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es 2
Los protocolos de identificación

El tipo de muestra y la solicitud que la acompaña determinan el

procedimiento de identificación que se debe aplicar. Distinguimos:
Tinción de Gram: permite diferenciar grampositivos de
gramnegativos y observar su morfología (cocos, bacilos, etc.).
Cultivo: según el resultado de la tinción, se utilizan diferentes
medios.
Observación de colonias: la observación macroscópica ofrece mucha
información.
Pruebas bioquímicas: se realizan las necesarias para llegar a la
identificación.

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Cocos grampositivos y gramnegativos

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Cocos grampositivos y gramnegativos
Cocos grampositivos
Staphylococcus spp.

Se presentan en racimos en la tinción de Gram y son catalasa-

positivos.
Son virulentos y responsables de muchas enfermedades, aunque
algunas especies son parte de la microbiota.
S. aureus:
Es las especie más virulenta.
Coagulasa positiva.
Crece en medios hasta 10 % de NaCl.
SARM: S. aureus resistente a la meticilina que causa importantes
infecciones nosocomiales.

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Cocos grampositivos y gramnegativos
Cocos grampositivos
Streptococcus spp.

Forman cadenas en la tinción de Gram y son catalasa-negativos.

Requieren medios enriquecidos con sangre o suero.
Alfa-hemolíticos: S. Pneumoniae:
Soluble en bilis.
Sensible a la optoquina.
Beta-hemolíticos: identificación mediante teste de CAMP:
Grupo A: S. pyogenes (sensible a bacitracina).
Grupo B: S. agalactiae.
No hemolíticos: S. mutans, S. sanguis (patógenos oportunistas).
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Cocos grampositivos y gramnegativos
Cocos grampositivos
Enterococcus spp.

Se presentan en cadena en la tinción de Gram, son catalasa-negativos,

oxidasa-negativos y gamma-hemolíticos.
Causan infecciones urinarias, bacteriemias, endocarditis, diverticulitis y
meningitis.
Presentan un elevado nivel de resistencia a antibióticos.
Especies más importantes:
E. faecium.
E. faecalis.

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Cocos grampositivos y gramnegativos
Cocos gramnegativos

Género Neisseria: forma diplococos, oxidasa y catalasa

positivas.
N. meningitidis: provoca meningitis, neumonía y
pericarditis. Muestra: LCR.
N. gonorrhoeae: provoca gonorrea y oftalmia
neonatal. Muestra: exudados vaginales/uretrales.
Diferente utilización de carbohidratos.
Siembra en agar sangre o chocolate (no patógenas)
o Thyer-Martin (patógenas).
Género Kingella:
K. Kingae, presente en el tracto respiratorio.
Puede causar enfermedades graves en niños.
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Bacilos grampositivos
Bacilos grampositivos esporulados
Bacillus spp.

La mayoría tienen flagelos.

Forman endosporas.
Se encuentran en la naturaleza y pueden ser
parte de la flora.
Generalmente, son contaminantes.
Especies patógenas:
B. anthracis: ántrax respiratorio e intestinal.
Inmóvil, penicilina S.
B. cereus: intoxicaciones alimenticias.
Móvil, penicilina R.
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Bacilos grampositivos
Bacilos grampositivos no esporulados
Listeria spp.

Cocobacilos y catalasa-positivos.
Fermentan azúcares y son anaerobios facultativos.
De 1 a 5 flagelos pericítricos que se inactivan por encima de 37 °C.
L. monocytogenes: patógeno humano.
Medio selectivo agar para Listeria.

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Bacilos grampositivos
Bacilos grampositivos no esporulados
Nocardia spp.

Forma filamentosa.
Inmóviles.
Aerobias estrictas.
Amplio rango de temperaturas de crecimiento.
Catalasa-positivas.
Crecen en medios comunes, pero son de crecimiento lento.
Patógenos oportunistas en pacientes inmunodeprimidos.

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Bacilos grampositivos
Bacilos grampositivos no esporulados
Corynebacterium spp.

En la tinción de Gram se observan como letras

chinas.
Inmóviles y no esporulados.
La especie más importante es C. diphteriae:
Causa la difteria, por la toxina diftérica.
La toxina (gen tox) se introduce mediante un
bacteriófago (virus de bacterias).
La toxina afecta a las vías respiratorias, miocardio,
sistema nervioso y los riñones.

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Bacilos gramnegativos
Enterobacterias

Son anaerobios facultativos y capaces de fermentar carbohidratos.

Forman parte de la microbiota intestinal.
Pueden provocar infecciones alimenticias por falta de higiene de los
manipuladores de alimentos (por ejemplo: salmonelosis).
Algunos brotes son provocados por la toxina producida por la
enterobacteria, que es más difícil de eliminar que las propias
bacterias.

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Bacilos gramnegativos
Enterobacterias
Identificación

Gramnegativos, oxidasa negativos, catalasa positiva.

Se diferencian según fuente de carbono utilizada:
Medio Kligler o TSI.
Pruebas IMVIC (indol, rojo de metilo, Voges-Proskauer y citrato).
Sistemas de identificación comerciales (tiras de pruebas
bioquímicas).
Pruebas rápidas de identificación de microorganismos concretos.
Pruebas serológicas (Salmonella spp.).
Identificación mediante MALDI-TOF.

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Bacilos gramnegativos
Enterobacterias

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNNF)

Incluye especies de diferentes familias.

Pseudomonas spp., Acinetobacter spp., Flavobacterium spp. y
Alcaligenes spp.
Bacilos o cocobacilos, móviles o inmóviles, no esporulados.
Aerobios estrictos.
No fermentan o no utilizan carbohidratos.
Provocan infecciones oportunistas.

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNNF)
Identificación

Los BGNNF son:

P. aeruginosa:
El cultivo en agar Cetrimida presenta brillo nacarado, olor a uvas
y pigmentación amarillo-verdosa.
Oxidasa y catalasa positiva.
A. baumannii y A. lwoffii:
Cocobacilos gramnegativos inmóviles.
Oxidasa-negativos y catalasa-positivos.
Identificación mediante MALDI-TOF.
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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes

Crecen con dificultad en los medios comunes. Necesitan suplementos

nutricionales y atmósferas y tiempos de incubación específicos.
Haemophilus spp.
Bordetella spp.
Brucella spp.
Legionella spp.
Helicobacter spp.
Campylobacter spp.
Identificación: por pruebas bioquímicas y morfología, MALDI-TOF, o
sistemas comercializados de identificación rápida.

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Haemophilus spp.

Bacilos inmóviles, anaerobios facultativos y oxidasa-positivos.

Requieren factores X o V para su crecimiento.
H. influenzae: Encapsulado (meningitis, bacteriemia, artritis séptica,
etc.) o no encapsulado (otitis media, sinusitis, etc.)
H. parainfluenzae: bacteriemia, endocarditis, infecciones oportunistas.
H. ducreyi: chancroide (enfermedad de transmisión sexual).

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Bordetella spp.

Son cocobacilos encapsulados e

inmóviles. Se presentan en pareja o
solos. Son aerobios estrictos y no
forman esporas.
Patógenos humanos:
B. pertussis: causa la tos ferina.
B. parapertussis: variante más leve
de la tos ferina.
B. bronchiseptica: enfermedad
respiratoria en animales y
bronconeumonía en humanos.

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Brucella spp.

Son bacilos pequeños, aerobios, inmóviles, no esporulados y pueden

ser capsulados.
Son parásitos intracelulares.
Solo 3 especies infectan humanos, por contacto con animales
enfermos (zoonosis):
B. abortus.
B. mellitensis.
B. suis.
Identificación: por morfología microscópica y macroscópica, por ser
oxidasa y ureasa positivas y por pruebas inmunológicas.
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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Campylobacter spp.

Presentan forma de espiral o curva. Tienen un flagelo polar y no

forman esporas ni cápsulas.
Son oxidasa y catalasa-positivas, urea-negativas, reducen nitratos y son
sensibles al oxígeno.
Causan enfermedades diarreicas de transmisión alimentaria y
gastroenteritis.
Las especies más frecuentes son C. jejuni (subespecie jejuni) y C. coli.
Detección en muestras de heces sembradas en medios selectivos:
Incubación en microaerofilia y a 42 °C.
Prueba del hipurato: permite diferenciar entre especies.
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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Helicobacter spp.

Tienen movilidad mediante flagelos. Su número y disposición son

identificativos de especie.
Son microaerofílicos, de crecimiento lento, catalasa y ureasa-positivas.
H. pylori:
En mucosa gástrica.
Provoca gastritis y úlceras pépticas.
La muestra es la biopsia gástrica.
Se siembra en medios generales y algún selectivo.
Se puede confirmar la identificación por detección de antígeno.

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Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos exigentes
Legionella spp.

Son bacterias aerobias obligadas y nutricionalmente exigentes.

Se utilizan medios de cultivo complementados con L-cisteína y
hierro.
Bioquímicamente, son relativamente inertes.
No fermentadoras, catalasa-positivas y oxidasa variables.
L. pneumophila:
Causa la legionelosis.
Tiene 16 serogrupos.
Se aísla del tracto respiratorio.
Presenta crecimiento lento en medios selectivos (BCYE α y BMPA).

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Bacilos gramnegativos
Otros bacilos gramnegativos

Vibrio spp., Aeromonas spp. y Pleisomonas spp.:

No pertenecen a la microbiota intestinal.
Indican situación patológica.
Características:
Son anaerobios facultativos, móviles y no forman esporas.
Pueden desarrollarse en un amplio intervalo de temperaturas
(20-30 °C) y de pH (5,5-9).
Las especies patógenas son halófilas.

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Bacilos gramnegativos
Otros bacilos gramnegativos

Vibrio spp.: V. cholerae (cólera), V. vulnificus (bacteriemia, infección de

heridas y celulitis), V. parahaemolyticus (gastroenteritis, bacteriemia e
infección de heridas).
Aeromonas spp.: A. caviae, A. hydrophila, A. veronii (gastroenteritis e
infección de heridas).
Plesiomonas shigelloides (gastroenteritis y sepsis en inmunodeprimidos).
Es difícil identificarlas, ya que comparten muchas características.

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Rickettsias, clamidias y micoplasmas
Rickettsias

Causan enfermedades por zoonosis y se trasmiten a

humanos por mordeduras, picaduras o alimentos
contaminados.
Parásito intracelular obligado: no se cultiva.
Diagnóstico: por observación de bacterias compatibles
con Rickettsia spp.
Tinciones:
Coloración de Maquiavelo.
Coloración de Castañeda.
Coloración de Giemsa.
Confirmación por técnicas inmunológicas o
moleculares.
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Rickettsias, clamidias y micoplasmas
Clamidias

Presentan dos morfologías, según la etapa de su ciclo vital:

Cuerpo elemental o forma infectante.
Cuerpo reticulado o forma replicativa.
Especies patógenas: C. trachomatis (clamidiasis, linfogranuloma
venéreo, etc.), C. pneumoniae (cuadros respiratorios).
Clamidiasis:
Enfermedad de transmisión sexual muy extendida
(hombres y mujeres).
Causada por los serotipos de D a K.
Cultivo de exudados.
Confirmación por ELISA, hibridación de ADN o PCR.

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Rickettsias, clamidias y micoplasmas
Micoplasmas

Carecen de pared celular (resistentes a los antibióticos que interfieren

en la síntesis de la pared).
Algunas especies forman parte de la microbiota humana.
Contaminantes habituales de cultivos celulares.
Especies patógenas:
M. pneumoniae: causa neumonía atípica.

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Micobacterias

Presentan una pared celular muy gruesa, hidrofóbica, cerosa y rica en

ácidos micólicos. Son bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR):
Tinción Ziehl-Neelsen.
Tinción auramina-rodamina.
Inmóviles, no forman esporas y no tienen cápsula.
Son aerobias estrictas.
Los laboratorios requieren medidas adicionales de seguridad para
manejar estas bacterias.

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Micobacterias
Clasificación

Complejo tuberculoso:
M. tuberculosis.
M. africanum.
M. bovis.
Diagnóstico:
Sintomatología.
Aislamiento de la bacteria e identificación bioquímica.
Prueba de la tuberculina.

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Micobacterias
Clasificación

Lepra o enfermedad de Hansen:

M. leprae: parásito intracelular obligado.
Lepra tuberculoide (LT): lesiones localizadas.
Lepra lepromatosa (LL): lesiones generalizadas.
Diagnóstico: cuadro clínico y detección de BAAR en muestra clínica.
Otras micobacteriosis:
Micobacterias atípicas.
No tuberculosas (MNT).
Ambientales.
Oportunistas.
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Micobacterias
Tratamiento de las muestras

Muestras complicadas debido a la baja concentración de bacterias.

Concentración de muestras:
Mejora la detección microscópica y el cultivo.
Se realiza por centrifugación.
Descontaminación de la muestra:
Se realiza siempre que haya sospecha de contaminación.
Se intentan eliminar los contaminantes minimizando la afectación a
las micobacterias.
Si la muestra es mucosa, hay que homogeneizar antes de
descontaminar.

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Micobacterias
Identificación

Se basa en las tinciones y el estudio microscópico para detectar BAAR.

La interpretación de los resultados va en función de los BAAR
observados:

Es indispensable aislar la micobacteria para poder realizar el

antibiograma:
Tiempos de incubación largos (5-8 semanas).
Sistemas automatizados.
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Bacterias anaerobias
Principales bacterias anaerobias

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Bacterias anaerobias
Principales bacterias anaerobias

Veillonella spp.: Forman parte de la microbiota bucal e intestinal. Pueden

causar ostomielitis o endocarditis.
Bacteroides spp.: Forman parte de la microbiota gastrointestinal, vaginal
y bucal. Causan infecciones oportunistas.
Fusobacterium spp.: Forman parte de la microbiota del tubo digestivo.
Causan enfermedades periodontales u orofaringitis.
Peptostreptococcus spp.: Forman parte de la microbiota bucal, de la piel,
y los aparato digestivo y excretor. Son patógenos oportunistas.
Actinomyces spp.: Patógenos oportunistas. Forman abscesos en la boca,
los pulmones, etc.
Clostridium spp.: C. tetani (tetanos), C. botulinum (botulismo), C.
perfingens (de diarrea a gangrena gaseosa), etc.
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Bacterias anaerobias
Tratamiento de las muestras
Identificación

Hay que comprobar que las condiciones de transporte son las adecuadas.
Transporte en anaerobiosis.
Medios de cultivo:
Agares selectivos y no selectivos para diferentes anaerobios.
Incubación en anaerobiosis (jarras, cámaras, etc.).
Tinción de Gram:
B. fragilis: bacilos pleomórficos débilmente teñidos.
Fusobacterium spp.: bacilos gramnegativos finos y fusiformes.
C. perfingens: bacilos grampositivos gruesos, rectangulares y sin esporas.
Actinomyces spp.: bacilos grampositivos ramificados.
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Bacterias anaerobias
Identificación

La identificación final se basa en pruebas bioquímicas:

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Bacterias anaerobias
Identificación

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