Laboratorio Química Medicinal I, 7to Semestre, Grupo A,
Programa de Químico Farmacéutico Biólogo, Unidad Académica
de Ciencias Químicas, Área de Ciencias de la Salud, UAZ.
Carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6, Ejido La Escondida,
Zacatecas, Zac
Ciclo agosto-diciembre 2017
Identificación y cuantificación de Cafeína a partir de té negro.
Muñoz Hernández E. V. & Regalado Rodríguez M.
1 Introducción
La cromatografía en capa delgada (CCD) es una
técnica principalmente cualitativa de uso muy común
para la separación e identificación de compuestos, asi
como de una gran variedad de sustancias. Esta técnica
es muy accesible, ya que es económica, rápida y muy
sensible, es suficiente el contener 1 mg de nuestro
analito para que sea funcional.3 La prueba utiliza para
su observación en ciertos compuestos la luz ultravioleta,
lo cual lo hace accesible para laboratorios más
pequeños, y por lo tanto, por medio de ésta prueba es
posible el observar si contenemos nuestra muestra
deseada y si es preciso es realizar posteriormente una
prueba cuantitativa, que nos indique la cantidad o
concentración exacta de nuestro analito; para ello una
de las herramientas clave en la cuantificación que es de
acceso fácil es la técnica por espectrofotometría, donde
dependiendo del compuesto es a las longitudes de onda
que se puede trabajar para ello se hace incidir una luz a
una longitud de onda determinada, lo cual es medible
por el aparato, esto con base en la ley de Beer
podremos obtener su concentración. 5
En la CCD un determinante para encontrar y saber
las características de nuestro compuesto es la retención
(Rf) porque gracias a esto, nos ayuda a determinar la
polaridad que poseen los compuestos, ya que los
solutos que son más polares estarán retenidos en la
fase estacionaria por la absorción de los centros activos,
mientras que los no polares se eulirán.6 También puede
encontrar la naturaleza del disolvente ya que entre más
polar mayor será su desplazamiento en la placa. A su
vez la espectrofotometría UV, al ser una prueba
cuantitativa y cualitativa es capaz de determinar los
grupos funcionales por los que se encuentra conformado
compuesto, por ejemplo, si es un alcano, un éster o
aldehído, dependerá
2 Objetivo
Demostrar la presencia de cafeína y evaluar su
contenido en los productos obtenidos empleando CCD y
espectrofotometría UV.
3 Materiales y Métodos
Con la obtención de nuestra cafeína por medio de un
método de extracción liquido- liquido, se procedió a la
identificación de la presencia de ésta.
Primeramente, se realizó la técnica de CCD en el cual
se preparó el medio
de elusión donde se dejaría la placa para el corrimiento,
por lo que se colocó un vaso de precipitado con 100 ml
de acetato de etilo y se cubrió para saturación del vapor.
Se continuó con el pesado de las muestras de cafeína y
la tableta, 2.8 mg disueltos en 112 µl de EtOAc y
106.7mg en 200 µl (equivalente a 5mg de cafeína),
respectivamente en tubos eppendorf; una solución de la
cafeína estándar se encontraba ya preparado a una
concentración de 25 mg/mL. Se hizo el etiquetado de
forma correcta.
Se realizó un etiquetado de la placa para indicar
donde se encontraría cada una de las muestras durante
el corrimiento y la línea limite. Después se colocó la
placa dentro el vaso de precipitado con el medio de
elusión y de dejó hasta que el medio llegará a la línea
limite. Por último, se llevó a la luz ultravioleta para
observar el corrimiento y lograr tomar las medidas.
Para el análisis espectrofotométrico se realizó una
solución de NaOH 0.1 N y ya se encontraba pre
elaborada por el docente la solución patrón o estándar
de cafeína y se procedió a la preparación de la curva de
calibración, en la que la concentración del estándar de
cafeína era de 100 µl / ml y se realizaron los puntos a
partir de esta con concentraciones de 4, 8, 12, 16 y 20
µg/mL . Las muestras fueron diluidas en 25 ml de NaOH
0.1 N y se tomó una alícuota de 1 ml para agregar 4 ml
de NaOH. Posterior a esto, se continuó a medir las
absorbancias a una longitud de 275 nm con un blanco
de NaOH, en este punto las concentraciones eran
demasiado altas que no podían ser leídas y se diluyeron;
además de realizar las mediciones de absorbancia, se
hizo un barrido de un tubo de la curva correspondiente a
12 µl/ml asi como de las muestras en un rango de 200-
500 nm.
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acetilsalicílico que se encontraba en la tableta de

cafiaspirina.
4 Resultados
Análisis cuantitativo
Se realizaron los análisis correspondientes para la Se realizo una curva de calibración con un patrón de
muestra de cafeína proveniente del té negro, la cafeína previamente utilizado para el análisis cualitativo,
cafiaspirina y un control de cafeína todos a una donde se obtuvieron los siguientes resultados de A para
concentración de 25 mg/mL, por lo que se tienen los cada punto en la curva de calibración.
siguientes resultados en la cromatografía en capa
delgada. Tubo Concentración (g/mL) A
1 4 0.001
2 8 0.023
3 12 0.045
4 16 0.063
5 20 0.088
A su vez se tiene el siguiente gráfico donde se
Tabla 1. Valores para la curva de calibración con un
estándar de cafeína y su absorbancia.
representa la curva de calibración aceptable por un valor
de r2=0.9996.

Gráfico 1. Curva de calibración con el valor de r

cuadrado y la ecuación de la recta.
Con los resultados de la curva de calibración se
Figura 1. Cromatografía en Capa Fina. Valores de Rf y procedió a calcular la concentración de la muestra de
Rx. cafiaspirina y de cafeína proveniente del té negro, los
Análisis cualitativo cuales son los siguientes:
Se obtuvieron para la cafiaspirina y la muestra de té
negro un valor de Rf de 0.19 a comparación del control
de cafeína con un valor de Rf de 0.21. Esto nos indica
que se identificó la presencia de cafeína en un 90.5%.
Además se obtuvo también un valor de Rx donde las
muestras de cafaspirina y té negro alcanzaron un valor
de 0.88. Lo que nos indica que se logró hacer una Tabla 2. Valores de la concentración real de cafeína en
extracción aproximada del 88% de cafeína pura. la muestra.
Cabe destacar que tenemos un punto extra en la
placa de cromatografía que sería en este caso el ácido
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A la par de los resultados obtenido también se realizó
un barrido de 200-500 nm de la muestra del control, la
cafiaspirina y la cafeína proveniente del té negro de las
cuales los resultados son los siguientes:
Grafico 2. Espectro de absorción del patrón de cafeína
Grafico 3. Espectro de absorción de la Cafiaspirina
Como punto de comparación las 3 muestras a una
longitud de onda de 230nm concordaron en un pico
como máximo.
Para la determinación del porcentaje de cafeína tanto
para el producto farmacéutico como para la muestra de
se te utilizo la siguiente formula, donde como resultado
se tiene lo siguiente 98.3% de recuperación en fármaco
y 96.57% de cafeína en té.:
4.915 mg
% Recuperación Cafeína en Farmaco=
5 mg
Grafico 4. Espectro de absorción de la muestra de
cafeína extraída a partir del Té negro
2.704 mg
% Cafeína en Té = ∗100
2.8 mg
5 Discusión y Conclusión
Con los resultados obtenidos podemos destacar que
en los valores de Rf y Rx se logró identificar
correctamente a la cafeína y con una alta pureza ya que
los valores obtenidos para un Rf y Rx fue del 90.5% y
una pureza del 80%.
Por otro lado la cuantificación de la cafeína en las 2
muestras tanto en la presentación farmacéutica como en
la extraída en prácticas anteriores tubo un buen
resultado con un valor del 98.# y 96.57%
respectivamente, lo que la cantidad de cafeína
encontrada era casi neta. También la similitud en el
espectro de absorción de distinguió un pico a una
longitud de los 230 nm en las 3 muestras, cabe destacar
que encontramos más cosas alrededor del espectro,
probables causas a ello, puede ser contaminación de la
muestra por algún agente del exterior, degradación de la
cafeína o simplemente falta de purificación de la
muestra, cabe destacar que en dicho espectro sobresale
el ácido acetilsalicílico así como en la cromatografía, y
también algún otro pico en la muestra de té lo que nos
indica la presencia de algún otro compuesto. Esto nos
refiere que se logró identificar cualitativa y
cuantitativamente nuestra muestra de cafeína y poder
asegurar que en el té negro con respecto a lo reportado
en la literatura tenemos del 3-6% de cafeína lo que si
refuta lo ya establecido por distintos autores.
∗100
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6 Referencias

1. Fernández, G. 2009. Espectroscopía visible-

Ultravioleta en compuestos orgánicos. Recuperado de:
www.quimicaorganica. org/
2. Insituto Politécnico Nacional. S.F. Aplicaciones
de la espectrofotometría UV-vis. Escuela superior de
Ingeniería Quimíca e Industrias Extractivas. Recuperado
de: //. Es.scribd. com/
3. Oficina de las Naciones Unidas contra la droga.
2013. Manual para uso de laboratorios Nacionales de
análisis de drogas. Recuperado de: www.unodc.org/
4. S.A. S.F. Cromatografía en placa fina.
Recuperado de: www.uam.es/
5. Universidad de Guanajuato. 2008.
Espectroscopía UV-VIS. Recuperado de:
www.dcne.ugto.mx/
6. Voet, D. y Voet, J.G. 2004. Bioquímica. 3ª ed.
Pp 151. Editorial Médica Panamericana. México.

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