PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS PARA MANIPULAR
MICROORGANISMOS
Díaz-Dueñas, Gabriela; Nieves-Ramírez, Karla Jazmin; Ramos-Melendez, Ana Sofía; Uribe- Velázquez
Miroslava.
Palabras clave: preparación, medios de cultivo, Salmonella typhimurium.
Introducción:
La supervivencia y crecimiento de microorganismos
dependen de la disponibilidad adecuada de nutrientes y de
un entorno propicio. En el ámbito de la microbiología, los
medios de cultivo asumen un rol esencial al proporcionar
un entorno cuidadosamente controlado para el fomento de
la proliferación microbiana. Estos medios incorporan
compuestos solubles de bajo de peso molecular
resultantes de la descomposición enzimática de nutrientes
complejos. Como tal, están formulados de fuentes que
proveen carbono y nitrógeno en diferentes formas. Un
medio de cultivo en estado líquido, carente de agentes
solidificantes es denominado caldo, mientras que, uno
sólido incorpora un agente solidificante como el agar. El
agar, compuesto mayoritariamente por galactosa, es un
carbohidrato complejo desprovisto de valor nutricional. Se
licúa a 100°C y se solidifica a 40°C. Debido a estas
propiedades los organismos, especialmente los patógenos,
pueden cultivarse a temperaturas de 37.5°C. (Welsh,
2018). El agar soya tripticaseína (AST) es un medio de
cultivo para el desarrollo de microorganismos exigentes.
Está compuesto de tripteína, peptona de soya, cloruro de
sodio, fosfato dipotásico y glucosa. La tripteína y la
peptona de soya aportan nutrientes de péptido,
aminoácidos libres, minerales, bases púricas y pirimídicas.
La peptona de sodio y glucosa aportan gran cantidad de
carbohidratos que estimulan el crecimiento de múltiples
microorganismos, mientras que, el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y el fosfato dipotásico actúa
como buffer. (Britania S.A.,2015). Un medio
completamente sólido requiere una concentración de 1.5%
a 1.8%. Una concentración menor de 1% resulta en un
medio semisólido. A su vez, un medio semisólido resulta
útil para probar la capacidad de una célula para crecer
dentro del agar a niveles más bajos de oxígeno, un medio
sólido presenta una superficie endurecida para cultivar
microorganismos con técnicas para el aislamiento de
colonias discretas. Una colonia es un conjunto de células
que se origina de la proliferación de una sola célula y
representa el crecimiento de una sola especie de
microorganismo. Las técnicas ampliamente utilizadas para
aislar colonias requieren reducir el número de
microorganismos en el inóculo, La consecuente
disminución del tamaño de la población garantiza que, tras
la inoculación, las células individuales queden
suficientemente distancias en la superficie del medio del
agar. El método de siembra por estría en placa es una
técnica cualitativa de aislamiento. Consiste en aplicar los
microorganismos en la placa siguiendo un patrón de
zigzag en cada cuadrante de la misma. (Welsh, 2018). De
esta forma, a lo largo del proceso se depositan
gradualmente menos microorganismos. Este
procedimiento asegura la separación de células
individuales y la formación de colonias aisladas. Por otro
lado, la técnica de inoculación en medio líquido consiste
en la transferencia aséptica de la muestra con la asa de
cultivo. Posteriormente, se sumerge el asa en el líquido y
se agita para desprender y diluir la muestra dentro del
caldo. Es importante recalcar que, la esterilidad es
fundamental. Para lograr la esterilidad es obligatorio la
conservación de equipo esteril y emplear técnicas
asépticas al manipular cultivos microbianos. La técnica
aséptica incluye la desinfección de instrumentos, uso de
indumentaria adecuada, flameo de herramientas de
inoculación, limpieza inmediata, trabajo en una laminar de
flujo para asegurar un ambiente estéril y el control de flujo
de aire. Referente a la Salmonella spp, éstas son bacterias
gram negativas, no formadoras de esporas y miembros de
la familia Enterobacteriaceae. Salmonella typhimurium es
el principal agente causal de gastroenteritis no tifoidea en
humanos y enfermedad similar a la fiebre tifoide en
ratones. (Prax et al., 2021). El crecimiento de Salmonella
typhimurium requiere un rango de temperatura óptimo de
25 a 37°C. El pH mínimo al que Salmonella typhimurium
puede crecer depende de la temperatura, la presencia de
sal, nitrito y el tipo de ácido presente. (Keerthirathne et al.,
2016). Los medios de cultivo más comunes utilizados para
Salmonella typhimurium incluyen agar nutritivo, agar
soya-tripticaseina y agar macconkey. S.typhimurium no
requiere la presencia de cloruro de sodio; no obstante,
pueden crecer en concentraciones de 0.5% a 5% (Thayer
et al., 1987). El agar AST satisface los requerimientos
nutrimentales y tiene una concentración aproximada de 5%
de cloruro de sodio, lo cual es tolerable para Salmonella
typhimurium (Zhurbenko et al., 2006). Se llevarán a cabo
los procedimientos descritos para lograr la preparación
exitosa de medios de cultivo sólido y líquido con base en
agar y caldo de Soya Tripticaseína, para el cultivo aislado
de Salmonella typhimurium, con la finalidad de aprender a
realizar la técnica de siembra por estriado aplicando la
metodología adecuada.
 Resultados
Metodología: Tabla 1. Calificación de la caja de petri #1 de Agar
Materiales: Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.
Se utilizó como reactivo agar soya tripticaseína (BD OBSERVACIÓN CAJA #1
bioxon) y caldo agar soya tripticaseína (BD Bioxon). La
cepa cultivada fue Salmonella typhimurium (Laboratorio 1. Patrón adecuado de aislamiento 1
Nacional de Referencia de Salmonella y Shigella). Los
materiales requeridos consistieron en cajas petri 2. No más de una incisión en el agar 1
desechables, matraz erlenmeyer de 500 mL (Pyrex),
3. Presencia de al menos 10 1
probeta 250 mL (Pyrex), pipeta serológica (Pyrex), tubos
colonias aisladas
de ensayo 15x150 (KIMAX), mechero tipo bunsen,
propipeta, microespátula y asa bacteriológica. El equipo 4. Ausencia de contaminantes 0
utilizado consta de plancha caliente con agitación aéreos
(CIMAREC, SEP1310Q), balanza (OHAUS, CS5000),
autoclave (felisa, FE-405) y potenciómetro (HANNA, 5. Reconocimiento de cultivo puro 0
HI8424).
Métodos: TOTAL 3
Se preparan medios de cultivo sólido y líquido en base a
agar y caldo soya-tripticaseína (AST), utilizando
instrumental (autoclave) esterilizado a una temperatura de
121°C durante 15 minutos. Todos los medios sólidos
fueron inoculados con Salmonella typhimurium mediante el
método de siembra en placa por estría. Posteriormente, los
cultivos fueron incubados a 30°C durante un periodo de 24
horas. Se realiza una evaluación de la calidad de los
cultivos obtenidos, aplicando una escala de valoración que
abarca desde 0 hasta 5. Dicha evaluación incluye la
disposición del aislamiento, el número de incisiones
presentes en el agar, la ausencia de contaminantes en el Fig. 1. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.
aire y la cantidad de colonias aisladas. A su vez, se
efectúa la inoculación de Salmonella typhimurium en
medio líquido. Se repite el proceso de incubación bajo las Tabla 2. Calificación de la caja de petri #2 de Agar
Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.
mismas condiciones. Del mismo modo, se observó si
existía o no la presencia de turbidez, como signo de OBSERVACIÓN CAJA #2
crecimiento bacteriano.
1. Patrón adecuado de aislamiento 1

2. No más de una incisión en el agar 1

3. Presencia de al menos 10 colonias 1

aisladas

4. Ausencia de contaminantes 0
aéreos

5. Reconocimiento de cultivo puro 0

TOTAL 3

Fig. 2. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.

 Tabla 3. Calificación de la caja de petri #3 de Agar Tabla 5. Calificación de la caja de petri #5 de Agar
Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium. Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.

OBSERVACIÓN CAJA #3 OBSERVACIÓN CAJA #5

1. Patrón adecuado de aislamiento 1 1. Patrón adecuado de aislamiento 0

2. No más de una incisión en el agar 1 2. No más de una incisión en el agar 1

3. Presencia de al menos 10 1 3. Presencia de al menos 10 1

colonias aisladas colonias aisladas

4. Ausencia de contaminantes 1 4. Ausencia de contaminantes 0

aéreos aéreos

5. Reconocimiento de cultivo puro 1 5. Reconocimiento de cultivo puro 0

TOTAL 5 TOTAL 2

Fig. 3. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium. Fig. 5. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.

Tabla 4. Calificación de la caja de petri #4 de Agar Tabla 6. Calificación de la caja de petri #6 de Agar
Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium. Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.
OBSERVACIÓN CAJA #4 OBSERVACIÓN CAJA #6

1. Patrón adecuado de aislamiento 0 1. Patrón adecuado de aislamiento 1

2. No más de una incisión en el agar 1 2. No más de una incisión en el agar 1

3. Presencia de al menos 10 1 3. Presencia de al menos 10 1

colonias aisladas colonias aisladas

4. Ausencia de contaminantes 0 4. Ausencia de contaminantes 0

aéreos aéreos

5. Reconocimiento de cultivo puro 0 5. Reconocimiento de cultivo puro 0

TOTAL 2 TOTAL 3

Fig. 4. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium. Fig. 6. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.
 Tabla 7. Calificación de la caja de petri #7 de Agar Tabla 9. Calificación de la caja de petri #9 de Agar
Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium. Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.

OBSERVACIÓN CAJA #7 OBSERVACIÓN CAJA #9

1. Patrón adecuado de aislamiento 1 1. Patrón adecuado de aislamiento 0

2. No más de una incisión en el agar 1 2. No más de una incisión en el agar 1

3. Presencia de al menos 10 1 3. Presencia de al menos 10 1

colonias aisladas colonias aisladas

4. Ausencia de contaminantes 1 4. Ausencia de contaminantes 0

aéreos aéreos

5. Reconocimiento de cultivo puro 1 5. Reconocimiento de cultivo puro 0

TOTAL 5 TOTAL 2

Fig. 7. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium. Fig. 9. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.

Tabla 8. Calificación de la caja de petri #8 de Agar Tabla 10. Calificación de la caja de petri #10 de Agar
Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium. Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella typhimurium.

OBSERVACIÓN CAJA #8 OBSERVACIÓN CAJA #10

1. Patrón adecuado de aislamiento 1 1. Patrón adecuado de aislamiento 0

2. No más de una incisión en el agar 1 2. No más de una incisión en el 1

agar
3. Presencia de al menos 10 1
colonias aisladas 3. Presencia de al menos 10 1
colonias aisladas
4. Ausencia de contaminantes 0
aéreos 4. Ausencia de contaminantes 0
aéreos
5. Reconocimiento de cultivo puro 0
5. Reconocimiento de cultivo puro 0
TOTAL 3
TOTAL 2

Fig. 8. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.

Fig. 10. Caja de petri con cultivo de Salmonella typhimurium.
 Tabla 11. Resultados obtenidos de los tubos de ensayo que
contenían el Caldo Soya-Tripticaseína en contacto con Salmonella
typhimurium.
Todos los medios líquidos presentaron turbidez.
Fig. 11. Tubo con cultivo de Fig. 12. Tubo con cultivo de
Salmonella typhimurium. Salmonella typhimurium.
Fig. 13. Tubo con cultivo de Fig. 14. Tubo con cultivo de
Salmonella typhimurium. Salmonella typhimurium.
Fig. 15. Tubo de ensayo con cultivo de Salmonella
typhimurium.
Discusión de resultados
La evaluación de los cultivos realizados en el sustrato de
agar AST arrojó resultados poco satisfactorios, obteniendo
una calificación promedio de 3 sobre 10 cultivos. Entre los
cultivos examinados, el aspecto más problemático fue la
detección de impurezas aéreas, evidenciándose una
carencia notable en esta área al encontrarse colonias
exógenas en el 80% de los casos. Dicha contaminación
puede deberse a que la siembra no fue realizada en un
entorno libre de aerosoles microbiológicos. Dichos
aerosoles entraron en contacto con los cultivos realizados,
permitiendo el crecimiento de microorganismos no
identificados. Asimismo, es pertinente considerar que la
presencia de contaminación podría haber sido originada
por una manipulación inapropiada de la asa microbiológica
en superficies no estériles o por el manejo deficiente de las
placas petri durante el enfriamiento del medio de cultivo
(Sigma-Aldrich, 2023).
Por otro lado, es válido considerar que el procedimiento
de siembra fue aceptable, ya que no se detectaron trazas
de incisiones en el medio de cultivo dentro de ninguna de
las instancias evaluadas. Además, es importante recalcar
que todos los cultivos elaborados presentaron un mínimo
de 10 colonias aisladas, por lo que, se puede asegurar una
distribución homogénea de microorganismos en la
superficie de la placa de cultivo. (Welsh, 2018). El 60% de
los cultivos presentaron un patrón de aislamiento correcto,
al observarse vestigios de la traza de sembrado de estría.
No obstante, en el contexto de las demás placas, se pudo
constatar la presencia de sectores cuadrantes en las que
no se evidenció el desarrollo de ninguna colonia
microbiana, lo cual insinúa la posibilidad de errores en la
ejecución del proceso de inoculación. Estos resultados
parecen derivar principalmente de la falta de experiencia
en la implementación de la técnica de siembra. En el caso
de los medios líquidos (caldo), el crecimiento bacteriano
se indica por el desarrollo de una apariencia turbia. (Ahern,
2018). Todos los tubos de ensayo de Caldo Soya
Tripticaseína que fueron inoculados con Salmonella
typhimurium presentaron turbidez; lo cual indica que hubo
un crecimiento adecuado de esta bacteria. A diferencia del
medio sólido, no es posible analizar la presencia de
contaminación de otros microorganismos. Las
características de las colonias de Salmonella typhimurium
pueden variar en función de las condiciones de cultivo,
aunque típicamente presentan un aspecto opaco y pueden
aparecer incoloras o de un tono blanco-crema. (Pedraza et
al., 2010). En cultivos en los que no se detectó ninguna
contaminación, las colonias exhibieron rasgos similares a
los descritos en investigaciones previas. No obstante, la
naturaleza de las colonias de características discordantes
dentro de cultivos contaminados requieren análisis
adicionales para su identificación.
Conclusiones
Los cultivos de Salmonella Typhimurium fueron evaluados
y caracterizados como cultivos de calidad media debido
principalmente a la presencia de contaminantes. Este error
es atribuible a errores experimentales derivados de la
inexperiencia en la técnica de siembra y fallo en el
seguimiento de la técnica aséptica. Sin embargo, gracias a
las placas evaluadas favorablemente, se identificó al agar
y caldo soya tripticaseína como medios excelentes para el
cultivo de colonias S.typhimurium. Adicionalmente, es
evidente que las condiciones de incubación de
S.typhimurium eran las adecuadas así como a su vez lo
fué para otros microorganismos que no lograron ser
identificados dentro de las cajas petri. Para el desarrollo de
toda práctica microbiológica es crucial proceder con
extrema delicadeza, ya que involucra una secuencia
precisa de pasos que deben ser seguidos con cuidado y
atención para la obtención de un cultivo de calidad. Por
ello, el trabajo dentro de una campana de flujo laminar
para la prevención de contaminación aérea y una atención
minuciosa de la técnica aséptica (incluyendo procurar la
disminución de tráfico dentro del laboratorio y una
constante limpieza de superficie e instrumentos) es
recomendado para experimentos posteriores.
Bibliografía
Ahern, H. 2018. Bacteriological culture methods. Pressbooks.
https://milnepublishing.geneseo.edu/suny-microbiology-l
ab/chapter/bacteriological-culture-methods/
Briatania S.A. 2011. Tripteína Soya Caldo. Britania.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/producto
s/613_inserto_es.pdf
Keerthirathne, T. P., Ross, K., Fallowfield, H., Whiley, H. 2016. A
review of temperature, pH, and other factors that
 influence the survival of salmonella in mayonnaise and
other raw egg products. Pathogens, 5(4), 63.
Prax, N., Wagner, S., Schardt, J., Neuhaus, K., Clavel, T., Fuchs,
T. M. 2021. A diet-specific microbiota drives Salmonella
typhimurium to adapt its in vivo response to
plant-derived substrates. Animal microbiome, 3(1).
Welsh, C. T. 2016. Microbiology: A Laboratory Manual, Global
Edition. Essex, UK.
Zhurbenko, R. 2006. Caracterización de la peptona de soya para
el cultivo de microorganismos. Revista cubana de
medicina tropical.

Sigma-Aldrich. 2023. Cell Culture Contamination

Troubleshooting.MERCK.URL
https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/technical-documen
ts/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/
mammalian-cell-culture/cell-culture-troubleshooting-cont
amination#commoncauses

Thayer, D. W., Muller, W. S., Buchanan, R. L., Phillips, J. G. 1987.

Effect of NACL, pH, temperature, and atmosphere on
growth of salmonella typhimurium in glucose-mineral
salts medium. Applied and Environmental Microbiology,
53(6), 1311-1315.

Anexo

1. Principales fuentes de carbono y nitrógeno empleadas en los medios de cultivo

A partir de la generalización de la composición de los medios existentes y de su empleo en diferentes campos, los
medios de cultivo podrían ser definidos como el “conjunto de elementos o sustancias que garantizan a los
microorganismos u otras células los nutrientes necesarios para su conservación y/o desarrollo”. Estos elementos o
sustancias pueden ser de origen orgánico o inorgánico, natural o artificial. Su finalidad es garantizar el crecimiento
del organismo o célula, su identificación o diferenciación dentro de un conjunto de ellos e, incluso, inhibir el
desarrollo de otros. Dentro de estas sustancias nutritivas, existen las fuentes de nitrógeno y carbono, que
enseguida se mencionan:

Las bases nutritivas son ingredientes fundamentales de muchos medios destinados al cultivo de microorganismos,
que requieren para su crecimiento, de compuestos nitrogenados de naturaleza proteica, tales como péptidos,
polipéptidos y aminoácidos principalmente. Estas bases pueden ser definidas como “productos hidrosolubles de
naturaleza orgánica, obtenidos mediante extracción o hidrólisis del material biológico”. Por ejemplo, las peptonas
son “productos hidrosolubles, obtenidos a partir de materias primas ricas en proteínas, mediante hidrólisis
enzimática”.

Los carbohidratos son ingredientes esenciales de muchos medios de cultivo. Los azúcares son incluidos en la
formulación de los medios no sólo como fuentes de energía, sino para la diferenciación de determinadas especies
de microorganismos fermentadores. El agar juega un papel esencial en los medios sólidos como agente
gelificante. Los almidones, además de constituir una fuente de energía, actúan como coloides protectores de las
células microbianas, evitando la acción tóxica de algunos componentes del medio o de los productos tóxicos del
metabolismo de los microorganismos.

2. Ventajas y desventajas de los tipos de medio de cultivo

Los medios de cultivo pueden ser clasificados teniendo en cuenta criterios muy diversos. Hasta el momento, no
existe una clasificación única; sólo algunos autores o cosas comerciales coinciden en las clasificaciones más
 sencillas. Algunas de ellas basadas en el estado físico (sólidos, semisólidos o semilíquidos y líquidos), o en la
escala en que se emplean (de laboratorio o industriales). A continuación se exponen algunas de las clasificaciones
más difundidas.

Tabla 12. Clasificación de los medios de cultivo según la naturaleza de sus ingredientes.

Tipo Descripción Ventajas Desventajas

- En general, su composición - Su composición no es

Fueron los primeros utilizados, y se basa en sustancias exactamente definida, y por
los más empleados se preparan orgánicas. consiguiente no es
Complejos a partir de tejidos animales, y - Generan excelentes rigurosamente constante.
más raramente de vegetales. resultados y se utilizan
frecuentemente.

No contienen en su formulación - Tienen una composición - Dado que su costo es muy

Sintéticos productos de naturaleza proteica. química definida cualitativa y alto, sólo es utilizado en
cuantitativamente. procedimientos especiales.

- En su composición aparecen - Solo funciona adecuadamente

Contienen compuestos moléculas naturales para el crecimiento de ciertos
nitrogenados de origen proteico, hidrolizadas, como los microorganismos.
Intermedios pero de composición o estructura aminoácidos.
conocida. - Se puede mezclar con otras
sustancias orgánicas e
inorgánicas conocidas.

Tabla 13. Clasificación de los medios de cultivo según la promoción del crecimiento de determinados microorganismos.

Tipo Descripción Ventajas Desventajas

- Contienen sustancias que - Muy pocos microorganismos

favorecen el crecimiento de no son compatibles con su
Por lo general son medios un organismo en específico. composición nutrimental.
líquidos, pudiendo ser - Contienen sustancias que
semisólidos. Son aquellos pueden inhibir el crecimiento
que, además de las de los microorganismos no
De sustancias nutritivas deseados.
enriquecimiento normales, incorporan - Puede detectar bacterias
factores indispensables que se encuentren en una
para el crecimiento de pequeña cantidad y
microorganismos exigentes. aumentar la cantidad del
microorganismo deseado
hasta niveles detectables.

En su mayoría son sólidos, - Evita el crecimiento de - En este medio solo crece un

contienen sustancias que bacterias no deseadas tipo determinado de
Selectivos inhiben el crecimiento de - Favorece el crecimiento de microorganismos; por lo cual,
determinados los microorganismos de es difícil que crezcan otros.
microorganismos. interés.

- Toleran el crecimiento de - No se utilizan de manera

varias especies de frecuente.
microorganismos.
En su mayoría, como los - Facilitan la identificación de
Electivos selectivos, son sólidos. Pero colonias de interés.
también existen semisólidos. - Garantizan los nutrientes
mínimos necesarios para el
desarrollo de colonias.
 Tabla 14. Clasificación de los medios de cultivo según su finalidad.

Tipo Descripción Ventajas Desventajas

- Favorecen el desarrollo de la - Es complicado para el

El medio más conocido de
este grupo es el agar
Comunes nutritivo o agar común, que
resulta de la adición de agar
al caldo nutritivo.
mayor parte de los crecimiento de un solo tipo de
microorganismos sin satisfacer microorganismo.
específicamente algún
requerimiento nutricional de
carácter poco habitual en la
generalidad de los mismos.

Su composición cumple con - Permiten detectar un - Son altamente costosos.

los requerimientos microorganismo en específico. - Si no se tiene un manejo y
nutricionales vitales de un esterilizado adecuado puede
Especiales microorganismo determinado contaminarse.
que sólo en ese medio
encuentra condiciones
óptimas para su desarrollo.

- Permite distinguir con mayor - En ocasiones se combinan las

Posibilitan la diferenciación
Diferenciales entre microorganismos.
facilidad las colonias del características selectivas y
microorganismo deseado de diferenciales en un único
otras colonias que crecen en la medio.
misma placa. - No contienen sustancias
- Contienen indicadores de inhibidoras
productos derivados de la
actividad metabólica de los
microorganismos para facilitar
su identificación.

3. Cantidad de agar utilizado en un medio semisólido y uno sólido

Un medio de cultivo suplementado con un agente solidificante como el agar resulta en medio sólido o semisólido.
Un medio de cultivo completamente sólido requiere una concentración de agar de 1.5% a 1.8%; el cual tiene la
ventaja de presentar una superficie endurecida en la que los microorganismos pueden crecer utilizando técnicas
especializadas para el aislamiento de colonias discretas. Las colonias microbianas tienen formas y tamaños
diversos en función del organismo, las condiciones de cultivo, el suministro de nutrientes y otros parámetros
fisiológicos.

Un medio de cultivo semisólido tiene una concentración de menos de 1% y es utilizado para evaluar la capacidad
de un microorganismo para crecer dentro del agar, en concentraciones bajas de oxígeno y comprobar su motilidad.
4. Clasificación de los medios de los tipos de cultivo en cuanto a su función
Tabla 15. Clasificación de los tipos de medio de cultivo de acuerdo a su función.

Tipo Descripción Medios de Objetivo

cultivo

Contiene un medio basal y sangre. Sin embargo,

Agar es posible añadir suplementos para ampliar el
sangre número de gérmenes que se pueden cultivar;
tales como: hongos y bacterias.

El medio de base se vuelve marrón al añadir

Permiten el crecimiento
No selectivos de la mayor parte de
los gérmenes que no
necesitan de
condiciones exigentes.
Agar chocolate sangre o hemoglobina. Es útil para el crecimiento
de bacterias.
Está compuesto de extractos de ternera y
Agar caseína, sales, cationes divalentes y almidón
Mueller-Hinton soluble. Es ideal para el estudio de
susceptibilidad bacteriana.

Su composición está basada en caseína,

Caldo glucosa, extracto de levadura, cisteína y
tioglicolato tioglicolato sódico. Este medio de cultivo sirve
para la recuperación de bacterias aerobias y
anaerobias.

Este medio de cultivo contiene caseína y tejido

Agar dextrosa animal, los cuales se encuentran suplementados
de Sabouraud con glucosa. Permite el aislamiento de hongos.

Contiene peptonas digeridas, sales biliares,

lactosa, rojo neutro y cristal violeta. Este medio
Agar es selectivo para las bacterias Gram negativas y
MacConkey diferencial para las bacterias que pueden o no
fermentar la lactosa; debido a que, aquellas que
la fermentan producen ácidos y precipitan las
sales biliares, y con ello, una coloración rojiza.

Está compuesto de extractos de caseína y

Permiten la Agar sal tejidos animales, extracto de ternera, manitol,
recuperación de manitol sales y rojo fenol. Este medio es útil para el
gérmenes específicos aislamiento de estafilococos.
que se encuentran en
Selectivos y una mezcla de otros El medio contiene un extracto de levaduras con
diferenciales gérmenes. Estos xilosa, lactosa, sacarosa, desoxicolato sódico,
medios son tiosulfato sódico, citrato amónico férrico y rojo
enriquecidos con fenol. Permite detectar Salmonella y Shigella.
inhibidores para La Salmonella fermenta la xilosa y descarboxila
suprimir el crecimiento Agar xilosa la lisina, produciendo un color rojo. Sin embargo,
de gérmenes no lisina esta bacteria produce H2SO4 a partir del
deseados. Asimismo, desoxicolato tiosulfato sódico y en presencia con el citrato
se les añade amónico férrico, las colonias se vuelven de color
ingredientes negro.
específicos para Por otra parte, la Shigella no fermenta los
facilitar la identificación carbohidratos, por lo cual las colonias serán de
del germen. un color rojizo.

Medio de Contiene glicerol, harina de patata, sales, huevos

Lowenstein coagulados y verde malaquita para inhibir
Jensen bacterias Gram positivas y para aislar
micobacterias.
 El medio contiene cloranfenicol para inhibir
bacterias y una mezcla de sustratos
CHROMagar cromogénicos especiales; los cuales sirven para
aislar e identificar algunas especies distintas a la
levadura Candida.

Agar Este medio de cultivo permite la identificación de

Permiten detectar cistina-telurito Corynebacterium diphtheriae, la cual, es una
gérmenes específicos, bacteria Gram positiva.
que pueden ser
exigentes o que están Agar Regan Permite la recuperación de la bacteria Bordetella
Especializados presentes en una Lowe pertussis.
mezcla con otros
organismos. Está compuesto de un extracto de levadura y
carne, a su vez, contiene carbón activado, el
Agar BCYE cual, es primordial para absorber las sustancias
no deseadas e inhibir el crecimiento de otros
organismos. Este medio de cultivo es ideal para
el aislamiento de Legionella y Nocardia.

5. Tipos y condiciones de esterilización

● Métodos físicos
○ Autoclave: Lleva a cabo esterilización por vapor a presión. Este equipo emplea vapor de agua a
una presión de 15 libras por pulgada cuadrada, alcanzando temperaturas de 121°C. El equipo no
deja residuos y es el método más recomendable para la esterilización de materiales termoestables
y no sensibles a la humedad. No debe utilizarse en la esterilización de materiales sensibles al
calor o no miscibles en agua.
○ Por calor húmedo: Utiliza presión moderada en la esterilización por vapor para lograr una
temperatura elevada. Destruye los microorganismos por la coagulación de sus proteínas celulares.
○ Por calor seco: Implica el uso de aire caliente para esterilizar materiales y recipientes a
temperaturas altas (160°C - 180°C). Es utilizada para preparaciones no acuosas termoestables,
polvos y apósitos. Se realiza generalmente en un horno de aire caliente.
○ Radiación:
■ Ionizante (gamma, rayos X, haz de electrones): Produce la ionización del ADN de los
microorganismos afectando el proceso de reproducción. Puede penetrar los materiales de
empaque y es eficaz para la esterilización superficial como a granel sin provocar un
aumento significativo de temperatura.
■ No ionizantes (UV): Un rango de longitudes de onda UV es exitoso para eliminar
microorganismos. La longitud de onda, principalmente 254 nm, es absorbida por
nucleoproteínas, destruyendo el material genético (ADN y ARN) al formar dobles enlaces
o dímeros. Como consecuencia, se inactiva la reproducción de los microorganismos. Es
utilizada para la esterilización de superficies. Es menos penetrante que la radiación
ionizante.

● Métodos químicos
○ Con gas:
■ Óxido de etileno ETO: ETO es un gas incoloro que es inflamable y explosivo. El proceso
se realiza a una temperatura de entre 37°C a 63°C. Es utilizado principalmente para
productos como plástico o materiales termosensibles que no soportan las altas
temperaturas del autoclave. Sin embargo, implica ciclos prolongados de esterilización,
altos costos y peligros potenciales.
■ Plasma de peróxido de hidrógeno: Utiliza el vapor de peróxido de hidrógeno que se
convierte en plasma. Dentro de una cámara de vacío el peróxido de hidrógeno se evapora
y se dispersa. Debido a las propiedades desinfectantes del peróxido de hidrógeno éste
elimina a todas las bacterias dentro de la cámara y la superficie. Cuando en la cámara de
vacío alcanza cierta presión, las partículas de vapor se convierten en plasma, que
descompone el material genético de las bacterias.
 ■ Con formaldehído: El formaldehído puede esterilizar espacios y equipos. Es altamente
soluble en soluciones acuosas. A una concentración de 2% es vaporizada en un entorno
de presión con la humedad y temperatura adecuadas, generando un ciclo de esterilización
seguro. Usualmente el proceso implica dos ciclos de tiempo variable según la carga a
esterilizar.
■ Con ácido peracético: El ácido peracético tiene poder bactericida, fungicida y esporicida.
Elimina microorganismos por acción oxidativa en los enlaces sulfidrilo y sulfúricos,
provocando una ruptura de pared celular. Es compatible con el material termosensible que
pueda sumergirse en ácido peracético a temperatura inferior a 56°C.

● Métodos mecánicos
○ Filtración: Consiste en hacer que un líquido atraviese un filtro que retiene ciertos
microorganismos. Los filtros de membrana a partir de celulosa u otros polímeros mantienen
moléculas de mayor tamaño que el poro del filtro. El paso por un filtro de porosidad adecuado
puede eliminar bacterias o mohos, pero a menudo no los virus. A menudo utilizado para líquidos y
gases sensibles al calor.

6. Técnica aséptica para manejo de microorganismos.

En un laboratorio de microbiología todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de tal modo que se impida
la contaminación en el área de trabajo. Los procedimientos utilizados para conseguirlo se conocen con el nombre
de "Técnica aséptica". Tal técnica tiene un doble objetivo:

a) Evitar que el operador se contamine con microorganismos procedentes de las muestras o cultivos
b) Evitar la contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos procedentes del ambiente o del
propio operador.

Los principios fundamentales de la técnica aséptica son los siguientes:

1. Trabajar siempre al lado de una llama. Esta llama crea a su alrededor una atmósfera estéril y además la
utilizaremos para esterilizar o flamear parte del material que utilizamos durante la siembra.
2. Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y una vez esterilizadas deben enfriarse antes de tomar la
muestra de microorganismos con objeto de no destruirlos con el calor. El asa se enfría sobre el agar o
sobre el material de vidrio (en zonas estériles del material de vidrio). Después de utilizarlas las asas se
vuelven a esterilizar.
3. Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapados y después de la
inoculación.
4. Durante la inoculación, los tapones se mantienen en la mano sujetándolos por la parte que no entra en
contacto con tubos y matraces.
5. Siempre que es necesario abrir un tubo debe mantenerse en posición inclinada para que el riesgo de
contaminación sea mínimo.
6. Las tapas de las placas de Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo.

7. Métodos para evitar aerosoles.

Un aerosol microbiológico se refiere a un coloide; partículas sólidas o líquidas suspendidas en el aire que
contienen microorganismos. Algunos de los propágulos pueden tener potencial infeccioso o alérgico y pueden
transportar sustancias contaminantes.
● Campanas de flujo laminar: Equipos utilizados para obtener una zona esteril, pues logra proporcionar
aire descontaminado proveniente de partículas de hasta 0.1 micras. Proporciona un flujo de aire
unidireccional que dirige los aerosoles y las partículas hacia afuera de la zona de trabajo.
● Uso de pipetas mecánicas sistemas de dispensación: minimizan la formación de aerosoles al pipetear
líquidos. Deben drenarse con la punta contra la pared interior del recipiente receptor. Es recomendable
trabajar sobre un material absorbente para evitar dispersión de aerosol de gotas en superficies duras.
● Buena ventilación: Trabajar en un área con buena ventilación evita el aumento de su concentración de
aerosoles en el aire.
● Manipulación en medio líquido: Al trabajar o transferir con líquidos debe hacerse de manera controlada
para evitar salpicaduras.
Referencias bibliográficas
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BioCen, Rodríguez, C., Zhurbenko, R. 2018. Manual de medios de cultivo. 4a edición. Mayabeque, Cuba.

Tovar, F. 2012. Análisis de procesos microbiológicos. [www Document] URL

https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/medios-de-cultivo/ (Accedido 14/08/2023).

Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M. 2014. Microbiología Médica. 7a edición. España.

Santambrosio, E., Ortega, M., Garibaldi, P. 2009. Preparación de medios de cultivo. Universidad Tecnológica Nacional.
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoI.pdf

Solmeglas.2022. Medios de Cultivo. https://solmeglas.com/medios-de-cultivo-que-son-funcionalidades-calidad/