mL para los
zumos, V1 = 0,5 mL para los purés);

es el volumen de muestra extraída, en mililitros para los zumos (ms = 10 mL) o en gramos
para los purés (ms = 5 g).

El resultado final puede expresarse en microgramos por litro (o por kilogramo para los purés) ya que
estas unidades son equivalentes a nanogramos por mililitro (o por gramo).

2015-0561 6 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

10. PRECISIÓN

10.1 Análisis interlaboratorios

Los valores obtenidos en análisis interlaboratorios respecto a la precisión del método se muestran
en el Apéndice Y. Los valores obtenidos a partir de dicho análisis interlaboratorios pueden no resultar
aplicables a rangos de concentraciones o matrices diferentes de las indicadas.

10.2 Repetibilidad

La diferencia absoluta entre los resultados de dos análisis individuales realizados sobre un material
de análisis idéntico por el mismo analista, utilizando el mismo equipamiento y dentro del intervalo de
tiempo más corto posible, no será superior al valor del límite de repetibilidad r en más de un 5 % de
los casos.

Los valores para zumos de manzana claros son:

= 26 µg/L r = 10,36 µg/L
= 54 µg/L r = 16,8 µg/L
= 67 µg/L r = 23,5 µg/L
= 128 µg/L r = 27,7 µg/L
Los valores para zumos de manzana turbios son:
= 26 µg/L r = 10,36 µg/L
= 60 µg/L r = 21,8 µg/L
= 69 µg/L r = 11,8 µg/L
= 106 µg/L r = 28,6 µg/L
Los valores para purés de manzana son:
= 23 µg/kg r = 17,9 µg/kg
= 38 µg/kg r = 10,6 µg/kg
= 69 µg/kg r = 21,0 µg/kg
= 121 µg/kg r = 66,1 µg/kg

10.3 Reproducibilidad

La diferencia absoluta entre los resultados de dos análisis individuales realizados sobre un material
de análisis idéntico en dos laboratorios diferentes, no será superior al valor del límite de
reproducibilidad R en más de un 5 % de los casos.

Los valores para zumos de manzana claros son:

= 26 µg/L R = 23,5 µg/L
= 54 µg/L R = 38,1 µg/L
= 67 µg/kg R = 42,8 µg/kg
= 128 µg/kg R = 39,2 µg/kg
Los valores para zumos de manzana turbios son:
= 26 µg/kg R = 23,5 µg/kg
= 60 µg/kg R = 35,0 µg/kg
= 69 µg/L R = 28,0 µg/L
= 106 µg/L R = 36,1 µg/L
= 23 µg/kg R = 23,8 µg/kg
= 38 µg/kg R = 25,3 µg/kg
= 69 µg/kg R = 23,8 µg/kg
= 121 µg/kg R = 97,4 µg/kg

2015-0561 7 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

11. INFORME DE ENSAYO

El informe del análisis debe incluir los siguientes datos:

a) toda la información necesaria para la identificación de la muestra (tipo de muestra,

origen de la muestra, designación);

b) una referencia a esta norma nacional;

c) la fecha y el tipo de procedimiento de toma de muestras (si se conoce);

d) la fecha de recepción;

e) la fecha del análisis;

f) los resultados del análisis y las unidades en las que estos se han expresado;

g) si se ha comprobado la repetibilidad;

h) todas las particularidades observadas durante el desarrollo del análisis;

i) todas las operaciones no descritas en el método, o consideradas opcionales, que pudieran

haber influido sobre los resultados.

2015-0561 8 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

APÉNDICE X

FCR
(FUERZA CENTRÍFUGA RELATIVA)

1. FCR (Fuerza centrífuga relativa) es lo que coloquialmente se llama “número de ges (g)”. FCR es
2
la relación que existe entre la fuerza centrífuga y la aceleración de la gravedad (980 cm/s ).

2. Para convertir de FCR a rpm (revoluciones por minuto) es necesario aplicar la fórmula:

donde

g es el número de ges que no tiene unidades por referirse a una magnitud relativa;
S es la velocidad de giro expresado en rpm;
-6
11,19x10 es una constante;
r es el radio de giro, medido entre el punto medio del tubo de centrifuga y el eje de
rotación expresado en cm.

3. Para convertir rpm a rad/s, que es la unidad de velocidad angular según el Sistema Internacional
de unidades (SI), se debe multiplicar por 0, 105, debido a que:

2015-0561 9 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

APÉNDICE Y

DATOS DE PRECISIÓN

Los siguientes datos se obtuvieron en un análisis interlaboratorios realizado de acuerdo con las
Directrices de AOAC sobre los procedimientos de los estudios colaborativos para la validación de las
características de un método de análisis

TABLA Y.1 Datos de precisión. Zumo de manzana claro

Contamina-
Muestra Nivel bajo Nivel Nivel alto ción
medio artificial en
ciego
Año del análisis interlaboratorios 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Número de laboratorios 12 12 12 12

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los 12 12 10 12

discrepantes
Número de discrepantes (laboratorios) 0 0 2 0

Número de resultados aceptados 12 12 10 12

Valor medio , µg/L 26 54 128 67

Desviación estándar de la repetibilidad sr, µg/L 3,7 6,0 9,9 8,4

Desviación estándar relativa de la repetibilidad RSDr, % 14 11 8 13

Límite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], µg/L 10,36 16,8 27,7 23,5

Desviación estándar de la reproducibilidad s R, µg/L 8,4 13,6 14 15,3

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad 33 25 11 23

RSDR, %

Límite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], µg/L 23,5 38,1 39,2 42,8

Rendimiento de recuperación, % − − − 89 % ± 20 %

2015-0561 10 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

TABLA Y.2 Datos de precisión. Zumo de manzana turbio

Contamina-
Muestra Nivel bajo Nivel medio Nivel alto ción
artificial en
ciego
Año del análisis 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Número de laboratorios 12 12 12 12

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los 12 9 10 11

discrepantes

Número de discrepantes (laboratorios) 0 3 2 1

Número de resultados aceptados 12 9 10 11

Valor medio , µg/L 26 69 106 60

Desviación estándar de la repetibilidad sr, µg/L 3,7 4,2 10,2 7,8

Desviación estándar relativa de la repetibilidad RSDr, % 14 6 10 13

Límite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], µg/L 10,36 11,8 28,6 21,8

Desviación estándar de la reproducibilidad s R, µg/L 8,4 10 12,9 12,5

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad 33 14 12 21

RSDR, %
Límite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], µg/L 23,5 28 36,1 35

Rendimiento de recuperación, % − − − 80 % ± 16 %

TABLA Y.3. Datos de precisión. Puré de manzana

Contamina-
Muestra Nivel bajo Nivel medio Nivel alto ción artificial
en ciego
Año del análisis interlaboratorios 1998-1999 1998-1999 1998-1999 1998-1999

Número de laboratorios 9 11 10 10

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los 8 9 10 9

discrepantes
Número de discrepantes (laboratorios) 1 2 0 1

Número de resultados aceptados 8 9 10 9

Valor medio , µg/kg 23 38 121 69

Desviación estándar de la repetibilidad sr, µg/kg 6,4 38 23,6 7,5

Desviación estándar relativa de la repetibilidad RSDr, % 27 10 19 11

Límite de repetibilidad, r [r = 2,8 x sr], µg/kg 17,9 10,6 66,1 21

Desviación estándar de la reproducibilidad sR, µg/kg 9,2 12,6 34,8 8,5

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad RSDR, % 13 33 29 36

Límite de reproducibilidad R [R = 2,8 x sR], µg/kg 25,7 35,3 97,4 23,8

Rendimiento de recuperación, % - - - 92 % ± 12 %

2015-0561 11 de 12
NTE INEN 2951 2015-12

APÉNDICE Z

BIBLIOGRAFÍA

UNE EN 14177:2004, Productos alimenticios. Determinación de patulina en zumos claros y turbios y

en purés de manzana. Método por HPLC con purificación por cromatografía de reparto
líquido/líquido. España, 2004.

2015-0561 12 de 12
 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento: TÍTULO: PRODUCTOS ALIMENTICIOS. DETERMINACIÓN DE Código ICS:

NTE INEN 2951 PATULINA EN ZUMOS CLAROS Y TURBIOS Y EN PURÉS DE 67.080.10;
MANZANA. MÉTODO POR HPLC CON PURIFICACIÓN POR 67.160.20
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO LÍQUIDO/LÍQUIDO
ORIGINAL: REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias
2014-12-23 y Productividad aprobó este proyecto de norma
Oficialización con el Carácter de
por Resolución No.
publicado en el Registro Oficial No.

Fecha de iniciación del estudio:

Fechas de consulta pública: 2015-01-08 al 2015-03-09

Comité Técnico de: Frutas y hortalizas elaboradas

Fecha de iniciación: 2015-03-09 Fecha de aprobación: 2015-03-09
Integrantes del Comité:

NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Ing. María Belén Quelal (Presidenta) INIAP

Ing. Teodoro Alarcón ARCSA
Ing. Patricia Baca SAE
Ing. Javier Sarmiento MIPRO
Ing. Verónica Granda (Secretaría Técnica) INEN

Otros trámites:

La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de

norma

Oficializada como: Voluntaria Por Resolución No. 15311 de 20154-10-19

Registro Oficial No. 647 de 2015-12-11
Servicio Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre
Casilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891
Dirección Ejecutiva: E-Mail: direccion@normalizacion.gob.ec
Dirección de Normalización: E-Mail: consultanormalizacion@normalizacion.gob.ec
Dirección Zonal Guayas: E-Mail: inenguayas@normalizacion.gob.ec
Dirección Zonal Azuay: E-Mail: inencuenca@normalizacion.gob.ec
Dirección Zonal Chimborazo: E-Mail: inenriobamba@normalizacion.gob.ec
URL:www.normalizacion.gob.ec