“TIPOS DE SIEMBRA Y ACCION DE AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE EL

CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS”

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE

BASADRE GROHMANN
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA Y
PRACTICA N°3
PARASITOLOGIA

HORARIO: MIERCOLES 7PM A 9PM

ALUMNA: MARIA LISSET ARI
SANDOVAL
CODIGO: 2019-122002
DOCENTE: BIOLOGA-
MICROBIOLOGA TERESA 1
LANCHIPA
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
I. OBJETIVOS:

 Adiestrar al estudiante en las diferentes técnicas de siembra para el aislamiento de

microorganismos.
 Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo.
 Conocer la acción de los agentes físicos y químicos para el control de los microorganismos.

II. MATERIALES:

- Mechero de alcohol. - Asa bacteriológica.

- Placas Petri. - Placas Petri con agar

nutritivo.

2
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Tubos con caldo nutritivo, - Autoclave.
tubos con agua destilada.

- Cámara ultravioleta. - Papel platino.

- Tubos Eppendorf. - Incubadora.

3
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Pipetas 1ml, 5 ml. - Muestra Cepa Bacteriana
(E. coli)

III. PROCEDIMIENTO

>Preparación de Medios de Cultivo<

- Cada medio trae una etiqueta donde se especifica el nombre del medio, sus
componentes, número de lote y cuánto hay que pesar para preparar un litro de medio de
cultivo.

- Pesar la cantidad acorde a lo requerido y considerando lo que estipula el frasco que

contiene el medio de cultivo. En una probeta, colocar agua destilada.
- La cantidad pesada se disuelve en un litro de agua destilada hasta que la mezcla quede
homogeneizada.

- Llevar al autoclave, a 15 libras de presión, 121°C de temperatura, por 15 minutos

de tiempo. 4
- Los medios
PRACTICA N°3líquidos
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
se autoclavan ya 2019-122002
distribuidos en sus respectivos tubos de
trabajo, mientras que los medios sólidos se autoclavan en matraces Erlenmeyer.
- Estos últimos se dejan reposar hasta que alcancen una temperatura de 55°C y se
sirve en las placas de Petri cerca de un mechero. Se dejan solidificar y se guardan
en nevera de forma invertida.

- También existen medios de cultivo sólidos que se distribuyen en tubos, dejándose

solidificar bien sea en tacos (rectos) o en pico de flauta (inclinados).
- Antes de utilizar cualquier medio de cultivo preparado, bien sea sólido o líquido,
este debe atemperarse antes de sembrar la muestra.

< METODOS DE
5
SIEMBRA
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA <
Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 SIEMBRA DEL INÓCULO EN
-
MEDIO LÍQUIDO
Si se realiza con asa de siembra, esta se carga con la muestra problema sólido o a veces
líquido en condiciones de esterilidad y se adiciona al medio líquido agitándola.
- Si se realiza con pipeta, se toma un volumen de muestra problema y se vierte al medio
líquido agitándose hasta su homogenización.
- Si se realiza con escobillón o hisopo, el método es igual que con el asa de siembra.

SIEMBRA DEL INÓCULO EN

MEDIO SÓLIDO
Pueden ser
Placa Tubo
por:

1. Siembra del Inóculo por placa

I

Se vierte 0,1 mL de muestra en el

centro de una placa y se agregan 15 ml
de medio de cultivo fundido a 45º C; se
agita la placa. Se usa para recuento de
Siembra incorporada, en masa o de UFC. 6
PRACTICA N°3Barry
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
Siembra de muestra liquida en placa con asa de Drigalsky (diseminación o
dispersión)

- Se utilizan placas previamente preparadas que contienen el medio de cultivo

solidificado (unos 15 mL/placa). Se añade 0,1 mL con una pipeta estéril en el
centro de la placa y se extiende con el asa de Drigalsky también estéril.

- Esperar 2 ó 3 minutos a que se seque el inóculo.

- Se llevan las placas a incubar (la temperatura y el tiempo de incubación
elegidos varía según el tipo de microorganismos.

7
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 Siembra por agotamiento o aislamiento es estría simple

- Se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar.

- Con el asa previamente esterilizada por flameado, se toma material de un

cultivo, depositando el inóculo en uno de los extremos superiores de la placa,
de aquí se realizarán movimiento en zigzag de un extremo a otro de la placa
no tomándose en ningún momento nuevo inóculo y no levantándose el asa
hasta concluir la siembra en toda la placa.

8
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 Siembra por estría por agotamiento (estrías múltiples)

- Se tomará la muestra problema con asa de siembra previamente estéril y

dicha muestra se depositará en el extremo superior de la placa, extendiéndose
de un extremo a otro de ésta, solo en la parte superior.

- Se flamea el asa de platino y se gira ligeramente dicha placa repitiendo el

proceso anterior que permitirá arrastrar la muestra desde uno de los bordes
donde quedo la muestra hasta el otro extremo superior de la placa Se vuelve
de nuevo a flamear el asa de platino sin tomar la muestra (como en el caso
anterior) y siguiendo la misma dirección se repite Ia operación hasta un total
de 4 veces.

Técnica de los cuatro cuadrantes

9
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Con un marcador de vidrio, en la base de la placa (reverso9, dibujar 2 lineas
perpendiculares que deben cruzarse en el centro de la placa de tal forma que
esté dividida en 4 cuadrantes.

- Se tomará con el asa de siembra estéril una cantidad de inóculo y se

adicionará en el extremo superior de uno de los cuadrantes extendiéndose por
todo ese cuadrante en forma de zigzag.

Técnica de siembra por dilución

- Se dispondrá de una batería de tubas con medio de cultivo específico o agua

estéril según los casos. Se adicionará una cantidad de muestra sólida a líquida
en los tubos sabiendo la cantidad de muestra o inóculo que se añade en el
tubo inicial.

10
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Se agitará hasta homogenización.

- Con pipeta estéril se tomara una cantidad específica y se adicionará al

segundo tubo que se homogeniza.

- Se repite la operación anterior con el tercer tubo y así sucesivamente hasta

obtener la dilución deseada.

11
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 2. Siembra del Inóculo por tubo
I

Siembra por estría

- Extienda el inóculo sobre el agar inclinado deslizando suavemente el asa por la

superficie en forma de zigzag. Se inicia por la parte más profunda de la
superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del
tubo.

Siembra por picadura o punción

12
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Con un asa bacteriológica en punta, se toma el material que se quiere sembrar
y se lo introduce en el tubo con medio. Introducir la punta hasta el fondo,
formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este
método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

Siembra por picadura y estrías en superficie

- Esta se realiza por punción y por estría.

13
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 A) AGENTES QUIMICOS

Efecto de los desinfectantes y antisépticos sobre las

bacterias

- Para el experimento se usará la povidona yodada (betadine) donde el yodo

con la povidona ejerce acción antiséptica, siendo un agente activo frente a las
bacterias, los hongos y las esporas, consiguiendo ser uno de los antisépticos
con el espectro de acción más completo.

- Colocar en un tubo de ensayo 4.5 mL de agua y agregarle 0.5 mL de betadine,

a partir de ahí preparar las diferentes diluciones: 1/10,1/50,1/100, 1/250,
1/500, 1/750, 1/1000.

14
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - A cada tubo eppendorf se le añadirá 100 uL del cultivo de Escherichia coli.
Dejar actuar por 10 minutos.

- Tener además 10 tubos que contengan 5 mL de caldo común, A cada tubo se

le agregará 100 uL de las diluciones preparadas (8 tubos), los otros dos tubos
servirán como controles. A un tubo se le agregará 100 uL de Escherichia coli
15
(control positivo, al segundo no se le incoculrá nada (control negativo).
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
Incubar a 37ºC por 24 horas cada tubo.
 B) AGENTES FISICOS

Radiaciones ultravioleta

Estas radiaciones tienen acción esterilizante sobre la mayoria de micrrorganismos y se

les emplea en ambientes quirúrgicos, cubículos bacteriológicos, etc. ya que su acción
se limita a superficies o partículas suspendidas en el aire.

- Sembrar los microorganismos (Escherichia coli) en dos placas de agar nutritive

mediante la técnica de agotamiento.

16
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 - Exponer la siembra a la acción de la luz ultravioleta (la primera a 254 nm, la
segunda placa a 366 nm). Ambas se colocarán una por una a la cámara
ultravioleta, durante 1 minuto, cubriendo la mitad de la placa con papel
platino.

Primera siembra a 254 nm. Segunda siembra a 360 nm.

Cubrir la mitad de la
placa con papel de
plata impedirá que los
rayos impacten sobre
la placa.

- Rotular e incubar a 37ºC durante 24 horas.

17
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
IV. RESULTADOS:

SIEMBRA DEL INÓCULO EN

MEDIO LÍQUIDO

Esta técnica se emplea para preparas

diluciones, enriquecer un inóculo o,
homogenizarlo o bien para cuando o
para cuantificar.

SIEMBRA DEL INÓCULO EN

MEDIO SÓLIDO
1. Siembra del Inóculo por placa
I
Siembra incorporada, en masa o de
Barry

Con esta técnica se puede apreciar

colonias aisladas.
Esto se hace para el aislamiento de un
microorganismo o para conocer el
número de microrganismos presentes
en una muestra.

18
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
Siembra de muestra liquida en placa con asa de Drigalsky (diseminación o
dispersión)

Se obtienen colonias separadas en

toda la superficie de medio de
cultivo.

Siembra por agotamiento o aislamiento es estría simple

Este tipo de siembra hace que las

células bacterianas queden separadas e
inmovilizadas. Después de una
incubación en condiciones adecuadas,
la célula viable origina una colonia.

Siembra por estría por agotamiento (estrías múltiples)

Mediante esta técnica se obtienen

colonias aisladas a partir de una
muestra que contenga un elevado
número de gérmenes.

Técnica de los cuatro cuadrantes

En la imagen se puede apreciar colonias

aisladas en 4 diferentes partes de la 19
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
placa.
 Técnica de siembra por dilución

Como vemos en la imagen, el número

de colonias disminuye al aumentar el
factor de dilución.

2. Siembra del Inóculo por tubo

I

Siembra por estría

Esta siembra se emplea para realizar

una siembra abundante del
microorganismo y para conservarlo por
periodos cortos.

Siembra por picadura o punción

20
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 Este método de siembra se emplea para
realizar la caracterización macroscópica
del cultivo en estudio.

Siembra por picadura y estrías en superficie

Se utiliza este método de siembra para

estudiar características metabólicas.

A) AGENTES QUIMICOS

En la imagen se comprueba si hubo crecimiento en el control positivo y ausencia de este

en el control negativo, ausencia de turbidez. Para determinar la eficacia del antiséptico y
ver cual es la dilución mínima inhibitoria del crecimiento. Se observa la turbidez, indicativo
que presenta el crecimiento de cultivos de Escherichia coli tratada con diferentes
diluciones de antiséptico.

21
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 B) AGENTES FISICOS

En la imagen nos damos cuenta que la esterilización por longitud de onda es muy eficaz para
la esterilización de los microorganismos.

V. CONCLUSIONES:

- Se concluye que se logró conocer las diferentes técnicas de siembra de cultivo, el

procedimiento de ellos. Los medios de cultivo son importantes porque nos
permitirán hacer los aislamientos de agentes patógenos como benéficos y así
identificarlos para su posterior uso.
- En el campo de la enfermería es importante porque nos ayudará a identificar la
bacteria que puede producir una determinada enfermedad, y luego poder brindar
al paciente el tratamiento respectivo.

VI. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la longitude de onda que tiene acción bactericida? 22

PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
Las longitudes de onda con mayor efecto bactericida son las cercanas a 260 nm. Debido a
que la composición del ADN varía entre las especies, se reporta que el pico de absorción
de UV-C está en el rango de 260 a 265 nm, correspondiente a la principal emisión de onda
de la lámpara de mercurio de baja presión (253,7 nm) y a la eficiencia de inactivación
microbiana de estas fuentes de rayos UV-C.
La efectividad germicida de la luz UV-C, puede variar entre especies de microorganismos.
En la Figura se ilustra su efecto en Escherichia coli, donde se observa que la efectividad
germicida se alcanza a un pico en alrededor 260-265 nm, que corresponde al pico de
absorción ultravioleta para el ADN bacterial. Las lámparas UV de baja presión irradian
alrededor del 95% de su energía a una longitud de onda de 253,7 nm; lo cual es
coincidentemente cercano al pico de absorción para el ADN (260-265 nm) en el que se
tiene alta efectividad germicida. La longitud de onda óptima para la inactivación de E. coli,
es de aproximadamente 265 nm, la cual es alrededor del 15% más eficaz que el pico de
UV-C de 254nm.

2. ¿Cuál material orgánico como la sangre, orina, etc. puede ser un

medio de cultivo? 23
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
- Extracto de levadura.
- Leche de coco.
- Jugo de zanahoria.
- Mosto.
- Extracto de carne.
- Malta.
- Ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro,
semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados
hasta la forma final de pasta o polvo.
- Caseína.

24
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
 3. Un medio de cultivo en un laboratorio microbiológico ¿Qué
condiciones reglamentarias debe reunir?

Consistencia adecuada del

medio.

Disponibilidad
de nutrientes.

Presencia o ausencia
de oxígeno y otros gases.
R E Q U IS I T O S

Condiciones adecuadas
de humedad (mantener en
frigorífico).

Luz ambiental.

pH adecuado.

Temperatura.

25
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002
Esterilidad.
VII. BIBLIOGRAFÍA

- https://www.youtube.com/watch?v=96_eZQQuwbM&t=125s
- https://www.youtube.com/watch?v=45VDiv5E9dk
- https://www.youtube.com/watch?v=6NckVGCobwY
- https://www.youtube.com/watch?v=W6xpPJZIb1E
- https://www.youtube.com/watch?v=4f3uiwiioRg
- https://www.youtube.com/watch?v=DuKXV7UZ8h4
- https://www.youtube.com/watch?v=ChzRUbFPujc
- https://www.youtube.com/watch?v=VO6XAd56AuM
- https://www.youtube.com/watch?v=eNz0FE9Q-BA
- https://www.academia.edu/11620994/T%C3%A9cnicas_de_siembra
- https://www.redalyc.org/pdf/4277/427743080011.pdf
- https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf

26
PRACTICA N°3 MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 2019-122002