SEPARACIN DE

PRODUCTOS
NATURALES

1. Mtodos clsicos de separacin

2. Mtodos de separacin cromatogrfica
Mara Judith Albn
Martn Paucar
MTODOS CLSICOS DE SEPARACIN

Particin del disolvente

Destilacin fraccionada
Precipitacin
Separacin por membrana
Sublimacin
Cristalizacin
Eliminacin de impurezas: clorofila, cera y taninos
 Particin del disolvente

Este proceso se fundamenta bsicamente en la

polaridad de las molculas que determina su
solubilidad o insolubilidad en diferentes solventes.
Compuestos polares en disolventes polares y
apolares en disolventes apolares.
Una vez obtenido el principio activo, en agua por
ejemplo, se agrega un solventen en el que sea
soluble para separarlo del agua y obtener una fase
orgnica con el principio activo y un residuo acuoso.
Los solventes orgnica
utilizados son generalmente
inertes (no reaccin con el
compuesto a purificar) Por ejemplo, se extrae saponinas
con etanol y agua, el etanol se
separa al vaco y el residuo acuoso
se axtrae con cloroformo, acetate
de etilo y n-butanol
Destilacin fraccionada

Basada en las diferencias entre los puntos de

ebullicin de dos componentes de un extracto, se
puede utilizar la destilacin fraccionada como
mtodo de aislamiento.
Pro ejemplo la fraccin total del alcaloide de Cicuta
maculatum, un extracto que contiene connine y
hydroxycniin puede ser separado inicialmente por
destilacin y luego hacer el proceso de purificacin.
 Precipitacin

La solubilidad de compuestos orgnicos y su capacidad

para reaccionar con algunos reactivos puede producir
precipitacin que debe ser reversible.
Algunos precipitantes son acetato de potasio, hidrxido
de bario, cido fosfotngstico, cido silicotngstico y
principalmente el acetato de plomo, bsicamente
generan sales insolubles con los compuestos extrados
que despus pueden ser purificados, por ejemplo en el
caso del plomo, este puede ser separado por filtracin y
suspensin en agua limpia o alcohol diluido y despus
se trata con sulfuro de hidrgeno.
Separacin por membrana

Se fundamente en el tamao de las molculas,

ya que las membranas selectivas permiten el
paso de pequeas molculas pero no de
macromolculas.
Este mtodo se utiliza frecuentemente para
separar macromolculas como protenas,
pptidos, polisacridos de sales inorgnicas,
monosacridos y disacridos.
Dependiendo del tamao de poro, puede ser
ultrafiltracin y nanofiltracin.
Mtodo utilizado en la produccin industrial de
la protena de soja.
 Sublimacin

Transicin directa de un compuesto de fase slido a

fase gas, el mtodo es simple pero los rendimientos
son bajos y puede existir desomposicin de los
compuestos.
Compuesto con propiedades que les permiten
realizar sublimacin son la cafena y el alcanfor.
 Cristalizacin

Por la propiedad fsica de la mayora de productos naturales de ser slido pueden

purificarse por recristalizacin, pues los cristales brutos contienen impurezas.
El disolvente seleccionado para la recristalizacin debe tener solubilidad diferente para el
compuesto a purificar a distintas temperaturas, generalmente que el compuesto sea
soluble en caliente e insoluble en frio.
 Eliminacin de impurezas
ELIMINACIN DE LA CLOROFILA
La clorofila es soluble en
solventes orgnicos, realizar
lavado con cloroformo, ter
etlico e incluso soluciones
alcalinas puede retirar la
colofila de la mezcla con el
principio activo de inters.
Tambin funciona hacer pasar
el extracto por una columna de
slice C18
ELIMINACIN DE LA ELIMINACIN DEL
CERA TANINO
Al igual que la clorofila, Generalmente se
la mejor forma de separan a travs de
eliminarla es utilizar cromatografa por
solventes orgnicos columna poliamida, el
como ter de petrleo y problema es que
ter. El acetonitrilo tambin se pueden
precipita las ceras, eliminar compuestos no
permitiendo su tantino como los grupos
separacin. hidroxilo fenlicos.
 MTODOS DE SEPARACIN
CROMATOGRFICA
La cromatografa puede conseguir la separacin mediante el uso de los diferentes
coeficientes de distribucin de equilibrio de diferentes materiales en la fase estacionaria
y la fase mvil. En la separacin cromatogrfica, la mezcla de muestra distribuye el
equilibrio de forma continua entre ambas fases.
CLASIFICACIN DE MANERA GENERAL:
Las fases no pueden disolverse entre si, la fase mvil puede ser gaseosa (cromatografa
de gases) o lquida (cromatografa lquida), mientras que la fase estacionario puede ser
lquida o slida.
Cromatografa de absorcin: separacin en funcin de las diferentes representaciones de
absorcin de los componentes sobre superficies absorbentes.
Cromatografa de particin: coeficientes de particin de la fase mvil y estacionaria.
Cromatografa de exclusin: por los tamaos moleculares
De acuerdo a la polaridad relativa de las fases: fase normal o fase inversa.
Separacin cromatogrfica lquida-slida
De manera general, la
Fase estacionaria: slida Fase mvil: lquida
muestra se extienden
uniformemente sobre un
vidrio placa gracias a un
Cromatografa preparativa

TLC PREPARATIVA TRADICIONES (PTLC) eluyente adecuado para

Se utiliza para aislar compuestos en cantidad de
miligramo. lograr la separacin. Es
en capa fna (TLC

Las placas deben ser prelavadas, se disuelve la simple y rpida.

muestra y se aplica en la TLC como una banda
preparativa)

estrecha. Es preferible usar disolventes voltiles. El

tamao de la placa depende de la cantidad de
muestra y el tamao de la cubeta de desarrollo.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA CENTRFUCA (CTLC)

En TLC tradicional la fase mvil fluye por capilaridad, en CTLC
gracias a una fuerza centrfuga que acelera el tiempo y del
proceso y disminuye la absorcin de impurezas.
Despus de colocada la muestra y el disolvente se produce la
rotacin gracias a un rotor que tambin posee una cmara
que con una lmpara UV permite la observacin de sustancias
activas incoloras. Las bandas tambin pueden ser recogidas a
travs de un tubo de salida en la cmara.
La CTLC tiene muchas ventajas sobre la PTLC
Separacin cromatogrfica lquida-
slida
Cromatografa en columna
Cromatografa en columna abierta
Cromatografa lquida preparativa de presin: ultrarrpida, de baja
presin, de presin media, de alta presin
Cromatografa lquida al vaco
Cromatografa de columna seca
 Cromatografa en columna abierta

Una fase mvil fluye a travs de una fase

estacionaria por gravedad, su aplicacin es
universal pero el proceso es muy lento.
La fase estacionaria debe ser de partcula grande
para que sea ms rpido.
Primero la muestra se disuelve en una pequea
cantidad de disolvente y se coloca sobre la fase
estacionaria.
Este tipo de cromatografa se aplica en la
separacin inicial de extractos crudos.
 Cromatografa lquida preparativa de presin
Cualquier mtodo que incluye en uso de dispositivos para ejercer presin sobre la
cromatografa lquida, lo cual acelera el proceso, da mejor resolucin. Si son
muestras difciles de separar se debe utilizar columnas ms largas con partculas
pequeas y con mayor presin. Se clasifican de acuerdo a la presin empleada para
la separacin.
CROMATOGRAFA LQUIDA DE
CROMATOGRAFA
BAJA PRESIN
ULTRARRPIDA
Rango lobar: las columnas
Se trata de una columna de CROMATOGRAFA LQUIDA DE
rellenas estn hechas de
cromatografa de resolucin PRESIN MEDIA
vidrio, el soporte de gel de
rpida con un grifo de salida.
slice, el material de embalaje Fciles de usar y con alta CROMATOGRAFA LQUIDA DE
El llenado en seco da un
se sella en la columna con resolucin, pero no se puede ALTA PRESIN
mejor empaquetamiento pero
una frita de vidrio y la separar ms de 5g de
requiere el paso de una gran Esta es la ms usada en la
conexin a la bomba es muestra pero se puede usar
cantidad de disolvente antes investigacin qumica de
proporcionada por una cnula columnas ms largas y de
del humedecimiento total. productos naturales. Usa
de metal unido a un anillo de mayor dimetro y estos
Despus de colocada la macropartculas en la fase
PTFE. La resolucin puede equipos existe y son
muestra se genera 1 bar de estacionaria. Es ms costosa
acercarse al HPLC, es comercializados, el tamao de
presin y se tiene una vlvula pero de mayor eficiencia y
bastante simple, las columnas partcula es ms pequeo. La
de aguja para controlar el resolucin.
pueden ser reutilizadas, el presin se suministra por aire
suministro de aire
tamao de partcula es comprimido o bombas de
comprimido. La fase
grande, estas son algunas mbolo.
estacionara es generalmente
razones por las que este tipo
gel de slice. Se utiliza como
de cromatografa es muy
ltima etapa de purificacin.
usada.
 Cromatografa lquida al vaco (VLC)

Mtodo de separacin cromatogrfica que utiliza el vaco para acelerar las tasas de flujo de
eluyente. Tiene ventajas como que se trata de un equipo simple, menor tiempo de separacin,
mejor resolucin y capacidad de gran separacin.
Se puede realizar por una columna corta o un embudo de Buchner, filtro de embalaje con una
varilla de vidrio con absorbente seco. La muestra con el solvente adecuado, se aplica
directamente sobre la parte superior de la columna y se extrae suavemente el adsorbente bajo
vaco.
 Cromatografa de columna seca

El material de empaque debe ser seco, la mezcla se agrega

como una solucin concentrada o absorbida en una pequea
cantidad de adsorbente antes de la introduccin. Es lenta y
utiliza poco solvente.
El soporte es el factor principal para determinar la eficiencia
de la columna, el dimetro de partcula ms pequeo, el
rango ms estrecho del tamao de partcula, tambin lo son.