CBTis 198

PRACTICA N° 8

CUENTA TOTAL DE MICROORGANISMOS MESOFILOS AEROBIOS POR DILUCION EN PLACA

COMPETENCIA PROFESIONAL
El alumno determinara el número de microorganismos presentes en una muestra, la cual
preparara, realizara diluciones decimales de la misma e inoculara en agar nutritivo.
COMPETENCIA DICIPLINAR
CE14 Aplica normas de seguridad en el manejo de sustancias, instrumentos y equipo en la
realización de actividades de su vida cotidiana
COMPETENCIA GENÉRICA
5.1 Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno
de sus pasos contribuye al alcance de un objetivo

MATERIALES Y REACTIVOS
Material estéril:
Frasco con 90 ml de agua peptonada
4 tubos de ensaye con 9 ml de agua peptonada
10 pipeta de 1 ml
10 cajas de petri
210 ml de agar para métodos estándar o nutritivo
Equipo: autoclave, horno de secado, incubadora, cuentacolonias y refrigerador.
Reactivos: NaCl, peptona o agua peptonada y agar nutritivo.

METODOLOGÍA
I. Preparación de la muestra

1° La muestra será un jugo natural verde o zanahoria, pechuga de pollo o restos de comida del
día anterior el cual deberá traerse en su envase original
2° El tiempo de obtención de la muestra y el análisis no debe exceder a 30minutos, en tal caso
deberá transportarse y conservarse en refrigeración.

II. Preparación de diluciones

1°En condiciones estériles se toma 1 ml de muestra y se transfiere a un tubo de ensaye con 9 ml
de agua peptonada (Dilución 1:10) Agitar.
2° De la dilución anterior se toma 1 ml y se transfiere a un tubo con 9 ml de agua peptonada
(Dilución 1:100) . Agitar.
3° De la dilución anterior se toma 1 ml y se transfiere a un tubo de ensaye en 9 ml de agua
peptonada (Dilución 1:1000). Agitar
4° De la dilución anterior se toma 1 ml y se transfiere a un tubo de ensaye con 9 ml de agua
peptonada. (Dilución 1:10000) Agitar

III. Inoculación en placa.

1° De cada una de las diluciones anteriores se toma 1 ml y se coloca en una caja de petri estéril
debidamente etiquetada por fuera con el número de la dilución. Ej.: 1:10 = 10 -1

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2° El punto anterior se repite con otra caja petri, es decir se hace por duplicado.
3° En otra caja se coloca 1 ml de la muestra original. Se etiqueta: muestra
4° Otra caja se etiqueta: Testigo. No lleva nada de muestra.
5° Agregar 20 ml de agar nutritivo o estándar fundido (Temp. Aprox. 42°C) y se mezcla
uniformemente mediante movimientos de 8 sobre la mesa.
6° Dejar solidificar sobre la mesa Invertir la caja e incubar por24 horas a 36°C
6° Observar la formación de colonias y contarlas anotando sus observaciones en el siguiente
cuadro:

Dilución No. De colonias/placa UFC/ ml OBSERVACIONES

1:10
1:100
1:1000
1:10000

Nota: La segunda columna se llena de acuerdo a las observaciones del laboratorio

UFC/ml = Unidades formadoras de colonias = No. De colonias por ml de muestra. Para obtener
este valor se multiplica la dilución por el No de colonias Ejemplo:
No. Colonias =30 Dilución = 1:100 UFC/ml = 30 X 100 = 3000 UFC/ml

DIAGRAMA DE TRABAJO

I . PREPARACION DE LA MUESTRA

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II. PREPARACION DE DILUCIONES

III. INOCULACION

Grupo: _________ Equipo:_________ Calificación______________ Fecha: _______________

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REPORTE DE LABORATORIO

PRACTICA N°
NOMBRE DE LA PRACTICA

COMPETENCIA CUMPLIDA

INTRODUCCIÓN

RESULTADOS OBTENIDOS

Dilución No. De colonias/placa Promedio UFC/ ml OBSERVACIONES

Placa 1 Placa 2
1:10
1:100
1:1000
MUESTRA
TESTIGO
SUMA = _____ = _______UFC/ml
3 muestra

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Nota: La segunda columna se llena de acuerdo a las observaciones del laboratorio

UFC/ml = Unidades formadoras de colonias = No. De colonias por ml de muestra. Para obtener
este valor se multiplica la dilución por el No de colonias Ejemplo:
No. Colonias =30 Dilución = 1:100 UFC/ml = 30 X 100 = 3000 UFC/ml

Para encontrar la contaminación de la muestra con un solo valor :

1° Se promedian los 2 resultados de la misma dilución
2°Se anota el promedio en la tabla
3°Si hay colonias en la placa testigo se resta este valor de cada uno de los promedios
4° El promedio se multiplica por la dilución y se obtiene el valor de la columna UFC/ml
5° Se suman estas cantidades excluyendo la testigo y se promedian . El promedio es el
resultado
De nuestro análisis cuyas unidades son UFC/ml

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN

CUESTIONARIO
Contesta breve y correctamente las siguientes preguntas:
1. Qué tipo de microorganismos crecen en estas condiciones de trabajo?

2. Son iguales todas las colonias que crecieron en las cajas petri?

3. Qué objetivo tiene que la muestra se diluya?

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4. Por que el agua peptonada y el agar nutritivo no se esterilizan en el horno?

5. Para las diluciones de la muestra se utiliza agua peptonada y no agua destilada o de la llave
¿Por qué?

6. Que es la peptona?

7. Describe Cuantos tipos de colonias observaste de acuerdo a su:

Característica
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3 Colonia 4
Tamaño (mm)
Forma
Elevación
Bordes
Consistencia
Color

CONCLUSIONES INVIDIDUALES

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Grupo: ____________ No. Equipo: _________ Calificacion :__________ Fecha: ________

III. APLICA TECNICAS DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS

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