CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL DE ORGANELOS CELULARES

VIVIAN NAYELI ZEBALLOS LOZA / BIOLOGIA CELULAR/ UNIVALLE

RESUMEN:
Dicho brevemente este informe tiene el propósito de cultivar conocimiento
acerca de la fracción celular y los métodos de centrifugación, el cual nos
indica sobre la separación de sustancias de un componente, como por
ejemplo en nuestra practica de laboratorio realizamos la diferenciación de
organelos en la célula del hígado y aprender sobre su función de cada uno.
En el procedimiento realizado podemos destacar el equipo de centrifugación
donde el doctor nos explico como se programa las revoluciones por minuto
para la ejecución y observación de los organelos, de acuerdo a los niveles de
densidad que se forma en el tubo de ensayo. Y también la debida técnica del
frotis para colocación de muestra en portaobjetos y la tinción para mejor
análisis de su morfología. Diferentes estudios se realizan gracias a este
método y podemos comparar con diferentes artículos científicos con esto
llegamos a la conclusión de su importancia en el área de salud.

Palabras clave: HOMOGENIZAR-SOBRENADANTE-FROTIS-GLUCOSADA

INTRODUCCIÓN:
Para empezar con este documento, debemos definir que nuestro tema
principal es la centrifugación; en simples palabras aquel procedimiento que
nos ayuda a separar componentes de una sustancia, como puede ser en la
observación y la diferencia de orgánulos en la célula eucariota y comprender
su fisiología y morfología. (Centrifugación". Estefania Coluccio Leskow.)
1. ¿Cuáles son los principios de la centrifugación diferencial o ultra-
centrifugación?
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL: Tiene como principio la homogenización
el cual es el inicio de separación de la sustancia este se forma un
sobrenadante y un sedimento.
La centrifugación opera empujando los componentes más densos de la
mezcla hacia el punto más alejado del eje de rotación y dejando los menos
densos en el punto más cercano.

ULTRACENTRÍFUGA: Tiene como principio generar fuerzas de centrifugado

muy alto por el cual permite reducir la fricción y el aumento de temperatura
asi evitando desnaturalizar las proteínas, esta se puede dividir en dos tipos:
Analítica: obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación o
peso molecular.
Preparativas: Permite separar las partículas de los componentes
subcelulares.
La fuerza centrífuga relativa es la expresión de la aceleración de la muestra
debido a un tiempo (rpm) para la fracción celular.
2. Describa otras técnicas para la separación de orgánulos celulares
CENTRIFUGACION ZONAL O DE VELOCIDAD DE SEDIMENTACION: Permite
separar las partículas u organelos semejantes de tamaño y densidad. Las
partículas sedimentan a través del gradiente concentrándose en zonas o
bandas discretas en base su coeficiente de sedimentación a través de
unidades svedberg.
CENTRIFUGACIÓN ISOPICNICA: En este caso de centrifugación no es por
velocidad de sedimentación, si no consiste en que las partículas alcanzan la
posición de equilibrio, en la que su densidad es igual a la solución.
FRACCIONES SUBCELULARES
BUFFER DE LISIS: Solubizar y mantener a las proteínas.
SONICACION: Es el acto de aplicación de energía del sonido para agitar
partículas de una muestra.
EXTRACTO DE PROTEINAS
TECNICA CROMATOGRÁFICA: Este procedimiento se puede realizar de
forma de intercambios iónicos, por afinidad de anticuerpos para la
separación y observación de proteínas-
ELECTROFORESIS: Se encarga de separar las proteínas de la célula según su
carga con la técnica del punto isoeléctrico.
Para contextualizar y fundamentar este texto debemos destacar ¿Cuál es la
utilidad o importancia del tema en el estudio de la biología celular? Lo cual
podemos responder que el fraccionamiento celular es aquel que permite
preparar los componentes específicos de la célula para su indagación tanto
cualitativamente y cuantitativamente, es decir que debido a esta técnica
puede ayudarnos a realizar investigaciones y estudiar a más a detalle la
estructura de ciertos componentes de vida, como por ejemplo en el
laboratorio clínico con el análisis de sangre. (Artedinamico.
(s. f.). CENTRIFUGAS)
OBJETIVO: Separar e Identificar los organelos de las células animales mediante
el fraccionamiento celular y centrifugación diferencial
MATERIALES Y MÉTODOS:
1) Materiales y equipo
• PISETA
• TUBO DE ENSAYO
• VASO PRECIPITADO
• PIPETA
• PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS
• GOTERO
• PINZA DE MADERA
• LICUADORA
• CENTRIFUGADORA
2) Procedimiento-Centrifugación diferencial de organelos celulares
en buffer (agua destilada)
1.-En primer lugar, lavamos muy
bien el hígado de pollo para si
llevarlo a la licuadora junto con
un poco de agua destilada y
proseguir a homogenizar.

2.- Cuando ya obtuvimos la

mezcla nos encargamos de
nivelar 10 ml de la sustancia en
un tubo de ensayo, para luego
colocarlo en la centrifugadora
junto con los otros grupos.

3.- En el proceso de
centrifugación el doctor nos
indicó colocar la centrifugadora
en 2000 rpm durante 10 minutos
para asi separar las sustancias
densas y fluidas de la célula.

4.-Al pasar la primera

centrifugación pudimos
observar la diferencia entre la
división de sustancias, para
luego volver a centrifugar el
sobrenadante a 5000 rpm por 15
minutos, pero solo colocamos
4000 rpm porque es lo máximo
de velocidad del equipo.

5.-Cuando termino la segunda

centrifugación logramos
obtener los orgánulos llamados
“mitocondrias” y para su
respectiva observación con la
ayuda del gotero colocamos
después en un portaobjetos una
 gota del sobrenadante y en otro
lo del fondo.
6.- Por protocolo de la guía se
prosigue con la centrifugación
de 7000 rpm por 30 minutos
para conseguir la separación de
organelos como ser los
lisosomas y el retículo
endoplasmático

3) Procedimiento- Centrifugación diferencial gradiente en

densidad (glucosa)
1.- Primero realizamos la
homogenización del hígado del
pollo, pero esta vez agregando
poca agua en la licuadora,
luego nos encargamos de
distribuir en un tubo de ensayo
5 ml de solución glucosada y 2
ml del homogenizado sin que
ambas se junten.

2.- Luego pusimos la centrifuga

a 4000 rpm por 15 minutos,
pero por protocolo de la guía es
a 7000 por 30 minutos, cuando
finalizo el tiempo se formó tres
niveles de sustancia que fueron
el sobrenadante, medio y
fondo.
De estos tres niveles sacamos
una gotita para ponerlo en
cada uno sobre un
portaobjetos.
 3.- Luego realizamos la técnica
de frotis para esparcir la
muestra en una capa delgada
y realizar el secado con la
ayuda de un mechero para
finalmente colar el colorante.
1.Sobrenadante + azul
2.Medio + azul
3.Fondo + verde
Enjuagar, secar y observar en
el microscopio a 1000x

RESULTADOS:
Tabla Nº1. Centrifugación diferencial de organelos celulares en Buffer (Agua
destilada) y en gradiente de densidad (Glucosa)
ORGANELO Centrifugación diferencial
BUFFER (Agua destilada) SACAROSA 20M (Glucosa)

Mitocondria Imagen: Imagen:

rpm: 5000 rpm: 7000

tiempo: 15 tiempo: 30
tinción: azul
Lisosoma Imagen: (no logramos verlo por Imagen:
falta de tiempo)

rpm: 7000 rpm:7000

tiempo: 30 tiempo: 30
tinción: azul
Retículo endoplasmático Imagen: (no logramos verlo por Imagen:
falta de tiempo)
 rpm: 7000
tiempo: 30
rpm: 7000
tiempo: 30
tinción: verde

DISCUSIÓN:
Como nuestro tema en cuestión es la centrifugación, podemos destacar como
ejemplos diferentes artículos científicos como el caso del estudio de C. López,
que trabajo en la evaluación de plasma en bovinas para su estudio de
concentración de plaquetas. Muestras de sangre fueron recolectadas de
vacas Holstein clínicamente normales y procesadas por un método de
centrifugación doble en tubo para obtener plasma rico en plaquetas (PRP).
El PRP y la sangre entera fueron analizados por un sistema de impedancia
volumétrica para hemograma y parámetros plaquetarios adicionales
(volumen plaquetario medio (VPM) y ancho de distribución del volumen de
plaquetas (PDW). (Arch. med. vet. vol.44 no.2 Valdivia 2012)
Otro ejemplo que podemos mencionar es el método de centrifugación como
método de investigación de dengue en placa, para el aislamiento del virus a
partir de muestras de suero humano. Se utilizó la línea celular C6/36-HT
determinándose los valores óptimos de velocidad de centrifugación,
volumen de inóculo, dilución de suero y tiempo de incubación. (Rev. perú.
med. exp. salud publica v.27 n.1 Lima mar. 2010)
Por lo que podemos a llegar a concretar que nuestra practica en laboratorio
es muy importante para nuestra área en salud, en especial si se trata de
investigaciones sobre la vida celular.
3. ¿Cuál de las dos técnicas (buffer / gradiente de densidad) presento
mejores resultados? Indique el fundamento de dicha reacción
CENTRIFUGACION GRADIENTE DE CENTRIFUGACION DIFERENCIAL
DENSIDAD
 • Permite purificar las fracciones de • Tiene como principio la
organelos enriquecidas que se homogenización, este puede
obtuvieron con la centrifugación presentarse de diferentes maneras
diferencial. para concluir a la centrifugación.
• En esta los organelos se separan en • Se basa en una diferencia en la
función del coeficiente de densidad de las moléculas. Esta
sedimentación al ser centrifugados diferencia debe ser grande para
de una gradiente de una sustancia poder ser observada al centrifugar:
densa como la sacarosa. Las partículas que posean
• Partículas de diferente tamaño se densidades similares
sedimentan debido al gradiente en sedimentaran juntas.
distintos niveles, moviéndose en • Este método es inespecífico, por lo
bandas discretas. que se utiliza como centrifugación
• Es decir, esta centrifugación preparativa para separar
fraccionara individualmente a partículas de otros componentes
organelos de semejante tamaño. en la mezcla (por ejemplo, para
separar mitocondrias de núcleos y
membrana) pero no es útil para
separar moléculas
Puedo decir entonces que en mi opinión la centrifugación de gradiente de densidad, es
de mejor resultado para el análisis y obtención de separación de organelos de la célula
animal.

CONCLUSIÓN:
Se logro alcanzar el objetivo y diferenciar los organelos de la célula a través
del microscopio, utilizando el método de homogenización y centrifugación
para fundamentar nuestros conocimientos respecto a las funciones y su
morfología en nuestro organismo.
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA:
• Artedinamico. (s. f.). CENTRIFUGAS (USO, TIPOS Y MANTENIMIENTO). Equipos y
laboratorio de Colombia. https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-
ampliado/centrifugas-(uso-tipos-y-
mantenimiento)#:~:text=Las%20centr%C3%ADfugas%20son%20equipos%20m%C3
%A9dicos,componentes%20para%20poder%20ser%20analizado.
• "Centrifugación". Autor: Estefanía Coluccio Leskow. De: Argentina. Para: Concepto. De.
Disponible en: https://concepto.de/centrifugacion/.
colaboradores de Wikipedia. (2022). Centrifugación. Wikipedia, la enciclopedia
libre. https://es.wikipedia.org/wiki/Centrifugaci%C3%B3n
• ¿Qué es la Centrifugación? – TP – Laboratorio Químico. (s. f.-
b). https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/procedimientos-
basicos-de-laboratorio/centrifugacion.html
• Centrifugación.
(s. f.). https://www.quimica.es/enciclopedia/Centrifugaci%C3%B3n.html