Taller 1 de Genética 2023-2

Universidad EIA-Escuela de Ciencias de la Vida. Programa de Medicina

Docentes: Isaura Torres y Juan Esteban Gallo

Manuela Aristizabal Agudelo

NOMBRE_________________________________________________________________

IDENTIFICACIÓN_________________________________________________________
1034987445

Instrucciones:
La presente actividad busca la consolidación de los conocimientos revisados hasta el momento en el curso de genética en
donde se incluirán los temas: El genoma humano y los cromosomas como base de la herencia, estructura del DNA y los
cromosomas, características del DNA mitocondrial, organización del genoma humano, variación genética, bases de datos,
técnicas moleculares y técnicas citogenéticas y clasificación de anormalidades cromosómicas.

1
Para realizar una extracción de ácidos nucleicos, se requiere un flujo de trabajo que facilite obtener el material genético de
alta calidad.

-Realice un flujograma que permita describir el flujo de trabajo requerido para obtener Ácidos nucleicos (DNA/RNA) de
alta calidad.

En su respuesta incluya:

-Los tipos de muestra que puede usar para extraer ácidos nucleicos
-Al menos 3 métodos de extracción y un breve resumen de cómo funcionan
-Los parámetros de calidad que deben cumplir los ácidos nucleicos

2
En que consiste el dogma de la biología molecular y en qué casos se puede cambiar esa dirección de este dogma. Realice
su propio gráfico que lo represente.

3
La siguiente imagen corresponde a una electroforesis en gel de agarosa de muestras de DNA genómico recién extraídas a
partir de sangre periférica. Interprete los resultados obtenidos en las muestras analizadas, relacionados con una de las
características de calidad de este ADN. ¿Considera que este DNA cumple con la calidad requerida? ¿es apto para su análisis
mediante una prueba molecular útil en el diagnóstico de enfermedades?, es posible saber si es DNA de alto peso molecular?
Sustente su respuesta.

Difuso:no esta bien

 Punto 1.

obtener muestra

BlOPSIA Aspirado sangre de Hisopado

sangre periferica medula bucal
talon

Recuperar 6. blancos Fresca Embebida en

en salina parafina

Gradiente de densidad Fragilidad Quitar

con
ficoll OSMOTICA parafina
con xileno

lava
Separa s.P
para sacarlos rompe C.R, se
6.B
y solo quedan

Hacer extracción acidos nucleicos

ADN ADN mitocondrial ARN

Aislamiento
organico

salting fend cloroformo

out

usa sol salina adiciona fend eloroformo para

separar ADN de proteinas
para precipitar
proteina dejando
ADN en solucion
Punto 2

5) 3
Cadena sentido

5'
cadena antisentido (ropial
3 El dogma dice que la

3 5. Transcripcion informacion genetica va

5' s' ARN en una misma direccion
mensajero
y slempre termina en la
5' 31 Traduccion formacion de proteinas
codon

met
lys Pro Polipeptido (proteinal

El dogma no siempre se comple

Retrotranscripción:Hay retrovirus que la info genetica va de ARN a ADN

Y
have proceso de retrotranscripcion, permite que ARN viral se cople a ADN
para meter
al genoma del huesped

Edicion ARN:la secuencia de ARN se modifica antes de hacer proteinas

Punto 3

Evaluacion calidad:
Integridad:mostrar banda unica
y
cara en el
gen
Tamaño: si la banda esta de igual famario que los marcadores de peso eso indica que esta bien

· ADN degradado: se ve banda difusa

4

Paciente femenina de 5 años, con sospecha de síndrome de Rett.

-Determinar cuales son los genes relacionados con la enfermedad, con sus respectivos códigos de OMIM.
-Determinar que prueba se ordena para el estudio de Síndrome de Rett cual sería la prueba genómica ideal para diagnosticar
esta enfermedad.
-Cual seria la muestra que se debe tomar para realizar dicha prueba?

5
Se identifica la siguiente variante por secuenciación de exoma completo.

MECP2 NM_001110792.2 c.844C>T (rs61750240) Heterocigota p.Arg282* Exon 3 de 3

Basado en la información de la variante previamente descrita, identifique lo siguiente:

Cual es el nombre del gen y en que cromosoma se encuentra?

El tipo de cambio es transversión o transición?
El cambio es sinónimo, missense o nonsense?
Cual sería su clasificación basada en criterios ACMG?

6
La siguiente imagen corresponde a un gel de agarosa al 2% en donde se están analizando muestras de pacientes para la
detección de una mutación puntual mediante un ensayo de PCR convencional.
Luego de ejecutar la PCR con los primers específicos para esta prueba se observa el siguiente resultado (MW: molecular
weight, marcador de peso molecular).

Analice e interprete los resultados.

¿Que observa en el corrido electroforético en los pacientes 1 a 7? DCR multiple
¿Fue útil esta PCR para la detección de la mutación puntual? No, tiene varias regiones
¿Considera que la prueba ha sido bien ejecutada? o ¿Cuál o cuáles mejoras haría para obtener resultados concluyentes?
No
yo que -

PCR multtone
Varios res
4.

Senes involucrados:MECP2 372750

*

Prueba:Hay que hacer una secuenciacion para ver si hay mutaciones en MECP2, usando sanger o NOS

Muestra:Muestra de ADN partir de

a
sangre periferica

A)Nombre:MECP2 Cromosoma:X
b)cambio citosina por timina Cambio entre pirmidinas:Transicion)

pirimidina Pirimidina

C) El cambio es nonsense porque se produce codon de parada antes de tiempo, genera proteina truncada

d) Patogenica
7
Realice una tabla comparativa de semejanzas y diferencias, ventajas y desventajas de la PCR convencional, Vs la PCR en
tiempo real.
Haga referencia a los métodos de detección y tipos de sondas usadas.

8
La siguiente figura ilustra la detección de la mutación E8SJM en el gen LIPA, por PCR en tiempo real (Taqman), para el
estudio de la enfermedad por almacenamiento de steres de colesterol de los alelos salvaje/wild type (verde) y mutado (rojo)
para la mutación E8SJM. La curva morada representa el control negativo de la reacción. La amplificación de los alelos
salvajes se realiza con la pareja de primers 1 y la amplificación del alelo mutado se realiza con la pareja de primers 2.

Describa brevemente en que consiste la enfermedad por almacenamiento de steres de colesterol-

Analice la figura y concluya sobre cada una de las curvas obtenidas en la PCR en tiempo real, determine e interprete los
valores CT y describa la utilidad de cada señal de amplificación en esta figura.

Alelo salvaje: ct bajo

Alelo mutado: Italto
Control negativo no esta contaminaco
Genotipo del paciente para esta mutación (Ej. Wildtype, Heterocigoto, Homocigoto):

9
Realice la explicación del siguiente flujo de trabajo realizado para el procesamiento de pruebas de secuenciación de nueva
generación (NGS). En la flecha roja, explicar que proceso bioinformático se debe realizar a los reads NGS para poder ser
analizados.
7)
10
Analiza los siguientes cariotipos y determina la nomenclatura citogenètica de los hallazgos obtenidos (ploidía, género, y
anomalía genética, si existe). Trate de determinar la patología compatible con cada cariotipo y describe brevemente algunas
características clínicas de manera general.

Trisomia del 18: S. edwards

sexo:masculino

>Trisomia () 21:S. down

>SeXO: Masculino

<deleccion
brazo corto

>sexo:masculino >sexo:femenino

11
Completa la siguiente tabla con la interpretación de las imágenes arrojadas por la prueba FISH. Determina el patrón
citogenético e información que creas relevante.
Sonda Imagen del fish Tipo de patrón
citogenético-FISH
Roja: CEP7 TrISOMIa
Verde: CEP17
Sondas centroméricas Anerploidia
Alteracion #cromosomas

Roja: RUNX1
Verde: ETV6 Amplificacion
Sondas fusión
Alteracion numerica con locus especifico

Roja: CEP7
Verde: CEP17
Sondas locus específica Tetraplo, dia
Perdida
ganancia
o
 ABL (9q34)
BCR (22q11)
Sondas fusión Traslocacion

Verde: CEN17
Roja: Her2 Amplificacion
Sonda locus específica

Verde: CMID
Roja: TCARD
Sonda locus específica Traslocacion

12

Se encuentran las siguientes variantes.

LDLR, NM_000527.5, g.19:11116201: G>A c.1694G>A, Heterocigota. p.Gly565Asp, Exón 11 de 18

Cual es el nombre del gen y en que cromosoma se encuentra? low density lipoprotein receptor (C19)
El tipo de cambio es transversión o transición? transicion
El cambio es sinónimo, missense o nonsense? missense
Cual sería su clasificación basada en criterios ACMG.
13
a) Lea y Analice la siguiente historia clínica y correlacione con el examen genético realizado a la paciente.
Realice un comentario al respecto.
b) Cual considera que seria la siguiente prueba genética que le haría a su paciente con el fin de aclarar el
diagnóstico. Justifique su respuesta.
13) Examen fue bandeo o para identanomalis en #y estructura, delecciones, duplicaciones
P.
genetica para confirmar:fish (locus especificol
14
a) Lea y Analice la siguiente historia clínica y correlacione con el examen genético realizado a la paciente.
Realice un comentario al respecto.
b) ¿Considera que este resultado es suficiente para realizar un diagnóstico? ¿Si pudiera solicitar una prueba
genética adicional cual pediría?

herramienta clinica postnatal es fish para

Solicitar Array primera
ver naturaleza preciso
 15
a) Describa las diferencias entre un cariotipo, FISH, Sanger, NGS Illumina y Oxford Nanopore (3rd gen
sequencing).
b) Entender las diferencias en las resoluciones de cada prueba, es decir, la capacidad de visualizar o conocer
las variaciones genéticas presentes en una muestra. Ejemplo: ¿Se pueden ver mutaciones especificas por
medio de cariotipo o FISH? ¿Se pueden ver variantes estructurales por secuenciación NGS o 3rd gen
sequencing? Justique su respuesta.

a) carrotipo detecta anomalias en #o forma

de ADN
Sondas fish:detectar ausencia o
precensia de
sec

NT
sanger:sec
Nos:frag simultanco
todo el
oxfor nanopore: -secuencia genoma

b)No se queche confich ni can, otipo,para mut especifica es otro coxford