Prólogo

El presente EBOOK titulado

“Histotecnologia Tomo I” en su
volumen 01 es un material
educativo que tiene como propósito
el poder reforzar los conocimientos
de los estudiantes participantes del
Programa “HISTOTECNOLOGIA”
impartido bajo modalidad a
distancia. Es creado por la Msc.
Daiglys García CEO de CITORUSHTC
|Citotecnólogo Venezolana el día 16
de mayo de 2023, con mi propio
método de aprendizaje
constructivista. Es importante destacar que el presente material didáctico
se realizó utilizando como soporte la “Neurociencia Educativa” que sin
lugar a dudas forma parte de todo el ecosistema instruccional creado para
fomentar un aprendizaje idóneo en los estudiantes participantes del
presente curso virtual.

Msc. Daiglys Carolina García Carreño

CEO|FUNDADORA CITORUSHTC
Lima, Perú 2023.

www.citorushtc.com
Introducción

La histopatología es la rama de la patología que trata el

diagnóstico de enfermedades a través del estudio
de los tejidos. Es el estudio de las estructuras
tisulares para detectar posibles anomalías y en su
caso emitir un diagnóstico.

La histotecnología es la ciencia que estudia los

fundamentos técnicos y el proceso de
manipulación de los tejidos de los seres vivos
para su análisis. Tiene como finalidad la
preparación de tejidos para su observación en el microscopio.

Según de donde procedan los tejidos y la finalidad se distingue entre:

Material histológico: toda muestra de tejidos obtenidas de un individuo

sano con el objetivo de investigar su estructura y composición
anatomopatológica.

Material anatomopatológico: toda muestra procedente de un individuo

enfermo con el objetivo de investigar la etiología de la enfermedad y dar
un diagnóstico.

Estudios citohistológicos vitales, supravitales postvitales

Estudios citohistológicos vitales: se realizan sobre células o tejidos vivos

sin que hayan sido separados del ser que los contiene.

Estudios citohistológicos supravitales: los realizados sobre células o

tejidos vivos pero separados del organismo del que proceden. Para teñir
las células se utilizan colorantes con cierto grado de compatibilidad con el
metabolismo celular, como el azul de metileno y el azul tripán.

Estudios citohistológicos postvitales: los realizados sobre células muertas

en estado natural.

Concepto de biopsia y de pieza quirúrgica

Una biopsia es la extracción de una pequeña porción de tejido vivo para

su examen microscópico o cultivo con la finalidad de llegar a un
diagnóstico.
Biopsia convencional

Es el estudio de una porción de tejido que antecede temporalmente al

tratamiento quirúrgico de resección definitiva de una lesión, esto permite
realizar un estudio con medios menos rápidos y aplicar todas las técnicas
específicas que sean necesarias según el tipo de tejido.

Se distinguen dos tipos de biopsias:

Biopsia diagnóstica: son piezas de pequeño tamaño que no suelen

contener la totalidad de la lesión, requieren un procesamiento rápido ya
que su diagnóstico depende el tratamiento a seguir por el clínico.

Piezas quirúrgicas: son de mayor tamaño y suelen contener la totalidad

de la lesión e incluso órganos enteros en ocasiones. Son obtenidas por
cirugía, aunque se hace esencial su estudio para confirmar el presunto
diagnóstico, establecer su pronóstico y posterior tratamiento.

Estudio macroscópico de biopsias y piezas quirúrgicas

Comprenden un conjunto de métodos estructurados y sistemáticos para

cada muestra. El técnico debe conocer los aspectos generales del proceso.

Describir exactamente el tipo de material remitido para estudio, incluidas

las dimensiones y las lesiones, morfológicas, aspecto, cloración y sus
relaciones con las estructuras vecinas en caso de piezas quirúrgicas.

Seleccionar detalladamente las áreas sobre las que va a realizarse el

estudio microscópico. Este proceso se denomina muestreo o tallado del
material y lo realiza el facultativo.

Biopsias extemporáneas o intraoperatorias

Son las que vienen directamente de la operación y a las que hay que dar
una respuesta inmediata. No tenemos que fijar la pieza y la tenemos que
mantener en ciertas condiciones para tener todas sus estructuras en una
situación lo más parecida a su estado normal. Estas piezas se congelan
rápidamente y se cortan en el criostato a -20o por congelación. Esto se
hace para dar a la pieza una consistencia susceptible de ser cortada en
secciones de orden de 10-15 micras.
Tras la obtención del corte se fija rápidamente en metanol y se procede
a una tinción rápida con hematoxilina-eosina, para ser observada por el
patólogo al microscopio y emitir un diagnóstico.

Métodos de extracción del tejido

Biopsia de aguja: la muestra se obtiene mediante una jeringa,

introduciendo la aguja en el tejido a estudiar y extrayendo las células para
investigarlas.

Dependiendo de la ubicación de la lesión, esta biopsia por punción se

puede llevar a cabo gracias a la orientación por tomografía
computarizada.

Biopsia de cielo abierto: se realiza una incisión en la piel para que el

órgano quede expuesto y a continuación se extrae la muestra del tejido.

Biopsia cerrada: se realiza una incisión más pequeña que en la biopsia de

cielo abierto, con la finalidad de insertar un dispositivo de visualización
para guiar a la toma de muestras.

Concepto de preparación histológica, extensión citológica e impronta

Preparación histológica: consiste en una muestra de tejido dispuesta para

su observación microscópica. Es una muestra de pequeño calibre de 3 o
4 micras, que ha sido seccionada mediante el micrótomo de un bloque o
masade tejido incluido en un medio homogeneizado y teñido. Esta lámina
de tejido se adhiere mediante un pegamento especial a un portaobjeto y
se cubre.

Extensión citológica: es un conjunto de células procedentes de un tejido

y extendidas sobre un portaobjetos en forma de capa unicelular que
permita su observación microscópica. Si el material corresponde a sangre
se denomina frotis sanguíneo.

Impronta: cuando de un órgano podemos obtener una capa unicelular

sobre el portaobjetos por contacto directo de este con la superficie de
sección de un órgano.
Petición de la muestra y transporte Petición de estudio histopatológico

El proceso de estudio histopatológico comienza con la petición de dicho

estudio. La petición requiere la identificación correcta de la muestra,
asociándola con el paciente correcto. Desde el servicio donde se pide la
petición, se imprimen etiquetas de identificación del paciente con código
de barra con el número de historia clínica. Desde el quirófano se generan
muestras para envío a Anatomía Patológica, cada envase va asociado a
una petición electrónica. La muestra bien etiquetada será transportada
desde el quirófano o la consulta hasta el Servicio de Anatomía Patológica,
esta muestra irá acompañada del papel de petición del estudio
histopatológico.

La falta de identificación de la muestra será motivo suficiente para que

no sea aceptada en el Servicio de Anatomía Patológica. En casos
excepcionales se puede identificar el recipiente directamente con
rotulador de tinta indeleble, con los siguientes datos como mínimo:

• Filiación del paciente.

• Nombre y apellidos del paciente.
• No de historia clínica.

Si se va remitir más de un recipiente del mismo paciente, se indicará el

órgano o tipo de muestra que contenga en el lateral de cada recipiente.

Si el recipiente con la muestra contiene formol, se aconseja indicar en el

recipiente y/o en la hoja de petición, la hora en que se introdujo la
muestra en el fijador.

Recomendaciones para evitar errores en la identificación del recipiente:

En el caso de enviarse la muestra con fijador, la etiqueta se aplicará en

el recipiente una vez esté este rellenado con formol y antes de introducir
la muestra en su interior.

No se pondrá las etiquetas a los recipientes ni en las hojas de petición

hasta que se hayan retirado las correspondientes al paciente.
Para la preparación de la muestra para el envío al Servicio de Anatomía
Patológica se tienen en cuenta los siguientes aspectos:

Las muestras de tejidos para biopsias no deben superar los 2cm de

diámetro, ya que el formol no penetra en las muestras de mayor tamaño
y en el centro de la lesión se autolisa durante el mismo transporte.

No se envía la totalidad de la muestra para realizar un estudio

histopatológico correcto. Si la muestra es de un diámetro superior a los 4
cm se recomienda realizar múltiples secciones de un máximo de 2 cm de
grosor que sean representativos de la lesión e incluyan márgenes de
extirpación.

Se recomiendan envases de plásticos para muestras de orina para el

envío, cuando tenga que contener formol.

No se introducirá las muestras a presión dentro del envase. El tejido

pasará holgadamente por la boca del envase, pues cuando llegue al
laboratorio ya fijado, la biopsia habrá endurecido y habrá aumentado su
volumen entre un 10 y un 20%, y será imposible su extracción del envase.

• Las biopsias intraoperatorias se enviarán en un frasco dentro de

una gasa humedecida con suero salino fisiológico. La utilización de
cualquier fijador impide la realización del estudio.
• Otras biopsias que se envían en frasco utilizando una gasa
humedecida en suero salino fisiológico son:
- Ganglios y bazo con sospecha de patología primaria.
- Biopsias con sospecha de enfermedad infecciosa.
- Biopsias de patología funcional del riñón, se tomarán dos
cilindros y se enviarán urgentemente para poder realizar
estudios de inmunofluorescencia y estudio ultraestructural.
- Biopsias de enfermedades ampollosas cutáneas, se toman
dos punch de periferia de la lesión. Uno se envía en formol y
otro en frasco para estudio de inmunofluorescencia.
- Nervios y músculo con sospecha de patología primaria.
- Biopsias con sospecha de enfermedades por depósito o déficit
enzimático.

Otras recomendaciones:

Las piezas grandes se deterioran incluso con formol, esto es debido a que
el formol solo penetra medio centímetro y para ello necesita casi una hora.
Por tanto, las zonas más profundas e incluso las superficies revestidas por
tejido como mesotelio, cápsulas y piel se lisan y quedan inutilizadas. Para
evitar esto se debe:

Reenviar sin fijar a Anatomía Patológica antes de media hora.

Si no puede enviarse dentro de dicho plazo, pero sí en el plazo de 1 o

2horas, se mantienen sin fijar envuelta en una gasa humedecida con
suero salino fisiológico dentro del frigorífico.

Si no puede enviarse en plazo de más de 4 horas, se introduce en

abundante formol, que debe cubrir toda la pieza y dejar el recipiente
dentro del frigorífico hasta su envío al servicio de Anatomía Patológica.

Las normas básicas para el envío de biopsia al laboratorio AP son:

• Según el tipo de estudio

- Las muestras para estudio óptico rutinario se fijan en formalina al 10%

en proporción 1:20 en el interior de un frasco herméticamente cerrado
identificado mediante etiqueta identificada.

- Las muestras para estudio intraoperatorio, remitir en frasco cubierta con

una gasa empapada en suero fisiológico. En el laboratorio se fija y
secciona para congelación.

- Las muestras para estudio inmunohistoquímico, se remiten en frasco y

en el laboratorio se congelarán con isopentano (-50oC).

- Las muestras para estudio ultraestructural se remiten en fragmentos

cuboidales de 3 a 5 mm en Glutaraldehído al 2.5% a 4oC.

Según la sustancia que se vaya a preservar o identificar

 Transporte de la muestra

Si es desde el quirófano el transporte lo realiza el auxiliar de

enfermería o el celador. En caso que se manejen varias muestras o los
recipientes sean de tamaños grandes se utilizará el carro de transporte,
nunca se utilizará el tubo neumático para enviar las muestras de biopsias
al Servicio de Anatomía Patológica.

La persona encargada del transporte de las muestras biológicas

debe conocer el riesgo del transporte de dichas muestras y observar las
siguientes recomendaciones:

• Toda muestra debe transportarse en contenedor cerrado y

hermético, que no permita la salida de su contenido y también
irrompible.
• El contenedor de la muestra debe estar completamente limpio
por fuera e íntegro, sin signos de roturas o fisuras.
• Los contenedores de las muestras se transportarán siempre
en posición vertical y debidamente protegidos.

Las boletas deben ir aparte de las muestras biológicas. Criterios de

rechazo de muestras:

Muestras sin solicitud de estudio.

Mala rotulación de lasmuestras.

Muestras no fijadas y/o en proceso de autólisis o descomposición.

Fijador no adecuado y/o en proporciones diferentes a lo

establecido.
Procesamiento de muestras, técnicas y metodología Recepción de la
muestra en el Servicio de Anatomía Patológica

Las peticiones deben llegar al Servicio de Anatomía Patológica

debidamente cumplimentadas tanto de datos clínicos como de datos del
paciente. Una vez comprobados los datos de la petición que a su vez
correspondan con los de la muestra, se procederá a su registro o
transcripción de datos a un libro a fin de adjudicarle un número. Este
número acompañara a la muestra y al protocolo en todo el proceso hasta
la emisión de su diagnóstico.

Si se recibe una muestra se registra con los siguientes datos:

Nombre, apellidos, fecha de nacimiento y sexo del paciente.

No de la tarjeta de salud o carnet del centro.

No de la historia clínica.

Planta o servicio de procedencia.

Médico que la solicita.

Material que se remite.

Tipo de estudio solicitado.

Datos clínicos.

Fecha que se recibe.

Los datos serán registrados en el ordenador y el libro de registro y

serán impresos por duplicados en etiquetas que se adhieran al formulario
de solicitud del examen y al recipiente de la muestra.

La numeración debe respetar un orden secuencial. Se recomienda

comenzar con la numeración 001 desde el 1 de enero y añadir un guion
seguido de los dos últimos dígitos del año en curso.
 Si es para una biopsia en el informe se escribe B de biopsia, las dos
últimas cifras del año y el número que corresponda al paciente, ej. B23-
5005.

En una necropsia o autopsia se pondría la A, ej: A23-505.

En citología se pondría la C, ej; C23-45.

Este número será la identificación para los bloques de parafina,

laminillas, informes, fotografías, archivos y almacenamiento de datos
para todos los exámenes. Para el caso de pruebas especiales se pondrán
anteponer las siguientes siglas:

H: histoquímica.

IHQ: inmunohistoquímica.

IC: inmunocitoquímica.

IF: inmunofluorescencia.

ME:microscopía electrónica.

En biopsias, al recibirlo y una vez registrado se lleva a la sala de

tallado o macroscopia.

Si no se va a procesar la muestra remitida de inmediato, se mete

en el frigorífico.

Antes del tallado o descripcion macroscopica, en la hoja de trabajo

se escribe el nombre del patólogo y el número de inscripción.

Las peticiones vienen acompañadas del material. Los líquidos y

aspirados se reciben en tubitos de diferentes tamaños, habitualmente en
fresco. Las piezas quirúrgicas se reciben en frascos de diferentes tamaños
sumergidas en fijador, salvo en casos específicos que vienen en fresco.
En necropsia se eviscera, cada trocito de órgano se mete en un frasco con
su correspondiente fijador.

Sala de estudio de Descripción Macroscópica

Las tareas de estudio macroscópico y tallado de biopsias se realizan

en una sala habilitada para este fin. Esta sala cuenta con las siguientes
infraestructuras mínima:

• Área de disección y muestreo:

• Campana de extarccion
• Estantería para almacenar los recipientes que contienen el
material.
• Material quirúrgico; bisturíes, cuchillo, tijeras y pinzas de
diferentes tamaños, sondas metálicas y plásticas, etc.
• Cinta métrica y balanza para medir y pesar el material.
• Numerosas cestillas metálicas o de plástico con tapa para el
procesamiento del material.
• Sistema para la numeración automática de los cassettes o
cestillas de inclusión, en su defecto, material para el
etiquetado o marcaje de las muestras.
• Sistema de dispensación de formalina neutra o tamponada al
10% a ser posible conectado a los puestos de prosección.
• Soluciones de otros fijadores como B5, líquido Carnoy, líquido
de Bouin,etc.
• Sistema de fotografía macroscópica y radiografías.
• Sistema de refrigeración a 4oC y congeladores.
 Preparación de la muestra

Muchas de las muestras son enviadas a este servicio en fresco para

su posterior fijación, siendo tarea del técnico en colaboración con el
patólogo responsable de la sala de estudio macroscópico, realizar la
limpieza y aperturas de piezas grandes o huecas, e indicar el fijador a
emplear y otras técnicas especiales. Si la muestra recibida ya se
encuentra en líquido fijador, es necesario que el técnico compruebe que
es el adecuado.

Cuando se reciban piezas quirúrgicas grandes, que se requieren

disección, fotografías, etc., se procede a tomar muestras representativas
para la fijación inmediata y guardar en fundas plásticas en refrigeración
a 4oC no más de 24 horas.

Cuando se diseca una pieza quirúrgica se pueden dar estas

situaciones:

• Necesidad de separar cada uno de losprincipales

componentes.
• Remover solo algunos componentes y dejar el resto del
espécimen como una sola pieza.
• Fijar en bloque de pieza entera.

Se utilizan diferentes formas, dependiendo de la forma, tamaño y

presencia o ausencia de una cavidad en la pieza. Las vísceras huecas
pueden abrirse en fresco o bien ser fijadas simultáneamente desde afuera
hacia dentro mediante la inyección de formol buffer al 10% en su interior
o llenando la cavidad con gasas y algodón empapados en fijador. En las
lesiones quísticas, una vez extraído el contenido, se inyecta el fijador. En
el globo ocular se confecciona una pequeña ventana para extraer el
contenido e inyectar el fijador.
 Para el estudio macroscópico es función del técnico organizar la
campana de tallado, distribuirá el material quirúrgico, los recipientes con
las piezas quirúrgicas y sus peticiones, los cassettes numerados
adecuadamente, sus tapaderas y todos los utensilios necesarios para este
proceso: tinta china, regla, balanza, dictáfono, lupa material fotográfico,
etc.

Se debe procesar los cortes suficientes de las lesiones más

representativas. La toma de los cortes se facilita cuando las piezas han
tenido un tiempo suficiente de fijación, teniendo en cuenta lo siguiente:

El tamaño de la muestra y el volumen del fijador.

El espesor de la muestra y la penetración del fijador.

El contacto del fijador con la superficie de lamuestra.

El tipo de fijador y el tiempo de fijación.

En la toma de muestras se incluye parte del tejido sano vecino de

la lesión, para la búsqueda de infiltración en caso de tumores malignos.
El tamaño de los bloques tisulares no debe exceder de 3 mm de espesor,
3 cm de largo y 2 cm de ancho.

En cada cassette debe colocarse los cortes tomados o muestras,

identificados con una tira de papel. Debe escribirse con lápiz de grafito el
número de identificación correspondiente junto con las iniciales del
paciente y con letras y/o números los diferentes cortes que se describen
en el protocolo macroscópico como: borde, resección, regiones
anatómicas, etc.

Fotografías

Cuando el patólogo lo considere oportuno se realizarán fotografías

de la pieza recibida.
 Número de registro siempre con la pieza.

Fotografía, debe ser rápida debiendo tener preparados ya los

focos de iluminación para que el tiempo de autólisis y putrefacción no
llegue a darse.

La realización de fotografías de las piezas se realiza porque:

• Es necesario para una correcta interpretación del caso,

disponer de una imagen en la que se observe la estructura
completa de la pieza y sus relaciones, así como los lugares
muestreados.
• Complementa documentalmente lapieza, ya sea por sus
características o con finalidad didáctica o educativa.

El estudio radiológico de las piezas quirúrgicas proporciona

información sobre la estructura y componentes de los tejidos en estudio.
Los tejidos más apropiados son: hueso, masas de tejidos blandos
calcificados, mama, válvulas cardíacas y grupo ganglionares en los que
se realizó linfografía previa.

Fundamentos generales sobre procesamiento histológico de los tejidos

En las biopsias quirúrgica de pequeño tamaño, extensiones o

preparaciones por frotis y piezas quirúrgicas extirpadas se ha de realizar
un diagnóstico histológico cuyo resultado establecerá una terapéutica
consecuente. Es por ello que la rapidez de la ejecución es más importante
que la calidad de la preparación microscópica.

El estudio microscópico de los órganos de cadáveres es

indispensable para establecer un diagnóstico anatomopatológico de la
enfermedad; en este caso las preparaciones han de ser duraderas y
ejecutadas con una técnica impecable.
 Cuando se cortan trozos pequeños de órganos voluminosos se
tendrá en cuenta su configuración anatómica. Los órganos que son huecos
como el intestino, esófago, vesícula biliar, etc., conservarán unas paredes
lisas si se rellenan con líquido. Es necesario trabajar con precaución y
cuidado para evitar que las piezas quirúrgicas o el material a estudiar se
sequen para ello se rociarán con suero fisiológico o se conservarán en
nevera.

Cuando se realiza la toma de tejido se orientarán para evitar

cualquier equivocación. Se recomienda hacer una señal para indicar
dónde ha de hacerse los cortes. Si la pieza se tuviera que dividir en varios
trozos consecutivos, es recomendable hacer un dibujo o hacer marcas en
una fotografía tomada con anterioridad. Para enumerar las piezas se
utiliza papel apergaminado escrito con lápiz. Si queremos que los trozos
de tejido conserven una superficie plana se colocarán sobre una placa de
corcho fijándolas con alfileres o púas de erizo.

En el caso de los órganos pares las muestras se cortan para su

distinción de distintas formas: lado derecho forma rectangular, lado
izquierdo forma triangular. Los trozos tomados de distintas regiones de
un mismo órgano se reconocen si se cortan de distinto tamaño.

Los cortes se hacen sobre una placa de corcho y el instrumental a

utilizar puede ser una cuchilla de afeitar montada en un mango o un
cuchillo afilado; de esta manera evitaremos aplastar los tejidos.

Continuará…

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