UNIVERSIDAD VERACRUZANA | CAMPUS XALAPA |

FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA |

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Práctica No. 4 Identificación general de los carbohidratos.

Fecha de realización: 30 de marzo de 2022

Objetivo

Determinar la presencia de carbohidratos mediante reacciones de identificación

específicas.

Resumen

Los carbohidratos son moléculas de gran importancia en el desarrollo y supervivencia

de los seres vivos. Forman parte fundamental de los procesos biológicos más relevantes en el
ser humano. Existen miles de carbohidratos y cada uno cumple un papel esencial por lo que
las pruebas de identificación facilitan la identificación de cada uno de ellos.

En esta práctica se realizaron diferentes pruebas de identificación como la prueba de

Molisch, Benedict, Fehling, Bial y Seliwanoff. Para cada una, los resultados variaron en todos
los carbohidratos pues cada prueba destaca una característica única de cada carbohidrato.

Introducción

Los carbohidratos son las biomoléculas más abundantes de la naturaleza, ya que

comparten un vínculo directo entre la energía solar y la energía de los enlaces químicos de los
seres vivos. Estos comienzan formándose durante la fotosíntesis, la cual es un proceso
biológico donde se captura la energía solar y se utiliza para impulsar la biosíntesis de
moléculas orgánicas con energía abundante a partir de otras con poca energía.

La principal función de los carbohidratos es proporcionar energía al cuerpo. La energía

que utiliza nuestro organismo se deriva de la energía solar, las plantas toman está energía
almacenándola en forma de alimentos mediante el proceso que se conoce como fotosíntesis.
El organismo vivo, mediante procesos bioquímicos durante la digestión, libera potencial que
contienen los alimentos y la utiliza para el mantenimiento de sus funciones. Los carbohidratos
no son sólo una fuente importante de producción de energía dentro de las células, sino que
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también son las estructuras fundamentales de las células y componentes de numerosas rutas
metabólicas.

Atendiendo a su estructura, los carbohidratos se pueden clasificar en:

1. Monosacáridos simples y compuestos.

2. Oligosacáridos.

3. Polisacáridos simples y compuestos.

Marco teórico

Para la identificación de carbohidratos existen varias pruebas generales y específica

que tienen base en las propiedades químicas que presentan estas sustancias como:

➢ Poder Reductor: acción sobre sustancias colorantes, acción sobre óxidos metalices.
➢ Deshidratación: reacciones furfúricas.
➢ Formación de compuesto de inclusión.

Muchas de estas reacciones permiten a su vez diferencias monosacáridos cetónicos de

los que poseen un grupo aldehído (Reacción de Seliwanoff), otras permiten diferenciar
pentosas de hexosas (Reacción de Bial). Algunos monosacáridos, reductores que no sean
efímeros, pueden diferenciarse entre sí y ser identificados, por la formación de osazonas con
el reactivo de Fenilhidracina.

• Pruebas de identificación de carbohidratos:

Prueba de Molish: La prueba de Molisch es una prueba química sensible, llamada así
por el botánico austriaco Hans Molisch, para la presencia de carbohidratos, basada en la
deshidratación del carbohidrato por ácido sulfúrico o ácido clorhídrico para producir un
aldehído, que se condensa con dos moléculas de un fenol (generalmente α -naftol, aunque
otros fenoles como el resorcinol y el timol también dan productos de color), lo que da como
resultado un anillo violeta.

Prueba de Lugol o yodo: Esta prueba plantea la reacción de identificación de

polisacáridos como el almidón. Una solución de yodo - diyodo disuelto en una solución acuosa
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de yoduro de potasio forma complejos coloreados por adsorción con los polisacáridos. Con el
Almidón reacciona para dar una coloración azulada o negra gracias a la formación de hélices
donde la cadena lineal del almidón se une con las moléculas de yodo. El glucógeno forma una
coloración pardo-rojiza, debido a que es parcialmente hidrolizada.

Prueba de Fehling: Esta prueba plantea la reacción de identificación de azucares

reductores. Se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Este se
oxida a un ácido carboxílico y reduce el Sulfato de Cobre en medio alcalino a óxido cuproso,
que forma un precipitado de color rojo. Lo importante de la reacción es que el aldehído del
carbohidrato puede detectarse fácilmente, aunque exista en muy pequeña cantidad.

Prueba de Benedict: Esta prueba plantea la reacción de identificación de azúcares

reductores, este reactivo es más estable que el de Fehling. Se fundamenta en que el que el
ion cúprico proveniente del sulfato cúprico, en medio alcalino es capaz de reducirse por efecto
del grupo Aldehído del azúcar a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un
precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso. La reacción es similar a la reacción
con el reactivo Fehling.

Prueba de Barfoed: Esta prueba plantea la reacción de identificación de monosacáridos,

debido a que el reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solo puede ser reducido por
monosacáridos. Se fundamenta como muestra la figura en la reducción de cobre 2+ que hace
parte del acetato cúprico a cobre 1+ en forma de Oxido cuproso, formando un precipitado color
rojo ladrillo.

Prueba de Seliwanoff: Esta prueba plantea la reacción de identificación de Aldosas y

Cetosas. Se basa en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas más rápido
que las aldosas. Las Cetosas se deshidratan más rápido dando derivados de furfural que se
condensan con el resorcinol para formar un complejo rojo.

Prueba de Bial para pentosas: Cuando se calientan pentosas con HCl concentrado se
forma furfural, que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar un color
verde-azuloso. La reacción no es absolutamente específica para las pentosas, ya que el
calentamiento prolongado de algunas hexosas produce hidroximetil furfural que también
reacciona con orcinol dando complejos coloreados.
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Materiales

Material de laboratorio

➢ 20 Tubos de ensaye 13 x 100

➢ 4 Pipetas graduada de 10 ml
➢ 4 Pipetas graduadas de 5 ml
➢ 1 Piceta
➢ 1 Gradilla
➢ Perlas de vidrio
➢ Algodón
➢ Hielo
➢ Vidrios de reloj (diámetro de 9-12 cm).

Reactivos

➢ Ácido sulfúrico concentrado.

➢ HNO3 concentrado.
➢ NaOH diluido.
➢ Clorhidrato de fenilhidrazina.
➢ Solución de yodo.
➢ Soluciones de carbohidratos 0.1M: Glucosa, Maltosa, Sacarosa, Galactosa, Lactosa,
Fructosa, Manosa, Xilosa, Dextrosa, Arabinosa, Celulosa, Almidón.
➢ Reactivo de Benedict.
➢ Reactivo de Seliwanoff.
➢ Reactivo de Bial.
➢ Reactivo de Fehling.
➢ Reactivo de Molisch.
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Metodología

PRUEBA DE FEHLING
A 1 mL de muestra Hervir en baño Comparar las
de carbohidrato maría durante 5 cantidades de Cu2O
agregar 1 mL de minutos. formado en cada una
reactivo de Fehling. de las muestras.

PRUEBA DE MOLISCH
En tubos de ensayo Añadir 2 Verter 0.6 mL de Un color violeta-
agregar 1 mL de las gotas de H2SO4 concentrado rojizo en la
soluciones de los reactivo de por las paredes del superficie indica
diferentes Molisch y tubo hasta formar una una prueba
carbohidratos. mezclar. capa bajo el agua. positiva.

PRUEBA DE BENEDICT
En un tubo de ensaye Calentar en La aparición de un
agregar 1 mL del baño maría a precipitado color
reactivo de Benedict y ebullición amarillo, verde o rojo
0.2 mL de las durante 5 indica una prueba
soluciones de los minutos. positiva.
carbohidratos.
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PRUEBA DE SELIWANOFF
PASOS CETOSAS
A 0.2 mL de las Poner los Anotar el momento en el cual
soluciones de tubos en baño aparece color en cada tubo, un
carbohidratos 0.1 M María color rojo indica la presencia
añadir 1 mL del hirviendo y de cetosas. El reactivo da un
reactivo de Seliwanoff. observar cada color verde con las pentosas
5 min.

PRUEBA DE BIAL PARA

PENTOSAS
A 0.2 mL de las Calentar en Un resultado positivo da un
soluciones de baño maría color azul-verdoso. Las
carbohidratos 0.1 M, hirviente hexosas producen un color
añadir 1 mL del durante 15 amarillo pardo.
reactivo de Bial. min.

PRUEBA DE YODO

Acidifique la Agregue luego dos gotas de

muestra con yodo y compare los colores
HCl diluido. obtenidos con los de yodo en
agua.

PRUEBA DE
BARFOED
Añadir 0.16 mL Hierva por un
En un tubo de ensaye minuto, deje
poner 0.3 mL del de la solución
de cada azúcar reposar y
reactivo de Barfoed observar.
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Resultados

PRUEBA/SOLUCIÓN SELIWANOFF MOLISCH BENEDICT BIAL FEHLING

FRUCTOSA NEGATIVA NEGATIVA POSITIVA NEGATIVA POSITIVA
GLUCOSA NEGATIVA --------------- POSITIVA --------------- -------------
GALACTOSA NEGATIVA NEGATIVA POSITIVA NEGATIVA POSITIVA
ALMIDÓN NEGATIVA --------------- POSITIVA --------------- -----------
SACAROSA NEGATIVA NEGATIVA POSITIVA NEGATIVA NEGATIVA
LACTOSA NEGATIVA NEGATIVA POSITIVA NEGATIVA POSITIVA
PROBLEMA POSITIVA --------------- POSITIVA --------------- ------------

Imagen 1. Prueba de Fehling en Imagen 2. Prueba de Benedict en

carbohidratos. Reacción positiva. carbohidratos. Reacción positiva.

Imagen 3. Prueba de Bial en Imagen 4. Prueba de Molisch en

carbohidratos. Reacción negativa. carbohidratos. Reacción negativa.

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Imagen 5. Prueba de Seliwanoff en

carbohidratos. Reacción positiva para
muestra problema.

Discusión

De acuerdo con las pruebas de identificación de carbohidratos se obtuvo que en la

prueba de Seliwanoff, que sirve para la identificación de aldosas y cetosas, solo arrojó un
resultado positivo en la muestra problema, recordando que fue jugo de mango.

En la prueba de Molisch solo se emplearon cuatro soluciones: fructosa, galactosa,

sacarosa y lactosa de las cuales el resultado fue negativo. Se desconoce el porqué de estos
resultados, ya que todos son carbohidratos y debieron arrojar un resultado positivo (anillo color
violeta).

La prueba de Benedict ayuda a la identificación de azúcares reductores, en esta

práctica, se obtuvieron resultados positivos, pero en diferentes porcentajes de azúcares, ya
que en galactosa, glucosa y almidón se observó una coloración amarillo canario, mientras que,
en sacarosa, lactosa, fructosa y muestra problema, se observó una coloración rojo ladrillo,
indicando una mayor concentración de azúcares reductores.

En la prueba de Bial, se obtuvieron resultados negativos para las soluciones de

sacarosa, lactosa, fructosa y galactosa, debido a que esta prueba es para la identificación de
pentosas y ninguna de las soluciones ocupadas lo es.
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La prueba de Fehling se utiliza para la identificación de azucares reductores. Se

fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído, por ello, se consiguieron
resultados positivos para las soluciones de fructosa, galactosa y lactosa; y un resultado
negativo para sacarosa.

Conclusión

Gracias a esta práctica, se logró determinar la presencia de carbohidratos mediante

reacciones de identificación específicas. Los carbohidratos son una de las macromoléculas
más importantes en los seres vivos, ya que proporcionan energía al cuerpo.

Se concluye que los carbohidratos tienen características que hacen que se diferencian
entre sí. Por tal motivo, en las pruebas de identificación, ciertos carbohidratos dieron negativos
y otros positivos. Los resultados positivos de las pruebas de identificación se fundamentan de
acuerdo con la estructura del carbohidrato, cada una destacando, por ejemplo, a las aldosas,
cetosas, pentosas, etc.

Cuestionario

1. ¿Qué errores pueden ser introducidos por aumento de la concentración de los

reactivos? ¿Cómo podrían ser corregidos?

Se volvería un falso positivo, puede ser corregido por la introducción de otro reactivo.

2. Glucosa, manosa y fructosa forman la misma osazona. ¿Son los mismos tiempos de
formación?

Forman la misma osazona debido a que la configuración de los átomos 3, 4, 5 y 6 es la misma,

pero los cristales de la osazona tienen forma y puntos de fusión diferentes.

3. Celulosa, el compuesto orgánico más abundante en la biosfera es un homopolisacárido

lineal de D-glucosa. Sin embargo, los humanos no pueden digerirla. Explica por qué.
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Porque los seres humanos contamos con enzimas que rompan los enlaces de glucosa de
ese polisacárido (celulosas).

Referencias

Huertas, T. (2016). Unidad didáctica para la identificación cualitativa – experimental de

carbohidratos; una estrategia de aula para la construcción de loncheras saludables.
Universidad Nacional de Colombia. Recuperado de
https://repositorio.unal.edu.co/bitstream/handle/unal/58299/TatianaAlejandraHuertasN.
2016.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Nelson, D. L. (2007) Lehninger: Principios de Bioquímica. Editorial Omega. 5ª Edición.

Ramírez, M. (2021). Carbohidratos. Universidad Nacional Autónoma de México. [] Recuperado

el 05 de abril de 2022 en
https://fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_3.pdf