INFORME DE LABORATORIO – BIOQUÍMICA

(PRÁCTICAS N°2 Y N°4)

DOC. MARTHA LUCÍA JIMÉNEZ

INTEGRANTES:
ACEVEDO YEPEZ DINA LUZ
ACOSTA HERNANDEZ JOSE DAVID
DE LA ROSA MARQUEZ JARYS DANIELA

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA: TECNOLOGÍA EN REGENCIA DE FARMACIA
II SEMESTRE
SINCELEJO - SUCRE
2022
 PRACTICA Nº 2. IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Objetivo:
Identificar carbohidratos en muestras orgánicas utilizando reactivos específicos..

Introducción:
Los carbohidratos son las biomoléculas más abundantes en la superficie terrestre,
conocidas como azúcares. Junto con las proteínas y las grasas, los carbohidratos son necesarios
para el cuerpo humano ya que contiene un combustible que permite llevar a cabo las actividades
físicas, representan aproximadamente un 75% de la materia orgánica existente; lo que significa
que es la biomolécula más abundante en el planeta.
Son las primeras biomoléculas que se forman a partir de la energía luminosa por medio de
la fotosíntesis, de modo que son esenciales en la homeostasis o equilibrio global del planeta.
Además, son la forma más versátil y rápida de producir energía en las células.
Su cuerpo descompone los carbohidratos en glucosa. La glucosa o azúcar en la sangre, es la
principal fuente de energía para las células, tejidos y órganos del cuerpo. La glucosa puede
usarse inmediatamente o almacenarse en el hígado y los músculos para su uso posterior. Entre los
carbohidratos encontramos: Los azúcares, estos son conocidos como carbohidratos simples por
su forma básica, los almidones, son carbohidratos complejos que están formados por muchos
azúcares simples y la fibra; la cual es un tipo de carbohidrato que al igual que los almidones son
moléculas complejas.
Entre los alimentos que contienen carbohidratos están los granos, frutas, lácteos, legumbres,
bocadillos y dulces, jugos y refrescos, bebidas deportivas, bebidas energéticas, en la papa, maíz
etcétera. Cabe destacar que los carbohidratos más adecuados para el consumo humano tanto para
el aporte de energía como para el bienestar de su salud son los granos integrales, aquellos que
contengan mucha fibra los granos refinados (Biblioteca nacional de medicina , s.f)
 Marco teórico
Los carbohidratos son compuestos que contienen además de carbono, hidrógeno y
oxígeno en proporción de 2 a 1. Este nombre también se usa para algunos de sus derivados en los
que la definición dada no se cumple estrictamente. Los carbohidratos más simples contienen solo
C, H, O pero muchas de las que existen en la naturaleza contienen también elementos como P, S
y/o N. Los carbohidratos y sus derivados se encuentran en casi todas las partes de la célula,
desempeñando papeles tanto estructurales como funcionales. Estos compuestos son de
importancia fundamental en la biosfera y se elaboran durante la fotosíntesis. Muchas plantas
almacenan grandes cantidades de hidratos de carbono, que en algunos casos, son consumidos por
el hombre y los animales para su alimento. En el hombre más del 60% de los requerimientos
totales de energía proviene de la oxidación de los hidratos de carbono, por lo tanto en la dieta
este tipo de biomoléculas ocupan un lugar importante. Al ingerir los carbohidratos complejos, la
molécula sufre un proceso de digestión donde es hidrolizada a moléculas más pequeñas como la
glucosa, luego esta es absorbida, parte de ella se almacena temporalmente como glicógeno y otra
parte es oxidada a CO2 y H2O. 11 En la naturaleza también se encuentran moléculas derivadas
de monosacáridos resultado de sufrir reacciones de óxido reducción y cumplen funciones muy
importantes en el campo biológico, como es la D – 2 - desoxirribosa, manitol, ácido ascórbico,
ácido glucurónico, N-acetilglucosamina. Los carbohidratos también tienen muchos usos a nivel
industrial y farmacéutico. (Cardeño, 2019)

Materiales y reactivos:
Tubos de ensayo, espátula, Beacker, Baño de María, plancha de calentamiento pinzas
para tubo de ensayo, gradilla, Agua, Reactivo de Molish, H2SO4 concentrado, HCl concentrado,
Solución al 10% de HCl, solución al 10% de NaOH, reactivo de Fehling, reactivo de Tollens,
reactivo de Seliwanoff, solución de lugol, soluciones al 5% de glucosa, fructosa, sacarosa,
solución al 1% de almidón.
Procedimiento

Reacción de Molish: En un tubo de ensayo tome 2 ml de la solución problema, agregue 2 gotas

de solución de alfa naftol, luego añada cuidadosamente por las paredes del tubo
aproximadamente 1 ml de H2SO4 concentrado hasta que se formen dos capas, observe
cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase. Repita la prueba con soluciones de
otros azúcares Determinación de azúcares reductores:

Reacción de Fehling: En un tubo de ensayo mezcle 1 ml de solución A de Fehling y 1 ml de

solución B, agregue 2 ml de la solución problema. Caliente el tubo de ensayo con el contenido en
un baño de maría por espacio de 5 minutos. Observe la aparición de un precipitado de color rojo
ladrillo en aquellos tubos en que la prueba es positiva. Repita el procedimiento anterior
utilizando otras soluciones como sacarosa, fructosa, lactosa.

Reacción de Tollens: 12 Coloque en un tubo de ensayo 1ml de Reactivo de Tollens, añada 2 ml

de la solución problema, caliente en baño María durante 10 o 15 minutos. Observe si hay
formación de un espejo de plata en las paredes del tubo de ensayo.

Reacción de Seliwanoff: En un tubo de ensayo mezcle 1 ml de solución problema y 1 ml del

reactivo. Caliente a ebullición la mezcla, el desarrollo de un color rojo en 2 minutos, es
indicativo de que la prueba es positiva para la presencia de cetosas.

Hidrólisis de la Sacarosa: Tome tres tubos de ensayo y coloque en cada uno 2 ml de solución de
sacarosa, y agregue igual volumen de cada uno de las siguientes sustancias así: agua al primero,
HCl al 10% al segundo y NaOH al 10% al tercero. Caliente todos los tubos en baño de María y
agregue a cada tubo 1 ml de reactivo de Fehling, caliente nuevamente y observe en cada caso el
grado de hidrólisis que hubo.

Prueba para polisacáridos: Tome 1 ml de solución al 1% de almidón y agregue 3 gotas de

reactivo de lugol. Observe el desarrollo de un color azul
RESULTADOS DE LABORATORIO IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

● Reacción de Molish:

Inicio prueba Molish Resultado dos capas o anillos violacio

Resultados:

Determinación de azúcares reductores:

Reacción de Fehling:
⮚ Determinación de azúcares reductores:

● Reacción de Fehling:

Antes Prueba Fehling baño de maria

Resultado final Reacción Fehling

Resultados:

● Reacción de Tollens:

Prueba Tollens Baño de maria Resultado final reacción Tollens

Resultados:
 ● Reacción de Seliwanoff:

Antes de la reacción Después de la reacción

Resultados:
● Hidrólisis de la Sacarosa:

Hidrólisis sacarosa antes baño maria Hidrólisis de sacarosa baño maria

Resultados:
 ● Prueba para polisacáridos:

Almidón y Lugol (ANTES)

Almidón y Lugol (DESPUÉS)

Resultado:
 Cuestionario resuelto

1. Escriba el fundamento y una ecuación para cada una de las pruebas realizadas

Reacción de Molish.

FUNDAMENTO:El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el

ion Cu2+ (otorgado por el sulfato cúprico), de color azul, es capaz de reducirse por efecto
del grupo Aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+, el cual precipita como oxido de
cobre I, Cu2O, de color rojo.

Reacción de Fehling.

FUNDAMENTO: El reactivo de Fehling se utiliza para la detección de sustancias

reductoras, particularmente azúcares reductores. Se basa en el poder reductor del grupo
carbonilo de un aldehído que pasa a ácido reduciendo la sal cúprica de cobre (II), en
medio alcalino, a óxido de cobre (I)
Reacción de Tollens.

FUNDAMENTO: La prueba de Tollens se basa en esta identificación ya que el azúcar

reductor que contiene aldehídos, reduce al catión Ag+ a plata metálica (Ag0) que se
deposita en la superficie del recipiente formando un espejo característico.

Reacción de Seliwanoff:

FUNDAMENTO: La fructosa da positiva a esta prueba. La sacarosa da negativa a esta

prueba ya que la molécula, si bien está constituida por glucosa y fructosa, en la unión alfa
(1-2) se anulan las propiedades reductoras de la glucosa y la fructosa, por lo que no da
positiva, la sacarosa da positiva cuando se le realiza una hidrólisis ácida, lo que la
convierte en un azúcar invertido o invertasa, donde se rompe el enlace alfa (1-2) y
permite que la reacción con esta prueba dé positivo.
Hidrólisis de la Sacarosa:

FUNDAMENTO: La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres

por lo que carece de poder reductor y la reacción con el licor de Fehling es negativa, tal y
como ha quedado demostrado en el experimento.

Prueba para polisacáridos:

FUNDAMENTO: La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se

introduce entre las espiras de la molécula de almidón. No es por tanto, una verdadera
reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las
propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta.
2. Para cada reactivo consulte su composición.
● El reactivo de Fehling se compone de dos soluciones: La solución A es de color
celeste y está formada por sulfato cúprico pentahidratado (CuSO4∙5H2O); y la
solución B es incolora y contiene NaOH como medio básico tartrato de sodio y
potasio (como estabilizador del Cu2+).

● El reactivo de Tollens es un complejo acuoso de diamina-plata amoniacal

[Ag(NH3)2]NO3 (ac). Es la forma más común del reactivo de Tollen,
presentado usualmente bajo la forma de nitrato. Recibe ese nombre en
reconocimiento al químico alemán Bernhard Tollens. Se usa en ensayos cualitativos
de aldehidos, cetonas y enoles. Una vez que ha sido identificado un grupo
carbonilo en la molécula orgánica usando 2,4-dinitrofenilhidrazina (también
conocido como el reactivo de Brady o 2,4-DNPH), el reactivo de Tollens puede ser
usado para discernir si el compuesto es una cetona o un aldehído. 
● El reactivo Seliwanoff consiste en resorcinol y ácido clorhídrico concentrado:
La hidrólisis ácida de polisacáridos y oligosacáridos da azúcares simples.

● El cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico en su forma hidratada)​ es un

compuesto químico de fórmula HCl, formado por un átomo de cloro unido a uno
de hidrógeno.

● El Hidróxido de sodio  (NaOH), también conocido como soda cáustica o lejía, es

una sustancia altamente versátil que se utiliza en una variedad de procesos de
fabricación. El hidróxido de sodio es un coproducto de la producción de Cloro.
 ● La preparación de la disolución de Lugol suele consistir en 5 g de I2 y 10 g de KI
diluidos con 85 mL de agua destilada, dando una disolución marrón con
concentración total de yodo de 150 mg/Ml.

3. Establezca diferencias entre la glucosa líquida y sólida

● Glucosa sólida: Extraída de la caña.

Los sólidos de glucosa es un polvo blanco ligeramente dulce e higroscópico,
● Glucosa líquida: La glucosa líquida o jarabe de glucosa es un ingrediente esencial para
dar elasticidad a la pasta de goma, fondant, masas y postres. Se utiliza para la elaboración
de caramelos, helados y repostería en general.
se obtiene de la descomposición de almidones a través de un proceso llamado hidrólisis
Se utiliza almidón de maíz para su elaboración, aunque también puede obtenerse a partir
de almidón de arroz, patata, cebada o trigo.
La glucosa líquida tiene la capacidad de absorber o ceder humedad
Se utiliza en las masas batidas y fermentadas como conservado.

Hay una gran diferencia entre el jarabe de glucosa y el azúcar invertido (que también se utiliza
en bizcochos, helados…), y es que el jarabe de glucosa tiene un grado de dulzor inferior a la
mitad del azúcar común.
La glucosa líquida tiene la capacidad de absorber o ceder humedad
Se utiliza en las masas batidas y fermentadas como conservado
 4. Qué trastornos se producen por excesos y deficiencia de glucosa en sangre

❖ Hipoglicemia:

Es el bajo nivel de azúcar o glucosa en tu sangre menor a 60 mg/dl, que puede

generar síntomas como sudoración, mareo, confusión, pérdida de consciencia,
entre otros.
❖ Hiperglucemia:
Se refiere a altos niveles de glucosa en sangre. Por ejemplo, cifra en ayunas mayor
de 110 mg/dl. Si la hiperglucemia es repetitiva, puede generar complicaciones a
largo plazo, como las siguientes:

Al haber niveles de glucosa altos en sangre, de manera persistente, puede desarrollarse un

daño permanente en los nervios que te permiten mover, sentir frio, calor o presión. Esto se
produce porque la glucosa alta, lentamente va lesionando los nervios hasta afectar la función de
los mismos.

● Impotencia sexual
● Daño en los nervios ((neuropatía diabética)
● Entumecimiento y temblor de extremidades
● Diarrea
● Pérdida de sensibilidad en algunas partes del cuerpo
● Incontinencia urinaria (pérdida de control de la vejiga)
● Cambios de la visión
● Mareo
● Debilidad muscular
● Dificultad para pasar los alimentos
● Contracciones musculares involuntarias
 ● Ardor
● Dolores inexplicables en extremidades.
Los altos niveles de glucosa de forma persistente en la sangre también pueden causar Nefropatía
diabética (Daño renal). Puede causar daño en el funcionamiento de los riñones. Lo que puede
producir problemas como la hipertensión arterial, además de eso problemas para filtrar algunas
de las sustancias que son potencialmente tóxicas y es posible hallar en la sangre.
La elevación de la glucosa puede desarrollar enfermedades del corazón y de los vasos
sanguíneos. (Ministerio de salud y protección social , 2022)

❖ Otras complicaciones como:

● Daño en los ojos (retinopatía)
● Aumento de enfermedades en piel y en la boca: la diabetes puede hacerte más
susceptible a infecciones bacterianas y por hongos.
● Osteoporosis: disminución de la densidad ósea

5. Mencione ejemplos específicos del uso de carbohidratos en la industria farmacéutica

como medicamentos.

1. GLUCOSA

A partir de la glucosa se prepara suero glucosado isotónico (5%) usado en terapia de

hidratación y alimentación parenteral

En la cocción y fermentación de la glucosa mejora la porosidad y da buenos productos de sabor,

retrasa el envejecimiento.

2. SACAROSA

La sacarosa sirve para obtener jarabe simple (edulcorante, recubrimiento de grageas).

3- FRUCTOSA

Se emplea como azúcar para diabéticos ya que su degradación no es insulinodependiente.

4 -LACTOSA

La aplicación principal es el uso de la lactosa para la producción de sustitutos de la leche para

bebés y alimentos de mama.

5- ALMIDÓN

El almidón es un polisacárido homogéneo de utilidad en la fabricación de comprimidos,

obtención de dextrina (alimentación infantil), obtención industrial de glucosa.
 PRÁCTICA Nº 4. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

Objetivo:
Caracterizar proteínas en la solución de albúmina mediante ensayos químicos con reactivos
específicos.

Introducción:
Las proteínas son moléculas grandes y complejas que desempeñan funciones vitales en el
cuerpo, pues estas son como mini trabajadores de las células. Sin lugar a duda son altamente
necesarias para la formación estructural, función y regulación de los tejidos, así mismo órganos
del cuerpo. Las proteínas están formadas por C, H, O y N. En algunos casos pueden contener S,
P, Fe, Mg y Cu, entre otros elementos. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas
moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían por tanto, los monómeros de unidad.
Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos. La unión de un bajo número de
aminoácidos da lugar a un péptido; si el número de aminoácidos que forma la molécula no es
mayor de 10, se denomina oligopéptido, si es superior a 10 se llama polipéptido y si el número es
superior a 50 aminoácidos se habla ya de proteína. Las proteínas son cadenas de aminoácidos
que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de
funciones. Están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su
secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas. Las proteínas desempeñan
un papel fundamental en los seres vivos y son las biomoléculas más versátiles y más diversas.
Como se mencionó antes, estas biomoléculas realizan una enorme cantidad de funciones de alta
importancia, entre ellas, funciones estructurales, enzimáticas, transportadoras, etcétera.

Marco teórico:
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos
unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el
metabolismo, la contracción muscular o la respuesta inmunológica. Las moléculas proteicas van
desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y el pelo, hasta los glóbulos
compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones
metabólicas. Tienen un peso molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno
de sus órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de las que sólo
un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo para construir y mantener las
células, aunque su descomposición química también proporciona energía, con un rendimiento de
4 kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono (FALTA INSERTAR CITA)

Materiales y Reactivos.
Tubos de ensayo, espátula, Beacker, Baño de María, plancha de calentamiento, pinzas
para tubo de ensayo, gradilla, Agua, Reactivo de Biuret, HNO3 concentrado, alcohol absoluto,
Solución de NaOH al 10%.

Procedimiento
. Preparación de la muestra En un beaker de 100 ml coloque la clara de un huevo y
adicione agua hasta completar un volumen aproximado de unos 80 ml, mezcle la clara con el
agua con ayuda de un agitador y utilice esta solución para la realización de los diferentes
ensayos.
Reacción Xantoproteica: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de
ovoalbúmina y enseguida 5 gotas de HNO3, observar y explicar los cambios observados por la
adición del ácido a la proteína
Reacción de Biuret: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de ovoalbúmina
y 1 ml del reactivo de Biuret. Anote las observaciones.
Solubilidad en etanol: En un tubo de ensayo adicione 2 ml de la solución de
ovoalbúmina y 3 ml de etanol. Observe lo ocurrido.
Desnaturalización: Tome tres tubos de ensayo, agregue 1 ml de solución de
ovoalbúmina y luego rotularlos y proceda de acuerdo con el siguiente esquema
 RESULTADOS DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
PRUEBA DEL HUEVO

Reacción Xantoproteica:

ANTES DESPUÉS (NHO3)

RESULTADO:
Como resultado tenemos el color amarrillo en dicha reacción. La reacción es positiva para
prótidos que contienen aminoácidos con anillos aromáticos en esta reacción estos anillos se
nitran, por lo que aparece el color amarrillo intenso.
Reacción de Biuret:

ANTES DESPUÉS
RESULTADO:
Esta reacción es positiva cuando la molécula contiene dos uniones peptídicas o más, cercanas
entre sí ( tripéptidos en adelante). Las proteínas dan color violeta, las peptonas color
rojo-morado. El color morado o violeta se debe a la formación de un complejo de coordinación
con el CU++.
 Solubilidad en etanol:

RESULTADO:
En esta reacción podemos observar que las cadenas de proteínas que hay en la clara de huevo,
denominadas proteínas globulares se encuentran enrolladas adoptando una forma esférica, al
añadir etanol ocurre lo mismo que cuando se fríe un huevo, las cadenas de proteínas se
desarrollan y se forman enlaces que unen unas cadenas con otras. Este cambio de estructura da a
la clara de huevo la consistencia y color que se observa en un huevo cocinado.
 Desnaturalización:

A. Calentamiento hasta coagulación.

CUESTIONARIO RESUELTO

RESULTADO:
Observamos que se solidifico formando una especie de masa al final del tubo incluso hubo un
cambio de color en la clara de amarrilo a blanco.
 B. HCL

RESULTADO:
Se formó una especie de tapón de gel blanco muy consistente.

C. NaOH

RESULTADO:
Hubo un cambio brusco y se formó un gel transparente.
 1. Define que es punto isoeléctrico de una proteína y que utilidad tiene este.
Se le denomina punto isoeléctrico a la concentración de iones hidrógeno, o al pH, para el
cual la concentración del ion híbrido de una proteína es máxima y el movimiento neto de las
moléculas de soluto en un campo eléctrico es prácticamente nulo. El punto isoeléctrico es
importante porque proporciona información útil para razonar sobre el comportamiento de
los aminoácidos y proteínas en solución. Así, la presencia de grupos ionizables en éstas
moléculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad.

2. Describa el fundamento de la electroforesis y la cromatografía como método de

estudio de las proteínas y su utilidad en el campo de la farmacia.
La electroforesis es una técnica de laboratorio que se usa para separar moléculas de
ADN, ARN o proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica. Se usa una corriente eléctrica
para mover las moléculas a través de un gel o de otra matriz. En medicina, la electroforesis es
una técnica habitual en el laboratorio clínico. Permite separar especies químicas (ácidos
nucleicos o proteínas) a lo largo de un campo eléctrico en función de su tamaño y de su carga
eléctrica. Los ácidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa.
La cromatografía es una técnica que se utiliza para la separación de sustancias que se
encuentran en una misma mezcla dependiendo de la capacidad de migración que tienen los
componentes ya que son arrastrados por una fase móvil a través de una fija, formado por:
Muestra, Eluyente (es el disolvente encargado de disolver la mezcla), Fase Móvil, Fase
Estacionaria. Esta técnica es muy utilizada en la industria farmacéutica, para determinar:
Impurezas de materias primas, Concentración de principios activos, En general para el
control de calidad de productos.

Técnicas cromatográficas utilizadas en la separación dé proteínas:

❖ Cromatografía de exclusión molecular: En general, es el modo de identificar los
procesos de separación de biomoléculas de acuerdo a su tamaño cuando una solución
fluye a través de una cama empacada con un medio poroso.
❖ Cromatografía de intercambio iónico: La cromatografía de intercambio iónico (Ion
Exchange Chromatography, IEC) separa las moléculas en base a su carga iónica neta. La
 separación se lleva a cabo por la competencia entre proteínas con diferente carga
superficial por grupos cargados opuestamente sobre un adsorbente o una matriz de
intercambio iónico. Actualmente, IEC es una de las técnicas de purificación de proteínas
más usadas.
❖ Cromatografía de interacción hidrofóbica: Este es uno de los métodos de purificación
de macromoléculas biológicas más utilizado, especialmente para proteínas terapéuticas.
❖ Cromatografía de fase reversa: Describe un tipo de cromatografía en la cual la fase
estacionaria es menos polar que la fase móvil . La RPC es una técnica de purificación
capaz de separar componentes con características muy similares, como proteínas que
difieren en solo un aminoácido e isómeros conformacionales de péptidos.

Es decir, la cromatografía es un potente método de separación y análisis de proteínas. Las

técnicas cromatográficas pueden llevarse a cabo por diferentes mecanismos como son: absorción
continua, adsorción, partición de intercambio iónico. Sus ventajas son obvias en la purificación
de proteínas, esencialmente las de interés farmacéutico.

3. Consulte de qué manera se hace la determinación de proteínas en el laboratorio

clínico. Qué utilidad tiene esto como prueba diagnóstica y cuál es el fundamento del
método.

En esta práctica se utilizan tres métodos para la cuantificación de proteínas: Biuret,

Bradford y BCA. Para cada uno de los métodos se realiza una curva estándar, el cálculo del
coeficiente de extinción y el rango de sensibilidad.Se procede a la cuantificación de dos muestras
problemas de baja y alta concentración, respectivamente, y se discuten las ventajas e
inconvenientes de cada uno de los métodos.

Métodos para la cuantificación de proteínas: ventajas e inconvenientes

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina
básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere
conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el diagnóstico de
enfermedades, así como para otros muchos propósitos.

❖ Método de Biuret
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los
grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con
4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad
de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de
manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy
baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados
muy concentrados (por ejemplo en suero).
❖ Método de Bradford
Se basa en la unión de un colorante, Coomassie Blue G-250 (también
Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos
formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para
formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor
que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato
y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que
interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.

❖ Método de BCA
El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un
complejo púrpura intenso con iones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo
forma la base de un método analítico capaz de monitorizar el ión cuproso
producido en una reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio alcalino
(reacción de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromóforo proporciona un
método para la cuantificación de proteínas que es sencillo, rápido, muy
sensible, además, muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros
métodos.
por ejemplo:
 OHProteína + Cu2+ → Cu1+
Cu1+ + BCA → complejo púrpura BCA- Cu1+

Dentro del margen de utilidad se puede decir que la determinación de las proteínas totales
sirve para el diagnóstico de distintas enfermedades y fracciones que pueden verse alteradas. Así,
la determinación de las proteínas totales sirve para el diagnóstico de:
· Afecciones hepáticas
· Afecciones de la médula ósea
· Otras afecciones del metabolismo o nutricionales.

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO BIURET

La reacción o prueba de Biuret es un método que detecta la presencia de compuestos de
tres o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos. El
reactivo de Biuret consiste en una solución acuosa de sulfato cúprico (CuSO4) en medio alcalino
(NaOH).

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO BRADFORD

El método de Bradford se basa en la variación de absorbancia producida por el cambio de

color del Coomassie Brilliant Blue G-250. De acuerdo a la estructura de la molécula de este
colorante se observa que posee dos grupos de aminas terciarias con la carga en resonancia,
susceptibles de protonarse.

FUNDAMENTOS DEL MÉTODO BCA

Este método combina la reducción del Cu+2 a Cu+1 en medio alcalino (reacción de
Biuret) con la detección selectiva del catión Cu+1 utilizando el ácido bicinconínico. El producto
de la reacción tiene un color púrpura formado por el complejo de BCA con un ion Cu+1.
 CONCLUSIONES:
Tal y como se proyectó, para esta práctica los carbohidratos fueron identificados en
muestras orgánicas con el uso de reactivos derivados. En la reaccion de Molish fue posible
visualizar en los azucares un anillo de color violacion para muestras que arojaron positivo. En las
muestras con el reactivo de fehling los resultados fueron negativos para el caso de la sacarosa y
la sacarosa y el almidón, a diferencia de la fructosa, glucosa y lactosa dado que el resultado que
arrojó fue positivo. En la prueba con Tollens fue posible notar que los aldehídos pueden
oxidarse, en este caso el resultado obtenido fue positivo. Para la muestra con el reactivo de
Seliwanoff fue evidente la presencia de cetosas en los resultados obtenidos con la sacarosa y
fructosa. La hidrólisis de sacarosa #1 no mostró los cambios en la oxidación. En la sacarosa #2
ocurrió una formación de azúcares reductores. En la sacarosa #3 se observó la escasez de cambio
en la estructura de la sacarosa. Por último, el almidón manifestó la presencia de yodo en la
superficie de la molécula de almidón, además de esto se notó en esta prueba un color
azul-violeta.
Para finalizar, mediante ensayos químicos con reactivos específicos fue posible
caracterizar proteínas en la solución de albúmina.
 LISTA BIBLIOGRAFICA

BIOLOGIA, U. O. (20 de 07 de 2002). QUIMICA ORGANICA Y BIOLOGIA.

Obtenido de https://users.exa.unicen.edu.ar/catedras/quimicBradford MM
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MAYOLO-DELOISA, K.; MARTÍNEZ, L.M. y RITO-PALOMARES, M..

Técnicas cromatográficas y su aplicación a estudios de cambios conformacionales,
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Rev. Mex. Ing. Quím [online]. 2012, vol.11, n.3, pp.415-429. ISSN 1665-2738.