Determinacin de la Omnipresencia de los Microorganismos La Microbiologa es el estudio de los microorganismos microscpicos, es decir no perceptibles a simple vista a lo largo de todo

su ciclo vital. Los microorganismos pueden dividirse en virus, bacterias, hongos y parsitos. En esta prctica mediante diferentes mtodos, que emplean distintos muestreos como ambientales, superficies, rostro, cabellera, se pudo evidenciar la omnipresencia de los microorganismos. Obteniendo como resultado un crecimiento de bacteria en los medios de cultivo de recuento estndar y agar sangre; el crecimiento de hongos se evidenci en el medio de cultivo de papa dextrosa. Palabras clave: microorganismos, Agar, omnipresencia, microflora, ARE, APD, AS Introduccin La microbiologa se define como el estudio de organismos y agentes que son de demasiado pequeos para poder ser observados con el ojo humano a simple vista, es decir el estudio de microorganismos, los cuales se definen como formas de vida muy pequeas que slo pueden ser observados a travs del microscopio. En este grupo estn incluidos las bacterias, los virus, los mohos y las levaduras. Algunos microorganismos pueden causar el deterioro de los alimentos entre los cuales se encuentran los microorganismos patgenos, que a su vez pueden ocasionar enfermedades debido al consumo de alimentos contaminados. Adicionalmente, existen ciertos microorganismos patgenos que no causan un deterioro visible en el alimento. Sin embargo, por otro lado existen tambin algunos microorganismos que son beneficiosos y que pueden ser usados en el procesamiento de los alimentos con la finalidad de prolongar su tiempo de vida o de cambiar las propiedades de los mismos (Prescott et al, 2002) Los microorganismos los podemos encontrar en el agua, el aire, el polvo, las plantas, animales, ambientes hostiles como profundidades marinas, en el cuerpo humano se encuentran constituyendo la microflora normal, cuya presencia es beneficiosa para nuestro organismo. En general proliferan donde encuentran alimento, humedad y temperatura adecuada (Rivas, 2009). En el laboratorio para el crecimiento de los microorganismos se utilizan medios de cultivo; los cuales se definen como soluciones nutritivas especiales para estos organismos, en microbiologa se emplean dos tipos generales de medios de cultivo: los qumicamente definidos en los que se sabe la composicin qumica exacta; y los complejos o no definidos, estos medios pueden ser adecuados o incluso ventajosos por varias razones, como por ejemplo son fciles de preparar y permiten un crecimiento adecuado de los microorganismos , una limitacin importante al usar este medio es precisamente que no se sabe su composicin nutritiva exacta ya que emplea hidrolizados de casena, carne, soja, levaduras u otras sustancias muy nutritivas (Madigan et al, 2004).

Segn Prescott et al (2002), para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgenos adecuados, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado (Madigan et al, 2004). El objetivo de esta prctica es evidenciar la omnipresencia de los microorganismos mediante diferentes muestreos; y determinar el crecimiento de los mismos en distintos medios de cultivo. Metodologa Se realizaron una serie de muestreos utilizando distintos medios de cultivo (ARE, APD, AS) en el Laboratorio de Microbiologa del Instituto Tecnolgico de Costa Rica para evidenciar la omnipresencia de los microorganismos Para la preparacin de las placas de agar, se fund el agar en agua hirviendo al estar totalmente disuelto se coloc en bao Mara a 60 C, se procedi a rotular las placas de Petri segn el mtodo y agar utilizado. El agar disuelto se dej enfriar a temperatura cachete, antes de repartir cada agar, al APD se le agreg 2 ml de cido tartrico. Se chorre ARE en tres placas de Petri y APD en dos placas de Petri, se dej enfriar con la tapa cerrada hasta que el agar solidifique. En el muestreo ambiental, se tom una placa de ARE y otra de APD, retiradas las tapas se dejaron expuestas al aire del laboratorio durante 20 min. Transcurrido el tiempo se puso a incubar en posicin invertida a 35 C por 48 hrs. Se tom una placa de ARE, dividida en partes iguales con marcador permanente, se pas un dedo sucio sobre la superficie de una mitad de la placa y luego se pas un dedo limpio (lavadas la manos) por la superficie de la otra mitad. Rotulada debidamente la placa se procedi a incubar en posicin invertida a 35 C por 48 hrs.

Para el muestreo de la cabellera se tom una placa de ARE, se destap y se sacudi el cabello sobre la superficie del agar, se tap y se puso a incubar en posicin invertida a 35 C por 48 hrs. El muestreo de superficie, se realiz tomando un hisopo estril el cual se sumergi en CN, con el hisopo hmedo se tom una muestra de alguna superficie, preferiblemente horizontal, y luego se paso el hisopo suavemente sobre la superficie de una placa de APD. Rotulada correctamente se puso a incubar a 35 C por 48 hrs. Por ultimo el muestreo de rostro, se tom un hisopo estril el cual se sumergi en CN, con el hisopo hmedo se tom una muestra de la cara, bigote o borde del pelo y para luego pasarlo suavemente sobre la superficie de una placa de AS, rotulada la placa se coloc en posicin invertida en la incubadora a 35 C por 48 hrs. Resultados Cuadro 1. Resultados observados en los diferentes muestreos y medios de cultivo. Laboratorio de Biologa ITCR. Medio de Cultivo Muestreo Observaciones AS Rostro Placa 1: mayora halo transparente, algunas con halo verde amarillo. Placas 2 y 3: mayora halo transparente, tambin sin halo. ARE Medio Ambiente 20 colonias entre blancas y amarillas. Hubo hongos. ADP Medio Ambiente Solamente 3 hongos. ARE Cabello Colonias blancas y amarillas, aisladas y en grupos. ADP Superficie 23 hongos de diferentes tamaos. ARE Dedo Limpio y Dedo Dedo Limpio: Sucio aproximadamente 100 colonias blancas pequeas muy agrupadas. Dedo sucio: 3 colonias blancas aisladas. Discusin El medio agar sangre (AS) es una combinacin de un agar base con el agregado de 5 % de sangre ovina, en esta prctica se us para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos. El trmino hemlisis se refiere a la desintegracin de los eritrocitos y este tipo de lisis se puede clasificar

observando los halos hemolticos alrededor de las colonias. A sabiendas de lo anterior, en la placa de AS nmero uno hay bacterias hemolticas alfa y beta, mientras que en las otras dos placas hubo bacterias hemolticas beta y gamma (Chvez et al, 2006). Otro medio usado fue el agar Papa Dextrosa (APD), fue utilizado para el cultivo de hongos, ya que es un medio selectivo, o sea favorece el crecimiento de microorganismos particulares. Se adicion cido tartrico para bajar el pH del medio a 3.5 0.1 y as inhibir el crecimiento bacteriano (Prescott et al, 2002). Contrario a esto, el agar de Recuento Estndar es un medio utilizado para el recuento de bacterias en general (Rivas, 2009), por lo que se utiliz meramente para evidenciar la omnipresencia de los microorganismos, gracias a los muestreos de medio ambiente y superficies. En la prueba de los dedos se observ un mayor crecimiento en el dedo limpio ya que segn M. Rojas (entrevista personal, Febrero 27, 2009) al lavarse las manos se elimina la grasa que los cubre, dejando expuestas las bacterias endgenas. Adems todas las placas de Petri fueron incubadas a 37C, durante 48 horas, estas condiciones para propiciar un mejor desarrollo de los microorganismos cultivados.

Conclusiones El medio de cultivo agar papa dextrosa al ser selectivo permiti evidenciar el crecimiento de hongos. Al realizar diferentes muestreos y utilizar distintos medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos se evidencio su omnipresencia. El agar recuento estndar posibilita el crecimiento de cualquier tipo de microorganismo, especialmente se utiliza para el recuento de bacterias aerbicas, o en lcteos y alimentos. La hemlisis de las bacterias presentes en el rostro se Los medios de cultivos selectivos permiten el crecimiento microbiano especfico, como el APD y AS. Bibliografa Chvez, M; G, Livia; E, Muoz; M, Otiniano; M, Lujn & J, Castro. 2006. Evaluacin comparativa de Agar sangre de carnero y Agar sangre humana en el aislamiento de Streptococcus beta hemolticos de pacientes con faringitis del Hospital Almanzor Aguinaga Asenjo de Chiclayo. Chiclayo, Per. Revista medica Vallejiana. Vol 4. No. 2. 148-154p. Madigan, M.; Martinko, J. & Parker, J. 2004. Biologa De Los Microorganismos. 10a edicin. Editorial Pearson Educacin S.A. Madrid, Espaa. 1096p.

Prescott, L.; Harley, J. & Klein, D. 2002. Microbiologa. 4 ta edicin. Editorial Mc Graw- Hill Interamericano. Aravaca, Espaa. 1004p. Rivas, O. 2009. Folleto del Curso de Laboratorio de Microbiologa Aplicada. Editorial Tecnolgica, ITCR. Cartago, Costa Rica. 69p. Rivas, O. 2009. Material didctico complementario para el Curso de Laboratorio de Microbiologa Aplicada IB-2106. Editorial Tecnolgica, ITCR. Cartago, Costa Rica. 48p.