ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

FACULTAD: CIENCIAS PECUARIAS

CARRERA: AGROINDUSTRIA

GUÍA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

PRÁCTICA No 1: “AISLAMIENTO Y CUANTIFICACIÓN DE

MICROORGANISMOS”

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: estudiante(s) CODIGO(S): de estudiante(s)

CEVALLOS JARAMILLO JOSSELYN GEOVANNA 8

MOYA GUERRA DENIS NICOL 51
PALMA VILLARROEL JIMMY JERKOF 41
VILLACIS SANCHEZ YESSENIA NICOLE 43

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2019/10/24 2019/10/30

NIVEL: QUINTO PARALELO: “A”

2. OBJETIVOS:

• El alumno conocerá y aplicará prácticas que permiten hacer sus propios

descubrimientos sobre los procesos de la Microbiología Industrial basados en el
uso de microorganismos, el conocimiento básico y la aplicación biológica.

3. INSTRUCCIONES:

 Cumpla con las normas de seguridad y preparación de materiales

 Organizarse dentro del equipo de trabajo y use los materiales de protección
solicitadas
 Cerciórese de tener todo lo necesario, utensilios y reactivos, antes de
empezar.
 Siga cuidadosamente las instrucciones que se encuentra en la guía.
 Escriba las observaciones de la práctica con mucha claridad.
 Ordene e interprete los resultados para hacer una buena discusión de cada
práctica
 Elimine los residuos en el lugar que le indique el Técnico Docente
 Consulte al Profesor o el Técnico Docente si tiene alguna duda
 ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

4. EQUIPOS Y MATERIALES:

Material
• 6 tubos de ensayo de 13 x 100 con 9.0 mL de solución salina 0.85% estéril
• 4 cajas Petri vacías estériles
• 2 matraces Erlenmeyer cada uno con 650 mL de agar nutritivo
• 1 caja con agar S110 o EMB
• 2 pipetas de 1 mL estériles
• Asa bacteriológica

Material biológico
• Muestra de material para aislamiento (agua, suelo, leche, jugo, etc)

Equipo
• Incubadora

Servicios
• Electricidad
• Agua
• Gas

5. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

La metodología que se sigue por lo general para la identificación de cualquier bacteria es

la siguiente:

1. Toma de la muestra: en condiciones de esterilidad.

2. Propagación: sólo en casos en los que sea necesario.
3. Aislamiento: Técnicas de aislamiento.
4. Identificación: Pruebas morfológicas y fisiológicas (pruebas bioquímicas)

I. PREPARACIÓN DE LAS DILUCIONES Y CONTEO DE POBLACIÓN

MICROBIANA
 Colocar los seis tubos con solución salina isotónica estéril en una gradilla e
identificarlos respectivamente con las diluciones 10-1 a 10-6
 Con una pipeta estéril tomar 1mL de la muestra y adicionarla al tubo identificado
como 10-1
 Mezclar y tomar 1mL de esta dilución y verter en el siguiente tubo marcado como
10-2 y así sucesivamente hasta llegar a la dilución de 10-6
 Se toma 1mL de las últimas cuatro diluciones con ayuda de una pipeta estéril y se
traspasa a una caja de Petri vacía estéril (Fig. 1)
 ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

Fig.1. Método de dilución y vaciado en placa para el conteo microbiano

 Se vierte sobre el mililitro de muestra, agar nutritivo a 50 °C y se mezcla

moviendo lentamente la caja sobre la superficie de la mesa, describiendo con el
movimiento de la caja el número 8.
 Dejar que solidifique el agar e Incubar a 37 °C por 24 horas y efectuar el conteo
de colonias. Seleccionar las placas que muestren entre 30 y 300 colonias
 Calcular la cantidad de microorganismos por mililitro o gramo de la muestra con
la siguiente fórmula:
UFC/mL= Promedio de las colonias contadas x recíproco de la dilución.
 El resultado se expresa como unidades formadoras de colonias (UFC), no como
número de microorganismos.

En caso de que el aislamiento no haya sido satisfactorio se recomienda tomar una

asada de la colonia e identificar y sembrarla en estría por 3 ó 4 cuadrantes en caja
de Petri (subcultivos).

II. AISLAMIENTO

 Se toma un asada de la muestra y se siembra en una caja de Petri con agar S110 o
EMB por estría en 3 ó 4 cuadrantes.
 Se incuba a 37 °C y se hacen observaciones a las 24 y 48 horas.
 Como en la técnica anterior y en caso de que sea necesario se recomienda hacer
un subcultivo.

6. RESULTADOS OBTENIDOS:
Aislamiento por estrías

CONCENTRACION UFC/mL
GRUPO 1 10-1 8x65 520
10-2 6x10-2 600
 ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

10-3 Ausencia Ausencia

10-4 4x10-4 40000
10-5 Ausencia Ausencia
CONCENTRACION UFC/mL
Grupo 2 10-1 Error Error
10-2 22x10-2 2200
10-3 7x10-3 7000
10-4 5x10-4 50000
10-5 6x10-5 600000
CONCENTRACION UFC/mL
Grupo 3 10-1 Error Error
10-2 Error Error
10-3 Error Error
10-4 Error Error
10-5 Error Error

Cultivo de microorganismos en Petrifilm

PETRIFILM GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3

E.coli Contaminación Ausencia Ausencia
Enterobacter Contaminación Ausencia Ausencia
Coliformes Contaminación Ausencia Ausencia
Conteo total Error Presencia de burbujas Error
Conteo aerobio Error Presencia de burbujas Error

7. CONCLUSIONES

Describir en forma lógica las conclusiones a que conlleven la práctica.

8. BIBLIOGRAFÍA

9. ANEXOS

 ¿Qué aplicaciones prácticas tienen los métodos de cuantificación de

microorganismos?
 ¿Qué técnicas se emplean comúnmente para lograr el aislamiento de bacterias y
obtener cultivos puros?
 Mencione 5 medios de cultivo selectivos y (y/o diferenciales) así como las
bacterias generalmente aisladas en cada uno de ellos.
 ¿Qué ventajas y desventajas encuentra entre los siguientes métodos de
aislamiento: a) por estría cruzada y b) por diluciones seriadas?
 Describa el fundamento básico de los siguientes instrumentos útiles para
realizar una cuenta total de células en suspensión:
a) Cámara de conteo: Aparato óptico que determina el número de partículas
por unidad basándose en el volumen de un líquido. (Erazo, 2012)
 ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

b) Nefelómetro: Se basa en la medición de la radiación causada por partículas

(en disolución o en suspensión), midiendo así la potencia de la radiación
dispersada. (Muhye, 2015)
c) Contador Coulter (Coulter Counter): Cuenta y mide el tamaño de
partículas en solución, se basa en el aumento transitorio en la Impedancia a
través del canal por el que circula una corriente eléctrica es proporcional al
volumen ocupado en cada instante de tiempo por la partícula que lo
atraviesa. (Erazo, 2012)
 Indique como se prepara de manera general un tubo para trabajar la escala
de McFarland.
1. Una vez que tenemos el Ácido Sulfúrico al 1% y el Cloruro de Bario al 1,175%
podemos preparar los 11 tubos de la escala de McFarland. (Castro, 2016)
2. Prepararemos todos los tubos, rotulados, en una gradilla y dentro de la cabina de
seguridad. (Castro, 2016)
3. Preparamos el H2SO4 y BaCl2. Sacando la molaridad. (Castro, 2016)
4. Según (Castro, 2016) debemos seguir la tabla para realizar cada tubo con las
medidas correspondientes:

Ilustración 1:Tabla para la preparación de tubos de ensayo (McFarland)

5. Echaremos un poco de Ácido Sulfúrico (1%) en un vaso de precipitado y, con una

pipeta de cristal, se echa la cantidad, calculada previamente, en cada tubo.
(Castro, 2016)
6. Con una micropipeta cogeremos la cantidad requerida en cada tubo y se
homogeinizan bien. (Castro, 2016)
 ¿Cómo se realiza la cuantificación de hongos y bacterias filamentosas?

(Castro, 2016) menciona que se determina el número de microorganismos en una muestra en

relación a las colonias que forman, las UFC (Unidades Formadoras de Colonias).
Se emplean soluciones diluidas o diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia
provenga de un solo microorganismo, aunque algunas agrupaciones no pueden ser separadas
por las diluciones. Se utilizan principalmente para la cuantificación de bacterias, levaduras y
hongos filamentosos. Se reporta como:
•UFC ****/unidad de volumen o peso
________________________________
BQF. MARÍA VERÓNICA GONZÁLEZ C.
NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE DE LA ASIGNATURA