PRÁCTICA Nº 07

COLORACIÓN DE BACTERIAS Y ESTRUCTURAS

BACTERIANAS
 OBJETIVOS

• Conocer los diferentes colorantes y desarrollar las técnicas

de tinción necesarias para la observación microscópica de los
diversos microorganismos.
• Observar las diferentes estructuras presentes en las
bacterias.
 INTRODUCCIÓN

• Como casi todos los microorganismos, son casi incoloros cuando se

observan a través del microscopio óptico estándar, a menudo es
preciso prepararlos para la observación y una de las maneras de
hacerlo consiste en someterlos tinciones (coloración)
 Compuestos químicos que tienen la capacidad de comunicar su
• COLORANTES color a otros cuerpos y quedar
fijados a pesar de ser lavados con solventes ácidos o álcalis
débiles.

La coloración es el proceso mediante el cual un cuerpo es

teñido por una sustancia colorante, sin
COLORACIONES perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al
preparar la solución colorante. Las
coloraciones pueden ser:
• Coloración negativa: los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno, aumentando de
• este modo su contraste.
• Coloración simple: se utiliza un solo colorante de cualquier tipo. Igual que la tinción negativa, sólo
• nos permite observara la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células.
• Coloración diferencial: intervienen dos o más colorantes y cada uno diferencia una estructura. El
• colorante que se usa en segundo lugar es de color diferente al del primero, denominándose
• colorante de contraste.
• Coloraciones especiales: para coloración de esporas, núcleo, hongos, cápsulas, corpúsculos
• metacromáticos, se utiliza colorantes fluorescentes. Ejm. Acridina, auramina, rodamina.
MATERIALES Y
EQUIPOS
• Mechero
• Asa bacteriológica
• Soporte para tinción
• Microscopio óptico
• Aceite de inmersión
• Hisopos/mondadientes
• Muestra: Cepas bacterianas
• Colorantes:
• Verde de malaquita,
• cristal violeta,
• safranina,
• tinta china,
• Maneval,
• Rojo de congo.
• Lugol /alcohol ácido
PROCEDIMIENTO
TÉCNICAS DE COLORACIÓN
• FROTIS BACTERIANO
• Extendido: la finalidad de esta operación es obtener una monocapa de
células lo más separado
• posible para poder observar a los microorganismos y a las agrupaciones
en forma clara.
• Secado: su finalidad es evaporar el líquido de extendido. Se lo hace por
proximidad a una fuente
• de calor si es que se desea observar y colorear estructuras no lábiles al
calor. Si es que se presenta,
• el caso de estructuras lábiles, el secado se hace al aire.
• Fijado: la finalidad es coagular las proteínas protoplasmáticas en el
portaobjetos y así los
• microorganismos quedan adheridos al vidrio y resistan sin desprenderse,
los tratamientos de la
• tinción. La fijación produce el encogimiento de las células, lo que se
soluciona con la
• Coloración: que las hace distender, parece mayor en tamaño de lo que
son.
• Fundamento de la técnica: diferencia entre las paredes celulares
COLORACIÓN DE GRAM
1 Se hace el frotis delgado y se deja secar al aire
2 Se fija el extendido de bacterias en el portaobjeto
 Se coloca el frotis sobre un soporte para tinción y se cubre con una solución
3 de cristal violeta, durante 1 minuto.

4 Luego se enjuaga con agua.

 Se cubre el frotis con la solución de yodo-yoduro de potasio.
5 Tiempo: 1 minuto.

6 Se enjuaga con agua.

 Se efectúa la decoloración con alcohol acetona.
7 Tiempo: 15-20 segundos.

Las células de algunas

bacterias consideradas 8 Se enjuaga con agua.
como Gram negativas, son
rápida y complemente
decoloradas por el
disolvente orgánico, en
cambio las bacterias Gram
positivas, resisten la
decoloración
 Luego se efectúa una Se coloca el preparado en
9 coloración de contraste con 11 posición vertical dejando
safranina. Tiempo: 1 minuto. que drene el agua y el frotis
se seque.

10 Se enjuaga con agua.

RESULTADOS
 COLORACIÓN DE ESPORAS (MÉTODO DE
WIRTZ MODIFICADO)
1. Hacer una suspensión bacteriana.
2. Fijar al calor, el calor ayuda a fijar la bacteria al vidrio.
3. Añadir verde de malaquita, que cubra toda la extensión.
4. Calentar con mechero de alcohol hasta desprendimiento de vapores
por 3 a 5 veces.
5. Luego lavar.
6. Agregar safranina y dejarlo por 1 ó 2 minutos.
7. Lavar, secar y observar al microscopio.
Resultados
 COLORACIÓN DE CÁPSULA
• Le confiere a la bacteria su valor inmunológico. Le impide a las
células del sistema de defensa del organismo que puedan atacarlas.
No puede ser teñida con procedimientos sencillos pero es fácil
desarrollar algunas técnicas para hacerlas visibles con respecto a la
tinción de los somas bacterianos y en contraste con el fondo de vidrio
del portaobjetos.
 COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO DE
MANEVAL)
1. En un portaobjeto colocar 1 ó 2
gotas de colorante rojo de congo.
2. Tomar el cultivo bacteriano con
el asa y hacer la suspensión en la
gota de rojo de congo.
3. Dejar secar T° ambiente (no se
usa calor).
4. Agregar el colorante de
maneval y dejarlo por 1 o más
minutos.
5. Dejar secar a T° ambiente (no
lavar)
COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO TINTA
CHINA O NIGROSINA)
• 1. Colocar 1 o 2 gotas de la tinta china o nigrosina en el tercio de la
lámina.
• 2. Luego con un asa suspender el germen en la tinta.
• 3. Posteriormente con otra lámina portaobjetos hacer un frotis.
• 4. Dejar secar a T° ambiente.