Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann

Facultad de Ciencias - E.A.P- Biologa Microbiologa

BACTERIOLOGA

Bacilos Gram
negativos no
fermentadores

Legionella
Haemophilus
Bordetella
Copyright 2014 - Dr. Csar Cevallos Columbus

Familia: Legionellaceae
Los estudios taxonmicos han demostrado
que la familia Legionellaceae se compone de
un gnero, Legionella, que incluye 48
especies y ms de 70 serogrupos.
L. pneumophila es responsable de ms del
85% de las infecciones; los serotipos 1 a 6
son los aislados ms a menudo

Gnero: Legionella
Legionella es una bacteria ambiental. Su hbitat es las
aguas dulces de lagos y ros. Se encuentra en bajas
concentraciones en el plancton al interior de protozoos
como Hartmannella y Acanthamoeba, o formando parte
de la biopelcula. A travs de las redes de agua potable,
accede a equipos tales como torres de refrigeracin,
sistemas centralizados de agua caliente, equipos de
aerosolterapia y sistemas de agua climatizada entre
otros. A partir de estas instalaciones, Legionella puede
infectar al hombre por inhalacin de micro-aerosoles
contaminados con la bacteria.

Gnero: Legionella
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Bacilos gramnegativos, delgados y pleomorfos

Forma: Tamao: miden entre 0,3 y 0,9 x 2 m.
Medios artificiales: son muy pleomorfos.
Aerobios obligados
Necesidades de crecimiento exigentes.
Aislamiento primario: medios de cultivo complementados
con L-cistena y hierro.
7. Casi todas las especies son mviles
8. Catalasa y oxidasas positivas, lican gelatina y no reducen
nitratos ni hidrolizan urea.
9. L. pneumophila es oxidasa (+); otras Legionellas son
oxidasas variables.
10. En muestras clnicas: se tien con la tincin de plata de
Dieterle.
11. No fermentadores y obtienen la energa del metabolismo de
los aminocidos.

Gnero: Legionella
Cultivo
1. Las legionelas crecen en medios de cultivo complejos, como el
Medio BCYE (Agar extracto de levadura y carbn animal con
-cetoglutarato, suplementado con polimixina B, anisomicina y
cefamadol.).
2. Incubacin: 72 horas a 35C
3. Colonias: redondas o aplanadas, bordes ntegros y variables en
color.
4. Antgenos: especificidad antignica compleja.
5. Productos extracelulares: proteasas, lipasas, fosfatasas,
DNAsa, y RNAsa.
6. Metaloproteasa: actividad hemoltica y citotxica. Factor de
virulencia?

Especies del gnero Legionella

Especies

Neumona

Fiebre de Pontiac P. Bioqum

L. pneumophila

Serogrupos 1 y 6

L. micdadei

L. gormanii

L. dumoffii

L. bozemanii

L. longbeachae

L. wadsworthii

L. jordanis

L. feeleii

L. oakridgensis

Hipurato (+)

MECANISMOS DE TRANSMISIN
La transmisin de la infeccin se realiza por va area mediante la
inhalacin de aerosoles o gotitas respirables y tambin por
microaspiracin de agua contaminada. Para que se produzca
infeccin en el hombre se tienen que dar una serie de requisitos:
Que el microorganismo tenga una va de entrada a la instalacin.
Que se multiplique en el agua hasta conseguir un nmero de
microorganismos suficientes como para que sea un riesgo para
personas susceptibles.
Que se disperse en el aire en forma de aerosol a partir del
sistema.
Que sea virulento para el hombre.
Que individuos susceptibles sean expuestos a aerosoles con la
cantidad suficiente de Legionella viable.

MECANISMOS DE TRANSMISIN

RELEVANCIA EN SALUD PBLICA

Desde el punto de vista de la salud pblica, su relevancia
viene dada por los siguientes determinantes:
La frecuente presentacin en forma de brotes.
Su alta letalidad en personas de edad avanzada y/o con
enfermedades respiratorias o que comprometan su
sistema inmunitario.
El fuerte impacto econmico en el sector del turismo.
La posibilidad de prevencin mediante el control de las
instalaciones que utilizan agua.

Legionella pneumophila: PATOGENIA

La enfermedad del tracto respiratorio causada por las
especies de Legionella se desarrolla en sujetos vulnerables
que inhalan partculas infecciosas.
Las legionelas son parsitos intracelulares facultativos que
se pueden multiplicar en los macrfagos alveolares, los
monocitos y en amebas de vida libre.
El ciclo de replicacin comienza con la unin del
complemento a una protena porina de la membrana externa
y el depsito del componente de complemento C3b en la
superficie bacteriana.

Legionella pneumophila: PATOGENIA

Esto permite que la bacteria se una a los receptores CR3
del complemento de los fagocitos mononucleares, despus
de lo cual los microorganismos entran en los mismos
mediante un proceso de endocitosis.
Las bacterias no mueren en las clulas por exposicin al
superxido txico, perxido de hidrgeno o radicales
hidroxilo como consecuencia de la inhibicin de la unin de
los fagolisosomas.
Los microorganismos proliferan en su vacuola intracelular y
producen enzimas proteolticas, fosfatasas, lipasas y
nucleasas, que matan la clula anfitriona cuando se lisa la
vacuola.

Legionella pneumophila: PATOGENIA

CUADRO CLNICO
LA FIEBRE PONTIAC se presenta con un cuadro febril con
dolores articulares y musculares (artromialgias) y afectacin
del estado general, acompaado de fiebre, tos, dolor torcico,
diarrea y confusin. En general es una enfermedad
autolimitada con una clnica leve que evoluciona a la
curacin.

NEUMONA POR LEGIONELLA (Enfermedad del legionario).

La presentacin clnica puede variar desde una neumona
atpica a una forma clsica (rganos afectados: rin, hgado,
TGI, SNC. Sntomas: fiebre elevada, tos, dolor muscular,
escalofros, cefalea, dolor torcico, esputos, diarrea,
confusin o alteracin del estado de conciencia.

Legionella pneumophila

Descripcion: Condensacin pulmonar bilateral de predominio en lbulos

superiores. El patrn radiolgico es predominantemente intersticial. La
neumona por Legionella puede originar cualquier patrn radiolgico. Debe
sospecharse en inmunodeprimidos, especialmente si cursa con disnea, diarrea,
hiponatremia, etc. No obstante la clnica puede ser muy inespecfica.

Tincin de Gram de Legionella pneumophila que crece en agar tamponado

con extracto de levadura de carbn. Obsrvense las formas pleomorfas
caractersticas de esta bacteria. (Por cortesa de la Dra. JanetStout; Pittsburg,
Pensilvania)

Legionella pneumophila
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Muestras: lavado bronquial, lquido pleural, biopsia pulmonar o
sangre.
Frotis: No Gram. Es vlida tincin de plata de Dieterle para
muestras de tejidos.
Tincin argntica (Gomori metenamina de
Cultivo: agar BCYE
Pruebas de Identidad:

plata, Dieterle). Es una tcnica difcil de

efectuar,
reservada
a
los
laboratorios
especializados, til en la deteccin de
Pneumocytis carinii, Legionella, Treponema,
hongos, rickettsias, y microorganismos asociados
a la enfermedad por araazo de gato.

1. P. bioqumica (hipurato).
2. P. inmunolgicas: no especficas.
3. P. serolgicas: sensibilidad de 60 a 80% y especificidad de 95 a
99%.

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Legionella

NOTA: Las placas deben estar una hora a temperatura ambiente

antes de sembrar. Para crecimiento de mayor tamao incubar en
atmsfera de CO2.

Legionella pneumophila
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Cultivo: Un informe de cultivo negativo, slo se emite despus de
10 das de incubacin y revisin peridica.
Inmunofluorescencia directa: detecta Legionella en muestras
respiratorias y tejidos en dos a cuatro horas; sin embargo, puede
dar falsos positivos por reacciones cruzadas. Sensib: 25 a 66%
Deteccin de antigenuria: Es una prueba rpida que utiliza
inmunocromatografa de membrana para detectar antgenos en
orina en 15 minutos. Aunque slo detecta L. pneumophila
serogrupo 1. Sensibilidad: 56 a 97%
Amplificacin de cidos nucleicos: se han implementado RPC
tradicional y en tiempo real a partir de muestras respiratorias,
orina, suero, y leucocitos. Sensibilidad: 30 a 86%.

FAMILIA
PASTEURELLACEAE
Gneros: Haemophilus
Pasteurella

FAMILIA: PASTEURELLACEAE

Coco bacilos Gram negativos.

Son pleomrficos
Inmviles.
Tamao: 0.4 mm de ancho x 1 mm de largo.
Disposicin: a menudo en cadenas cortas y bacilos
aislados o bien filamentosos
No forman esporas.
No posee fimbrias
Algunas espacies son capsuladas.
Anaerobias facultativas
Temperatura ptima de crecimiento a 37C.

FAMILIA: PASTEURELLACEAE
GENERO: Haemophilus
ESPECIES:

Haemophilus influenzae
Haemophilus parainfluenzae
Haemophilus haemoliticus
Haemophilus parahemoliticus
Haemophilus aphrophilus
Haemophilus paraphrophilus
Haemophilus segnis
Haemophilus ducreyi
Haemophilus aegyptus

GNERO: Haemophilus

Gnero: Haemophilus
1. Bacilos Gram negativos, pequeos, pleomrficos.

2. Integran la flora normal de las mucosas del aparato

respiratorio superior.
3. Requerimiento nutricional: Factores sanguneos: V (NAD)
y X (Hemina: requerido por H. influenzae o Protoporfirina:
requerido por H. aegyptus )
4. Factor V (NAD) no lo proporciona el agar sangre
convencional. Se requiere sembrar a S. aureus para
proporcionar el Factor V (Fenmeno de satelitismo).

Haemophilus influenzae
Es una bacteria pequea, inmvil y no esporulada. Tiene la
estructura tpica de un GRAM- y adems posee las protenas
de la membrana externa (OMP). Algunas cepas presentan
cpsula, las mas virulentas, mientras que otras no (no
tipificables). Las que poseen el polisacrido capsular tipo
b son las que se asocian a infeccin grave.

Estructura Antignica
El Haemophilus influenzae: 3 factores antignicos.
1. El polisacrido capsular
2. El LPS (endotoxina)
3. La protena de la membrana externa (proteasas de Ig
A humanas).

Criterios de clasificacin: H. influenzae

Clnico: origen invasor (sangre, LCR, lquido articular,
pericrdico, tejidos blandos, etc) versus no invasor (superficie de
mucosas).
Serotipificacin de a-f segn la composicin antignica de la
cpsula.
Biotipificacin de I a VIII: basado en pruebas de: indol, ureasa,
ornitina decarboxilasa.

Subtipificacin: en base a protenas de membrana externa

(PMO), se describen 21 subtipos.
Anlisis de genes CAP (capsulares): se describen 14 patrones de
restriccin.
Tipo electrofortico, basado en la presencia de aloenzimas.

PATOGENIA de H. influenzae
MENINGITIS: es la manifestacin ms comn y afecta a nios
menores de 2 aos. Primero coloniza la faringe y luego migra al
igual que el S.pneumoniae.
EPIGLOTITIS: es una obstruccin respiratoria aguda,
potencialmente letal. Afecta a nios y adultos. Comienza con
odinofagia, fiebre, disnea y obstruccin aguda debido a la
tumefaccin de la epiglotis.
NEUMONIA: frecuente en nios de 4 meses a 4 aos.
CELULITIS
ARTRITIS SEPTICA: es la causa ms comn de artritis sptica en
nios menores de 2 aos. Hay dolor e hinchazn monoarticular.

Clnica de especies de Haemophilus

Haemophilus influenzae

Manifestaciones clnicas de infeccin invasiva por Hib

Haemophilus influenzae

Hib: colonizacin en el hombre

Cuadro Clnico
El Cuadro Clnico principal producido por H. influenzae es una
afeccin respiratoria aguda: bronquitis o neumona. En caso de
diseminacin sangunea puede producir Meningitis (El dao que
causa H. influenzae tipo b a nivel local le permite ingresar al
lquido cefalorraqudeo, primero en los ventrculos laterales y luego
en la cisterna magna. El lquido cefalorraqudeo se llena de un
exudado inflamatorio).
Otros cuadros clnicos ocasionados por Haemophilus influenzae de
otros serotipos capsulares o no tipificables son otitis media,
sinusitis, conjuntivitis, etc.

Haemophilus ducreyi
Es el agente del chancro blando, enfermedad de trasmisin sexual que
cursa con lcera genital no indurada y adenopatas inguinales. Es una
enfermedad muy poco frecuente en nuestro pas.

Haemophilus ducreyi

Tincin Gram
Chancro blando: lceras genitales

Diagnstico Microbiolgico
Muestras: Esputo, lavado bronquial, secrecin faringea, sangre,
LCR; lceras genitales, etc debern ser enviadas de inmediato al
laboratorio y procesadas en l lo ms pronto posible.
Tincin: coloracin Gram
Aislamiento: A. chocolate suplementado con factores X y V.
A. Sangre de Casman (disco bacitracina de 10 mg/ml)
A. con enriquecimiento de Fildes
Identificacin:

1) Pruebas Bioqumicas
2) Serotipificacin.

Diagnstico Microbiolgico
Cultivo: Tcnica de la estra de estafilococos.

Diagnstico Microbiolgico
Cuadro 1: Especies de Haemophilus requerimientos y actividad hemoltica

Diagnstico Microbiolgico
Cuadro 2: Pruebas Bioqumicas de las especies de H. influenzae y H.
parainfluenzae

Gnero: Bordetella
El gnero Bordetella comprende tres especies:

1. B. pertussis es el agente de la tos convulsa o

pertusis;
2. B. parapertussis y B. bronchiseptica causan
enfermedad con mucha menor frecuencia.

Gnero: Bordetella
Son bacilos Gram negativos cortos, ocasionalmente presentan
formas filamentosas,
Son capsulados y no esporulados
Presentan grnulos metacromticos bipolares al ser teidos con
azul de toluidina.
Nutricin: son exigentes. Aislamiento inicial: agar sangre, con
papa, glicerol y carbn activado (Bordet Gengou).

Son muy sensibles a las temperaturas extremas y a la

desecacin.
La incubacin se lleva a cabo a 35C durante 3 a 7 das en
ambiente hmedo, luego de lo cual las colonias se hacen
visibles presentando un aspecto de "gotas de mercurio".

Gnero: Bordetella
La hemlisis es caracterstica de las cepas virulentas.
Es un germen aerobio estricto.

No requiere de factores V ni X.
Metabolismo: son relativamente inactivos
No fermentan prcticamente azcares,
No reducen nitratos,
No producen indol,
No poseen ureasa
No utilizan el citrato como fuente nica de carbono.

Bordetella pertussis
Es un cocobacilo, aerbico, no formador de esporas y Gram-negativo.
Coloniza las vas respiratorias de los seres humanos, causando la tos
ferina.
Produce un nmero de factores de virulencia,
incluyen:
Toxina de la tos ferina,
Toxina adenilato ciclasa,
Hemaglutinina filamentosa,
Fimbrias, citotoxina traqueal,
Pertactina y dermonecrotoxina.

lo

cual

El locus bvg comprende los genes de transcripcin BvgA y BvgS, que

regula la expresin de estos factores y la de los genes del sistema de
secrecin de tipo III en respuesta a ciertos estmulos ambientales.

Bordetella pertussis
Adenilato ciclasa (CyaA): toxina invasiva. La adenilato presenta
doble actividad: ciclasa y hemoltica.
Pertactina: protena de la membrana externa (69 kDa), es no
fimbrial, y est bajo el control del locus bvg. Es en parte
responsable para la adhesin de las bacterias a las clulas husped.

Toxina pertussis (PTX): exotoxina colonizadora, que permanece

unido a la clula, en el medio ambiente extracelular. PTX es un
hexmero 105 kDa con la tpica arquitectura AB5, que consiste en
una subunidad S1 y un complejo pentmero B que comprende S2,
S3, S4 y S5 en un respectiva relacin molar de 1: 1: 2: 1.
Citotoxina traqueal (TCL): es la responsable de los sntomas de la
tos ferina (pertussis).

Bordetella pertussis

Figura 1. El locus bvg con genes bvgASR y promotores P1, P2, P3 y P4.

Epidemiologa
Se cree que la transmisin de B. pertussis se produce a travs de
gotitas de aerosol expulsadas por la tos severa que pasan
directamente de las vas respiratorias de las personas infectadas a los
huspedes susceptibles, que inhalan partculas o aerosoles con la
bacteria.
No hay reservorio animal para B. pertussis ha sido identificado y la
bacteria parece incapaz de sobrevivir en el ambiente por largos
perodos de tiempo.

PATOGENIA
Durante el curso de la infeccin, B. pertussis se adhiere a el epitelio
ciliado, invade los macrfagos alveolares, se multiplica
rpidamente en la membrana mucosa y expresa una serie de
factores de virulencia que ayudan a colonizar el tracto respiratorio
superior por adhesin especfica a las clulas ciliadas.
B. pertussis se caracteriza por una predileccin por el epitelio
respiratorio ciliado, produce mltiples adhesinas. De estas las ms
estudiadas son:
1. la fitohemaglutinina (hemaglutinina filamentosa o Fha) y
2. la toxina de Pertussis.

Clnica de la enfermedad
El curso
tres etapas:

clnico

de

la

tos

ferina

se

divide

en

1. FASE CATARRAL: marcado por una tos irritante y fiebre leve,

1-2 semanas duraderas,
2. FASE TOS PAROXSTICA: caracterizado por un grito
inspiratorio (el aire entra en los pulmones y produce contraccin
de la glotis). Dura 1-6 semanas.
3. FASE DE CONVALECENCIA: marcada por la disminucin de
paroxismos, persistente tos y las infecciones bacterianas
secundarias.

Consecuencia graves: encefalopata, dao irreversible del cerebro,

neumona, colapso pulmonar, aumento de la presin intratorcica y
hemorragias.

Diagnstico Bacteriolgico
Tincin Gram: Del exudado farngeo

Cultivo: cultivo durante el periodo catarral. Medios ms utilizados

son Bordet-Gengou y Regan-Lowe.
Las muestras deben examinarse diariamente de 7-12 das para
identificar las colonias con un pequeo halo de hemlisis que tiene
aspecto de perla.
Pruebas Bioqumicas: catalasa, ureasa y oxidasa.
Tcnicas Moleculares: Las tcnicas basadas en la reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR) son rpidas, sensibles y especficas.

Muchas Gracias