Facultad de ciencias agrarias

Departamento de ING. Agronómica

Laboratorio de Biología molecular

Extracción de ADN
Angel Luis Perez Perez, Yuri Marcela Gamboa, Ingry Paola Cachay Tibaduiza
Universidad de Pamplona, Norte de Santander, 17 de mayo de 2022
RESUMEN

PALABRAS CLAVE:.

SUMMARY

KEY WORDS:

1Ingenieria Agronómica, Universidad de Pamplona

1. OBJETIVO GENERAL
Comprender el proceso de extracción de
ADN a partir de una muestra de sangre,
analizando los pasos y técnicas utilizadas,
así como los factores que pueden influir en
la calidad y rendimiento de la extracción.
2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Optimizar el protocolo de extracción de
ADN a partir de muestras de sangre,
evaluando diferentes variables como el
tipo de reactivo de lisis, método de
purificación del ADN y concentración
de la muestra, con el fin de obtener la
mayor cantidad y calidad de ADN
posible.
3. INTRODUCCIÓN
Los seres vivos (animales y plantas) tienen
una única composición hereditaria (huella
genética) que permite la diferenciación
genotípica y fenotípica de humanos,
animales y plantas. La huella genética se
puede visualizar utilizando herramientas
como la biología molecular que ha servido
para obtener ADN, este es el punto de
partida para la mayoría de los análisis
genéticos.
Al inicio, la extracción de ADN a partir de
sangre u otras muestras biológicas
demandaba más tiempo, más recursos
económicos, la calidad y cantidad de ADN
no eran las apropiadas, además por la mala
utilización de las muestras (sangre, saliva,
uñas, tallo, hojas, etc.) fácilmente existía la
probabilidad de contaminación del ADN.
Hoy en día el proceso para extraer ADN
tiene un gran impacto sobre la sensibilidad y
reproductibilidad de la prueba diagnóstico
molecular, su análisis tiene implicaciones en
diferentes disciplinas tales como la
medicina forense, diagnóstico genotípico en
biomedicina, determinación de paternidad o
1Ingenieria Agronómica, Universidad de Pamplona
de otras relaciones familiares, identificación de
especies animales, etc. (Osorio y Quenan, 2013)
La sangre es una fuente excelente de ADN. Éste
está presente en los glóbulos blancos (o
leucocitos), pero no en los glóbulos rojos
humanos (eritrocitos o hematíes), pues éstos
carecen de núcleo. Una mancha de sangre del
tamaño de una moneda pequeña, correspondiente
a unos 50 microlitros, tiene suficiente ADN para
un análisis típico de VNTR (repeticiones de
secuencias de 9 a 100 pares de bases que se
utilizan como marcador molecular) (Universidad
de Alcalá, 2004).
Se le llama extracción al método por el cual se
obtiene el ADN a partir de material biológico (ej.:
cepillado bucal, saliva, sangre o cualquier
tejido) utilizando técnicas físicas y químicas. La
extracción consiste en la separación y purificación
del ADN con el fin de poder estudiarlo, analizarlo
o manipularlo. En la investigación biomédica el
ADN se utiliza para analizar y diagnosticar a
pacientes con enfermedades neurodegenerativas,
cáncer, infecciones, etc. (Checa, 2020).
Existen varios métodos de extracción de ADN,
desde los protocolos de laboratorio hasta
protocolos de extracción casera con material
vegetal como frutas, el cual es un método simple
y apto para todo el mundo. La electroforesis es la
técnica que se utilizó en el laboratorio para
separar los fragmentos de ADN obtenidos de las
muestras de extracción casera en frutas.
Extracción casera sencilla donde se utilizaron
materiales accesibles como detergente, alcohol
etílico, gasa, sal, colador, tenedor, recipiente y la
fruta. La electroforesis se basa en la capacidad
que poseen las macromoléculas cargadas para
desplazarse en un campo eléctrico, donde su
velocidad es proporcional a la carga e
inversamente proporcional al tamaño (Cornejo
et.al, 2014). El ADN es una molécula que posee
un pH neutro o alcalino y una carga negativa
uniforme por unidad de masa, lo que hace en esta
práctica es que el movimiento hacia el ánodo
positivo (+) este determinado por el tamaño de la
molécula. Cuando es lineal, depende del número
de bases de pares de bases. Y si es circular
(en plásmidos y ADN cromosómico
bacteriano) depende de su conformación lo
que incluye el estado de super
enrollamiento (Herráez,
s.f. p. 140).
4. MATERIALES
5. METODOLOGIA
1. En un tubo de 15 mL, medir 8 mL de
Buffer de lisis de glóbulos rojos y
sobre este adicionar con una pipeta de
Pasteur 2 mL de sangre total. Con la
misma pipeta mezclar muy bien y con
mucha suavidad hasta lograr una
completa homogenización.
2. Por inversión agitar muy suavemente
durante 7 minutos a temperatura
ambiente.
3. Centrifugar a 3000 R.P.M. durante 8
minutos.
4. Descartar el sobrenadante y conservar
el pellet.
5. Mezclar con una pipeta Pasteur muy
suavemente el pellet en el líquido
residual.
6. Adicionar 2.5 ml de Buffer de lisis
celular y mezclar varias veces, hasta
homogenizar. Dejar al menos 20
minutos a temperatura ambiente. (En
este paso se puede suspender el
procedimiento, incluso hasta el día
siguiente, dejando los tubos a 4ºC).
7. Adicionar 800 μl de solución
precipitante de proteínas. Mezclar
fuerte, hasta observar grumos de las
proteínas precipitadas.
8. Centrifugar a 4000 R.P.M. durante 10
minutos.
9. Verter todo el sobrenadante sobre un
tubo de 15 mL que contenga 2,4 mL
de isopropanol frío (alcohol
isopropílico), dejar en reposo al
menos unos 5 minutos.
10. Mezclar cuidadosamente por
inversión hasta precipitar el ADN.
11. Envolver el ADN en una pipeta y
1Ingenieria Agronómica, Universidad de Pamplona
pasarlo rápidamente por etanol al 70% frío,
dejar secar a temperatura ambiente y
resuspender finalmente en buffer TE
(TrisHCL 10 mM EDTA 1mM) de 50-500
μl, dependiendo de la cantidad de ADN
recuperado. Nota: El ADN se puede
recuperar tomándolo con pipeta Pasteur y
centrifugando a 10.000 rpm por 5 min y
lavar con 200 μl etanol al 70%.
6. RESULTADOS
7. ANALISIS DE RESULTADOS
8. CONCLUSION
 El proceso de extracción de ADN a partir de
muestras de sangre es un procedimiento
fundamental en la investigación genética y
molecular. A través de este informe de
laboratorio, se pudo investigar y comprender
los pasos y técnicas involucrados en la
extracción de ADN, así como los factores que
pueden influir en la calidad y rendimiento de
la extracción.
 Durante la extracción del ADN tanto de forma
casera como en el laboratorio logramos
observar las hebras de ADN presentes en la
interface entre la mezcla y el alcohol.
9. BIBLIOGRAFIA
Checa Rojas A. (2020). Extracción de
ADN. Recuperado 2023, junio 17, Conogasi.org
Sitio web:
https://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/
Cortes, J. (s.f) Extracción "casera" de
ADN
http://japt.es/vida/biomoleculas/ExtraccionADN.
Herráez, A. (S.f) Biología molecular e
ingeniería genética. PDF segunda edición (140)
Osorio J. y Quenan Y. (2013)
Modificación de una técnica para extracción de
ADN de glóbulos blancos humanos. Biosalud,
(11) 2 págs. (20 – 25)
http://www.scielo.org.co/pdf/biosa/v11n2/v1
1n2a03.pdf

Universidad de Alcalá de Henares,

España (2004). ADN en Medicina Legal
recuperado el 09/mayo/2022.
http://www.biologia.arizona.edu/human/pro
blem_sets/dna_forensics_2/06t.html

Oliri, Naty (2016). Libro de Notas.

Libreta de biología.
https://www.conicet.gov.ar/wp-
content/uploads/Biologia.pdf

10. ANEXO

1Ingenieria Agronómica, Universidad de Pamplona

1Ingenieria Agronómica, Universidad de Pamplona