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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER LABORATORIO DE BIOQUÍMICA IDENTIFICACIÓN DE GLÚCIDOS ALDOSAS Y CETOSAS

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER LABORATORIO DE BIOQUÍMICA IDENTIFICACIÓN DE GLÚCIDOS ALDOSAS Y CETOSAS

INTRODUCCIÓN

Químicamente hablando, los carbohidratos son aldehidos o cetonas derivadas de polihidroxy y alcoholes respectivamente se conocen como aldosas y cetosas. Las unidades básicas de los hidratos de carbono son los monosacáridos, los cuales no se pueden subdividir por hidrólisis.

Los carbohidratos se identifican haciéndolos reaccionar con un fenol, en presencia de un ácido concentrado no oxidante, con lo que se obtiene diferentes coloraciones. Los carbohidratos son importantes para el funcionamiento de nuestro organismo, por ello se hace importante saber que son, como se dividen y como se identifican. Los carbohidratos son conocidos como glúcidos sacáridos, se pueden definir como polihidrooxialdehidos o polihidroxicetona o también se puede decir que son polialcoholes con un grupo aldehído si este está en el extremo o un grupo cetonico si esta en un carbono interno.

Los carbohidratos se encuentran entre las biomoléculas mas difundidas en la corteza terrestre. Entre sus funciones en la vida se encuentra entre otros el ser suministro inmediato de energía a las células, reserva energética en los músculos y el hígado, suministro de átomos en otras rutas.

OBJETIVOS 1. Reconocer la presencia de carbohidratos utilizando el ensayo de Molisch. 2. Comprobar el carácter reductor de los monosacáridos y algunos disacáridos a partir de las reacciones de Fehling y Benedict. 3. Diferenciar entre aldosas y cetosas utilizando el reactivo de Seliwanoft.

1. REACCIÓN DE MOLISCH (Ensayo general para cualquier carbohidrato) Los disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos se hidrolizan con ácidos minerales fuertes y concentrados para dar lugar a monosacáridos. Estos monosacáridos pueden deshidratarse con los mismos ácidos minerales produciendo furfural o hidroximetil furfural. Las pentosas forman furfural y las hexosas forman 5- hidroximetil furfural. Los derivados del furfural formados durante la reacción se combinan con compuestos fenólicos como el alfa - naftol para dar derivados coloreados. La prueba de Molisch corresponde a un ensayo general para cualquier carbohidrato produciendo un complejo de color violeta o púrpura.

2. REACCIÓN DE FEHLING. El reactivo de Fehling es una mezcla de solución de

sulfato cúprico en agua con tartrato doble de Sodio y Potasio. (Sal de la Rochela) en medio alcalino. Es un agente oxidante selectivo. Los iones cúpricos están en forma de complejo y son reducidos por el carbohidrato formando un precipitado rojo de oxido cuproso Cu2O.

3. REACCIÓN DE BENEDICT.

El fundamento químico de la reacción de Benedict es el mismo que el de la reacción de Fehling. Es una solución alcalina de sulfato cúprico con citrato doble de sodio y Potasio. Por consiguiente también se observa la formación de un precipitado rojo de óxido cuproso como prueba positiva para la presencia de carbohidratos reductores.

4. REACCIÓN DE SELIWANOFF

El reactivo de Seliwanoft está constituido por HCl concentrado y un difenol llamado resorcinol. El HCl concentrado por deshidratación convierte la cetosa en furfural o hidroximetil furfural y su posterior condensación con el resorcinol produce un complejo coloreado.

5. REACCIÓN CON LUGOL

Se fundamenta en la formación de un complejo entre el ion I3- y la amilasa del almidón formando una estructura de conformación helicoidal.

M.Sc. Edgar Rincón-Villamizar Bioquímica U.F.P.S

Materiales y Reactivos:

SOLUCION GLUCOSA AL 1% SOLUCION FRUCTOSA AL 1% SOLUCION LACTOSA AL 2% SOLUCION SACAROSA AL 2% SOLUCION MALTOSA AL 2% SOLUCION ALMIDON AL 2% LUGOL SOL. ALCOHOLICA DE ALFA-NAFTOL AL 5% (50g/L) ACIDO SULFURICO CONCENTRADO

50mL de una sol. almidón al 5%

REACTIVO DE FEHLING A REACTIVO DE FEHLING B REACTIVO DE BENEDICT REACTIVO DE TOLLENS REACTIVO DE SELIWANOFT AGUA DESTILADA (BAÑO MARÍA) PLANCHA CON 3 VASOS PRECIPITADOS DE 500mL 10 TUBOS DE ENSAYO PINZA PARA TUBO DE ENSAYO

DETERMINACIONES

*

PRUEBA

DE

MOLISH.

 

Se

baño María durante 3 minutos. Note

deposita en cada tubo 20 gotas de

los cambios de coloración ocurridos.

solución

de

glucosa,

fructosa,

El color de la mezcla contenida en

lactosa,

sacarosa,

maltosa.

Se

el tubo varía desde el verde al

añaden

4

gotas

de

solución

naranja o rojo o marrón a medida

alcohólica

de

alfa

naftol

y

luego

que el azúcar reductor presente

0.5ml

de

ácido

sulfúrico

(por

las

actúa sobre los iones cobre.

paredes

del

tubo).

Observe

cuidadosamente

cualquier

cambio

* REACCIÓN DE TOLLENS. Se

de

color

en

la

interfaces

de

los

utiliza el mismo procedimiento del

líquidos.

 

benedict agregando entonces 16 gotas de los carbohidratos y 8 gotas

*

REACCIÓN DE FEHLING. A cada

de tollens en vez de benedict.

uno de los tubos de ensayo depositar 5 gotas de Fehling A y 5 gotas de Fehling B; luego agregar 10 gotas para cada solución de carbohidratos calentar. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfaces de los líquidos.

* REACCIÓN DE BENEDICT. Sirve

para identificar carbohidratos de tipo maltosa. En cada uno de los tubos agregar 20 gotas de solución carbohidrato y 10 gotas de solución benedict, coloque el tubo al mechero o en

PRUEBA DE SELIWANOFT. En dos tubos

de ensayo adicione 20gotas de solución de

fructosa y 20gotas de solución de glucosa.

A cada uno de ellos adicione (1) ml de

solución de Seliwanoft. Caliente la mezcla

al baño maría por un tiempo no menor de 5

minutos observe los cambios.

REACCIÓN CON LUGOL. Se coloca 5 tubos y a cada uno de ellos se le adiciona 20 gotas de cada carbohidrato, se le agrega 5 gotas de lugol, coloque al baño María, una coloración azul violeta para almidón es positiva.

Tabule los resultados de la parte experimental en los siguientes cuadros.

de la parte experimental en los siguientes cuadros. M.Sc. Edgar Rincón-Villamizar – Bioquímica –

M.Sc. Edgar Rincón-Villamizar Bioquímica U.F.P.S

Segundo Laboratorio. HIDRÓLISIS DE ALMIDONES . Tomar 50mL de una solución de almidón al 5%
Segundo Laboratorio. HIDRÓLISIS DE ALMIDONES . Tomar 50mL de una solución de almidón al 5%
Segundo Laboratorio. HIDRÓLISIS DE ALMIDONES . Tomar 50mL de una solución de almidón al 5%

Segundo Laboratorio.

HIDRÓLISIS DE ALMIDONES. Tomar 50mL de una solución de almidón al 5%, colocarlos a calentar con 1 mL de solución de ácido clorhídrico concentrado. Contabilizar cada 3 minutos y tomar muestras de 1 gota del almidón y agregar 1 de lugol. Así continuamente hasta dar por hidrolizado el almidón (debido a la coloración). La formación de un color azul indica la presencia del almidón, un color rojizo o marrón indica la presencia de hidrolización.

Una vez hidrolizado la muestra se procede hacer las determinaciones con Tollens y Fehling.

CUESTIONARIO

1. Escriba la formula estructural de los

carbohidratos utilizados con esta práctica.

2. Función e importancia biológica de los carbohidratos.

3. Describa cada una de las reacciones

químicas

BIBLIOGRAFÍA

4. Explique es un azúcar reductor y uno no reductor?. Cuál es el reactivo que más se emplea para saber si es este un reductor o no reductor?

5. Describa el análisis que usted realizo para encontrar el carbohidrato problema.

Wilson, K., and Walker, J. 2000. Principles and Techniques of practical Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press

Stryer, L. 1995. Bioquímica. Cuarta edición. Editorial Reverte. Barcelona España.

D’Ocon MC, García MJ, Vicente JC (1998): Estudio general del metabolismo de los hidratos de carbono. En D’Ocon MC, García MJ, Vicente JC (eds): fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico, 1ª Ed. Editorial Paraninfo (Madrid, España), pp. 53 72.

M.Sc. Edgar Rincón-Villamizar Bioquímica U.F.P.S