EFECTO DE LA ADMINISTRACION DE CORTICOSTERONA EN HIPOCAMPO Y

ESTRIADO DORSAL EN CONDICIONAMIENTO DE MIEDO AL CONTEXTO

García Lara, L.G.(1); Quirarte, G.L.(2);
(1)
Facultad de Ciencias Químicas Lic. En Biotecnología
Universidad Autónoma de Querétaro
(2)
Instituto de Neurobiología
Universidad Nacional Autónoma de México

RESUMEN
Se administró corticosterona en dosis de 10 ng / 1µl para los grupos experimentales y vehículo de
corticosterona para los grupos control en hipocampo dorsal y estriado dorsal para determinar si
tenía efecto facilitador sobre el condicionamiento de miedo al contexto. Se espera que como el
hipocampo es esencial en la adquisición y consolidación de la representación contextual tenga
dicho efecto facilitador y como la administración de corticosterona en el estriado dorsal en la
tarea modificada de evitación inhibitoria no facilitó la memoria en los aspectos contextuales no
tenga ningún efecto.

INTRODUCCIÓN
Las hormonas glucocorticoideas muestran un efecto dosis-dependiente en la consolidación de la
memoria en animales y humanos (Roozendaal B., 2000). Los receptores a glucocorticoides
(GRs) ubicados en el Estriado, Amígdala Basolateral y Sistema límbico (Hipocampo y Septum)
tienen una baja afinidad por corticosterona y son ocupados sólo durante condiciones de estrés
(Roozendaal B. y col, 2006). La respuesta de estrés inducida por el aprendizaje de una tarea y la
consiguiente liberación de glucocorticoides asociada a la misma, se han implicado en los
procesos de consolidación de la memoria, ejercen efectos facilitadores sobre la intensidad con la
que se almacena la información recientemente adquirida en una memoria a largo plazo (Sandi C.,
2003). La tarea de Condicionamiento de miedo al contexto es un aprendizaje asociativo llamado
condicionamiento clásico o también se le puede llamar respondiente o Pavloviano. En donde un
estímulo incondicionado (US) produce de manera innata una respuesta incondicionada (UR),
luego la asociación o apareamiento de este US con un estímulo neutro, llamado estimulo
condicionado (CS) produce la UR. Este apareamiento consecutivo múltiple de los dos estímulos
(US + CS) provoca una respuesta condicionada (CR), después el sujeto producirá una CR al ser
presentado con un CS, sustituyendo al US. El condicionamiento de miedo al contexto es
producto de dos independientes procesos de aprendizaje. Cuando el animal es colocado en un
contexto novedoso primeramente realiza la construcción de una representación de las
características contextuales que luego la asociará con el evento aversivo generador de miedo. Hay
evidencia de que el condicionamiento de miedo al contexto y el condicionamiento de miedo
auditivo trabajan de manera independiente. Por ejemplo hay tratamientos que solamente tienen un
efecto sobre el condicionamiento de miedo al contexto tales como: la administración crónica de
corticosterona lo facilita (Conrad C.D., 2004) al igual que las inyecciones de D-anfetamina en el
hipocampo dorsal ya que esta actúa en las neuronas catecolaminérgicas terminales para
incrementar la liberación de neurotransmisores cuando la neurona está activa (White y Salinas,
2003). Por otro lado inyecciones sistémicas de antagonistas a glucocorticoides lo disminuye
(Pugh C.R. y col, 1997) al igual que las infusiones tanto anterógradas como retrógradas de
escopolamina en el hipocampo dorsal ya que induce un bloqueo colinérgico (Wallenstein y Vago,
2001).

1
El hipocampo es esencial en la adquisición y consolidación de la representación contextual.
Además una pre-exposición al contexto tiene un efecto facilitador (Barrientos R.M. y col, 2002).
Sin embargo la administración de corticosterona en el estriado dorsal (núcleo caudado) en la tarea
modificada de evitación inhibitoria no facilitó la memoria en los aspectos contextuales ni
emocionales de dicha tarea (Medina A.C. y col, 2007). Entonces los objetivos de este estudio
son: determinar si la administración de corticosterona en el hipocampo dorsal facilita la tarea de
condicionamiento de miedo al contexto, determinar si la administración de corticosterona en el
estriado dorsal tiene algún efecto sobre el condicionamiento de miedo al contexto.

METODOLOGÍA
Sujetos: Se utilizaron ratas macho de la cepa Wistar con un peso corporal entre 250 - 350 g.
Todas las ratas permanecieron en cajas de acrílico individuales, con alimento y agua ad libitum,
en el bioterio del laboratorio de Aprendizaje y Memoria del Instituto de Neurobiología, UNAM,
con temperatura controlada (22° C) y un ciclo de luz-oscuridad de 12 h.
Cirugía: Se realizó una intervención quirúrgica a las ratas utilizando una dosis de pentobarbital
sódico (50 mg/Kg, Sedalphorte) y atropina la misma dosis para todas las ratas (0.4 mg/ml,
Atropisa); ambos fármacos fueron administrados intraperitonealmente. Se inyectó por vía
subcutánea 1 ml de solución salina isotónica antes de la intervención. Se rasuró la piel del cráneo
y se fijó la cabeza en un aparato estereotáxico (Stoelting Co; Illinois). Se incidió la piel a nivel de
la línea media en el cráneo en una longitud aproximada de 1.5 cm. y se raspó el tejido perióstico
para facilitar la fijación de cánulas al cráneo. Con un taladro para uso fino se hicieron varios
orificios pequeños en el hueso del cráneo, cuidando no lesionar la duramadre, a través de los
cuales se introdujeron las cánulas guías fabricadas con tubo de aguja hipodérmica de acero
inoxidable del número 23. La implantación de las cánulas para el hipocampo dorsal (10 mm) se
realizó en las coordenadas: AP, -4.0 mm; ML, ± 2.7 mm, DV, -2.7 mm. La implantación de las
cánulas para el estriado dorsal (11 mm) se realizó en las coordenadas: AP, Bregma, ML, ± 3.2
mm, DV, -3.8 mm. La colocación de las cánulas en las estructuras referidas se realizó utilizando
el atlas del cerebro de rata de (Paxinos y Watson, 1998). Se colocaron 2 tornillos en el cráneo
para un mejor anclaje, y se cubrió la superficie del cráneo con cemento dental además se suturó la
piel. A cada cánula se le puso un tapón-estilete de 10 y 11 mm de longitud, dependiendo de la
estructura, que se retiró para administrar las drogas. A las ratas se les permitió recuperarse de la
intervención quirúrgica durante una semana antes de ser entrenadas.
Aparatos: El entrenamiento y la prueba se llevaron a cabo en una cámara de actividad motora,
Versamax system, (40.5 cm. de largo, 40.5 cm. de ancho, 26.0 cm. de altura). La actividad
animal se mide a través de una red invisible de rayos infrarrojos que se ven interrumpidos cuando
el animal es colocado en la caja. La información es recolectada a través de un software fuera del
cuarto de experimentación. Una serie de barras igualmente espaciadas (1.17cm.) atraviesan la
caja de izquierda a derecha, por las cuales es aplicado el choque.
Procedimiento: Para el entrenamiento cada rata es colocada en la cámara de actividad motora
donde permanece en exploración por 3 minutos al término de este periodo se le aplica el primer
choque con una intensidad de 0.6mA y una duración de 1 segundo. Cada minuto después se le
presentará el choque nuevamente hasta terminar el experimento (11 minutos). La rata, a lo largo
del experimento, adopta una conducta de disminución de su actividad motora o también llamada
freezing, así como otras respuestas conductuales y fisiológicas asociadas al miedo. La prueba se
realiza 48 hrs después del entrenamiento, se coloca nuevamente a la rata en la cámara de
actividad motora donde permanece 11 minutos pero esta vez no se le aplica ningún choque.

2
Preparación de fármacos y Microinyecciones: El stock de corticosterona se preparó con 5mg de
corticosterona disuelta en 3.33 ml de etanol, de ahí se preparó la dosis de 30 ng (200 µl del stock
+ 9,800 µl de solución salina isotónica) y de 10 ng (2,000 µl de dosis de 30 ng + 4,000 µl de
solución salina isotónica) y el vehículo se preparó con 19,600 µl de solución salina isotónica +
400 µl de etanol. La dosis de 10 ng para el grupo experimental y el vehículo para el grupo
control, fue lo que se administró inmediatamente después del entrenamiento con una bomba de
infusión lenta (WPI modelo sp200i), en la que se colocó una jeringa Hamilton de 10 µl,
conectada a través de un tubo de polietileno calibre PE-20 a un inyector de 11 mm de longitud
para hipocampo dorsal o de 12 mm para estriado dorsal, fabricada con tubo de aguja hipodérmica
de acero inoxidable del número 30. La administración de los fármacos tanto para el hipocampo
dorsal como para el estriado dorsal se llevó a cabo en un volumen de 1µl durante 1 min.

RESULTADOS

Figura 1. Se muestra el promedio y error estándar de la actividad motora en los entrenamientos

y las pruebas para hipocampo y estriado dorsal en el grupo control y en el experimental.

Estriado dorsal. En el grupo vehículo según la prueba estadística de anova de medidas repetidas
se obtuvo f 10, 10 = 11.218 P < 0.0001, lo que significa que este grupo si aprendió la tarea. En el
grupo experimental, corticosterona 10 ng / 1 µl, se obtuvo f 9, 10 = 14.105 P < 0.0001, lo que
significa que este grupo también aprendió. En la adquisición de un cambio en la conducta a través

3
del tiempo, producto de la experiencia, (aprendizaje) en el día del entrenamiento no hubo
diferencias significativas entre los grupos vehículo y experimental en ninguno de los minutos a
partir de que se recibe el primer choque según la prueba estadística de t- de student. P > 0.05.
Hipocampo dorsal. En el grupo vehículo según la prueba estadística de anova de medidas
repetidas se obtuvo f 4, 10 = 3.310 P < 0.0031, lo que significa que este grupo si aprendió la tarea.
En el grupo experimental, corticosterona 10 ng / 1 µl, según la prueba estadística de anova de
medidas repetidas se obtuvo f 3, 10 = 3.030 P < 0.0091, lo que significa que este grupo también
aprendió. En la adquisición de un cambio en la conducta a través del tiempo, producto de la
experiencia, (aprendizaje) en el día del entrenamiento no hubo diferencias significativas entre los
grupos vehículo y experimental en ninguno de los minutos a partir de que se recibe el primer
choque según la prueba estadística de t- de student. P > 0.05. En la prueba de retención, a las 48
hrs, de estriado dorsal e hipocampo dorsal no hay diferencias significativas entre los grupos en
ninguno de los puntos según la prueba estadística de t- de student P > 0.05.

CONCLUSIONES
Las memorias involucradas en esta tarea son: la memoria emocional, ya que es un
condicionamiento aversivo; la memoria espacial, ya que la rata adquiere y retiene asociaciones
de las características contextuales y la memoria declarativa episódica.
La administración de corticosterona en ratas de 250-350 gr en dosis de 10 ng / 1 µl en el estriado
dorsal e hipocampo dorsal inmediatamente después del entrenamiento de una tarea de
condicionamiento de miedo al contexto no produce facilitación de la memoria.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Barrientos R.M., O’Reilly R.C., Rudy J.W., “Memory for context is impaired by injecting
anisomycin into dorsal hippocampus following context exploration”, Behavioural Brain
Research, 134, 299-306, 2002
Conrad C.D., “Influence of chronic corticosterone and glucocorticoid receptor antagonism in the
amygdala on fear conditioning”, Neurobiology of learning and memory, 81, 185-199, 2004
Medina A.C, Charles J.R., Espinoza-González V., Sánchez-Resendis O, Prado-Alcalá R.A.,
Roozendaal B., Quirarte G.L., “Glucocorticoid administration into dorsal striatum facilitates
memory consolidation of inhibitory avoidance training but not of the context or footshock
components”, Learning and memory, 14, 673-677, 2007
Pugh C.R., Fleshner M., Rudy J.W., “Type II Glucocorticoid receptor antagonists impair
contextual but not auditory-cue fear conditioning in juvenile rats” , Neurobiology of learning and
memory, 67, 75-79, 1997
Roozendaal B., “Glucocorticoids and the regulation of memory consolidation”,
Psychoneuroendocrinology 25:213- 238, 2000
Roozendaal B, Okuda S, Quervain D. J.-F y McGaugh J.L., “Glucocorticoids interact with
emotion-induced noradrenergic activation in influencing different memory functions”,
Neuroscience ,138:901-910, 2006
Sandi C., “Implicación de los glucocorticoides en la consolidación de la memoria”, Rev. Neurol.,
37, 843-848, 2003
Wallenstein G.V., Vago D.R., “Intrahippocampal scopolamine impairs both acquisition and
consolidation of contextual fear conditioning”, Neurobiology of learning and memory, 75, 245-
252, 2001
White N. M., Salinas J. A., “Mnemonic functions of dorsal striatum and hippocampus in aversive
condiotioning”, Behavioural Brain Research, 142, 99-107, 2003
4