Mecanismos básicos

de genética:
Replicación del ADN
 Objetivos

• Explicar el mecanismo de Replicación del ADN

• Explicar el mecanismo de reparación del ADN.
• Identificar la importancia de las proteínas que
participan en la replicación y reparación del ADN .
 ¿Qué es el ADN?

5 end
Hydrogen bond
3 end

1 nm

3.4 nm

3 end

0.34 nm
5 end

Key features of DNA structure Partial chemical structure Space-filling model

¿Cómo se complementan las bases
nitrogenadas?
¿Dónde se encuentra el ADN?
¿Cómo se encuentra organizado el
ADN dentro del núcleo?
Cromatina (ADN + proteínas)

Máxima compactación:
Cromosomas metafásicos

(Nucleosomas)

Cromosomas: ADN lineal

compactado por histonas
y otras proteínas.
¿Qué cambios sufre el ADN durante el ciclo
celular?
 ¿Qué cambios sufre el ADN durante el ciclo celular?

Figure 12-20 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 ¿En qué consiste la replicación del ADN?

5’ 3’

A T
C G
T A

3’A T5’

(a) G C parental
Molécula

Empezamos con una molécula de ADN,

compuesta por dos cadenas
 5’ 3’ 5’ 3’

A T A T
AC TG C G

C T GA T A
TA AT 3’A T 5’
3’ 5’
AG T C G Separación deC
(b)
(a) Molécula parental
G C las cadenas

Las dos cadenas de ADN se separan

 Resultado: Dos moléculas de ADN idénticas a la parental

5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
A T A T A T A T
A
C T
G C G C G C G
CT GA T A T A T A
TA AT A T A T A T
AG TC G C G C G C
G C 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’
3’

La replicación del ADN es semiconservativa

 ¿En qué parte del ADN comienza la
replicación?
Hebra parental (molde)
Origen de replicación (ORI) 0.25 µm
Hebra hija (nueva)

Burbuja Horquilla de replicación

Dos moléculas de ADN hijas

En eucariontes, la replicación del ADN empieza en muchos En esta microfotografía (MET), son visibles
sitios a lo largo del molécula gigante de cada cromosoma tres burbujas de replicación a lo largo del ADN
de una célula cultivada de hamsyer chino
 Panorama

Cadena Origen de replicación Cadena

avanzada atrasada

5 Cadena atrasada 3
3 5
5 3
3 5
Cadena
avanzada
Direcciones generales
de la replicación

La replicación del ADN es bidireccional

¿Cómo comienza la replicación del ADN?
Primasa

3
Topoisomerasa
5 RNA
3 primer
5
3

Helicasa

5
Proteínas de unión a
cadena simple
 ¿Qué proteínas participan en
Replicación del ADN?
• Helicasa
• Proteínas de Unión a cadena simple
• Topoisomerasa
• Primasa
• ADN polimerasa
• Ligasa
¿Cómo se sintetiza la nueva cadena de
ADN?
• Enzimas llamadas ADN polimerasas catalizan el
crecimiento del nuevo ADN en la horquilla de replicación.

• Cada nucleótido que se agrega es un nucleósido trifosfato

• La tasa de crecimiento es cerca de 500 nucleotidos por

segundo en bacterias y 50 por segundo en células
humanas.
 Hebra nueva Hebra molde
Extremo 5 Extremo 3 Extremo 5 Extremo3

Azúcar
Base
Fosfato

ADN polimerasa
Extremo 3

Extremo 3
Pirofosfato

Nucleósido
trifosfato Extremo 5 Extremo 5
 Estructura antiparalela
Las dos hebras orientadas en direcciones opuestas
La estructura antiparalela afecta la replicación. Las ADN polimerasas sólo agregan nucleótidos
en el extremo 3’ de la cadena de ADN en crecimiento.
 3
Parental DNA 5
Hebra líder

5
3
Okazaki
fragmentos
Hebra retrasada

3
5
DNA pol III

Hebra molde

Hebra líder
Hebra rezagada

Hebra molde
DNA ligasa

Dirección general de la replicación

https://www.youtube.com/watch?v=WtRA-NsERKY
 REPASEMOS
• Las helicasas son enzimas que desenrollan y separan
las cadenas de ADN parental en las horquillas de
replicación.
• Las proteínas que se unen a cadenas simples, single-
strand binding proteins, se unen a la horquilla y
estabilizan el ADN de cadena simple.
• La topoisomerasa (girasa) corrije el “sobreovillado” al
frente de la horquilla, rompiendo, girando, y
volviendo a unir las hebras de ADN.
• Las ADN polimerasas no pueden iniciar la síntesis de
un polinucleótido; sólo pueden añadir nucleótidos al
extremo 3.
• La cadena de nucleótidos inicial es un cebador corto
de ARN.
• La primasa inicia una cadena de ARN a partir de cero
y añade ribo-nucleótidos uno a la vez utilizando el
ADN parental como una plantilla.
• El cebador es corto (5-10 nucleótidos de largo), y el
extremo 3 sirve como el punto de partida para la
nueva cadena de ADN.
• A lo largo de una de las hebras molde de ADN,
llamada hebra líder, la ADN polimerasa sintetiza la
hebra complementaria de manera continua,
moviéndose hacia la horquilla de replicación.

• Para alargar la otra nueva hebra, llamada la hebra

rezagada, la ADN polimerasa trabaja en dirección
contraria a la horquilla de replicación.

• La hebra rezagada se sintetiza como una serie de

segmentos llamados fragmentos de Okasaki, que se
unen por la ADN ligasa.
 Panorama

Cadena Origen de replicación Cadena

avanzada atrasada

5 Cadena atrasada 3
3 5
5 3
3 2 5
1 Cadena
avanzada
Direcciones generales
de la replicación
• ADN polimerasa III sintetiza contínuamente la hebra
líder y alarga los fragmentos de Okasaki.

• ADN polimerasa I remueve el primer del extremo 5

de la hebra líder y fragmentos de Okasaki,
reemplazando el primer con ADN y agregándolo hacia
el extremo 3’.

• ADN ligasa une el extremo 3 del ADN que reemplaza

el primer con el resto de la hebra líder y también une
los fragmentos de la hebra rezagada.
 Dirección en general de la replicación Hebra Hebra
Origen de replicación
líder rezagada

Proteínas de unión
Hebra Hebra
a hebra simple Visión general
rezagada líder
DNA pol III
Helicasa
Hebra líder

DNA ligasa
5 Horquilla de replicación
3 DNA pol I
Primasa
Parental DNA DNA pol III Hebra
Primer
rezagada
3
5

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21751/figure/A3203/?report=objectonly
 Reparación del ADN

• Es un proceso constante en la célula.

• Esencial para la supervivencia celular.
• Se producen unas 500.000 lesiones/molécula/día.
• Corrige rápidamente cualquier daño en la estructura
de ADN.
 Existen múltiples maneras para dañar el
ADN

Agentes Físicos:

• Radiación UV solar  Dimerización de

pirimidinas (T·T, C·T y C·C.)

• Rayos X y gama  Ionizan a las moléculas que

rodean el ADN generando especies altamente
reactivas que rompen una o ambas cadenas.
 Agentes Químicos
• Naturales P. Ej. Toxinas que forman aductos covalentes
con el ADN
• Sintéticos Etilmetanosulfonato EMS (acetilación),
Nitrosaminas (metilación)

Metilación o acetilación de las bases

en los átomos (O/N) que participan
en la formación de puentes de H,
desestabiliza la doble hélice de DNA
y hace esa zona susceptible a
mutación.

Y estos daños solamente conducen a una mutación cuando no son

reparados
 Reparación del ADN

A medida que la célula envejece, la tasa de reparación

de ADN disminuye hasta que no puede mantener el
ritmo de los daños al ADN.
La célula pasa a uno de estos destinos:
1. Un estado irreversible de inactividad, llamado
senescencia.
2. Muerte celular programada, llamado apoptosis.
3. Carcinogénesis, o formación de cáncer.
¿Qué mecanismos de reparación
del ADN se utilizan?
• Reparación puntual de errores en el
apareamiento de nucleotidos.
• En la reparación por pérdida de nucleótidos,
las enzimas cortan y reemplazan los
fragmentos de ADN.

https://www.youtube.com/watch?v=vP8-5Bhd2ag
Los errores en la molécula de ADN completa son muy
pocos, de hecho encontramos 1 cada 109 bases.

Sin embargo, durante el proceso de duplicación la tasa

de error es bastante mas alta, 1 / 100.000 (1x105)
bases puede estar mal.

¿Cómo se logra esto?

Mecanismo de reparación general:
LE 16-17
Un dímero de timina
Distorsiona la molécula de ADN.

Una enzima nucleasa corta

el ADN dañado en dos puntos
y se remueve la sección dañada.

Nucleasa

ADN Síntesis de reparación

polimerasa por una ADN polimerasa completa
los nucleótidos faltantes.

ADN
ligasa
ADN ligasa sella el extremo
libre de la hebra nueva de ADN con
la hebra vieja, completando la
cadena.
 5
Final de las hebras Cadena adelantada
parentales Cadena rezagada
3

Último fragmento Fragmento previo

RNA primer
Replicando los
Cadena retrasada 5
3
extremos de las
Primer removido pero Remoción de primers y reemplazo moléculas de ADN.
que no puede ser con ADN donde hay disponible
reemplazado un extremo 3
con ADN porque no
hay un extremo 3
para la ADN polimerasa 5 El problema…….
3
Segunda ronda
de replicación

5
Nueva cadena adelantada 3
Nueva cadena adelantada 5
3
Posteriores rondas
de replicación

Moléculas hijas cada

vez más cortas
Solución: Telomerasa
TELOMERASA
• Las moléculas de ADN de los cromosomas eucariontes
tienen en sus extremos secuencias nucleotídicas
llamadas telómeros .

• Telómeros no evitan el acortamiento del ADN, pero

posponen la erosión de genes en los extremos del ADN.
LE 16-19

1 µm
• ¿Qué pasaría si los cromosomas de las células
germinales se hacen cada vez más cortos en
cada ciclo celular y se pierden genes esenciales?
http://www.youtube.com/watch?v=vtXrehpCPEE

http://www.youtube.com/watch?v=AJNoTmWsE0s&list=PLA746AB43B30BB91E

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21650/

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26850/