UNIVERSIDAD D E L VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

CONTROL DE CALIDAD EN EL
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA
INFORME N°13
MICROBIOLOGÍA

ALUMNOS:

 LOAYZA CALLISAYA DENILSON DAVID

 LÓPEZ ACHOCANA VIOLETA JAZMÍN
 MAMANI CRUZ LUZ NEIDA
 MATTAZ HUAMPU WIÑAY BERENICE
 PAREDES VELASCO LIZETH NAYELI

DOCENTE: DRA. MONZÓN HUANCA NOEMÍ

GRUPO: B2

SUBGRUPO: 4

La Paz – Bolivia
Gestión I – 2023
 1. OBJETIVOS

Objetivo General

Conocer los diferentes tipos de control de calidad, dentro de un laboratorio de

microbiología, reconociendo técnicas y procedimientos adecuados para realizar un
trabajo sin un porcentaje elevado de errores, controlando tanto medios de cultivo,
materiales y equipos, para su correcto uso y funcionamiento, para no lanzar
resultados erróneos, ni utilizar material o equipos en mal estado.

Objetivos Específicos

 Aplicar los procedimientos correctos para un control de calidad en cada

área dentro de un laboratorio de microbiología.
 Conocer las diferentes fases de un control de calidad, y aplicarlas de una
manera correcta y adecuada.
 Verificar de manera detallada, el correcto control de calidad de los
diferentes materiales, equipos, reactivos, medios de cultivo y muestras.
2. MARCO TEÓRICO
Fase preanalitica Está fase se refiere a la etapa previa al análisis, esto se da
debido a una exigencia de pasos a seguir antes de realizar el procedimiento para
el análisis.
 Control de esterilidad
Tomando en cuanta que la esterilización se define como el proceso mediante el
cual se destruyen todos los microorganismos viables presentes en un objeto o
superficie, incluidas las esporas bacterianas. De esta manera tomamos en cuenta
que para microbiología se refiere a la esterilidad en los materiales los cuales son
incluidos las asas bacterianas, medios de cultivo.
Para los medios de cultivo un método que se utiliza es un “medio de control” el
cual tiene la función de determinar las reacciones o en este caso la proliferación
de microorganismos en el medio, Para de esta manera determinar si existe
proliferación de microorganismos se concluye que existirá un medio no estéril y
podrá ser el lote desechado.
 Control de pH
El pH es un factor importante debido a que influye sobre el crecimiento y
metabolismo de microorganismos. Algunas bactergeneralmente crecen a pH bajo
entre 3.0, los hongos también se desarrollan a pH bajo 1.0. Sin embargo el rango
óptimo para las bacterias es de 6.0 hasta 8.5 y unas pocas proliferan a mayor pH
de 8.5.
El control del pH es una prueba química muy importante, ya que influye en el
rendimiento de los medios de cultivo. Si el pH del medio de cultivo está fuera del
rango recomendado, no solo inhibe el crecimiento de los microorganismos que el
medio de cultivo pretende cultivar, sino que también pueden ocurrir cambios
físicos como la precipitación de componentes o la gelificación blanda del agar. Los
controles de pH de rutina en medios de cultivo líquidos, semisólidos o sólidos se
pueden realizar simplemente con un medidor de pH y un electrodo de pH después
de la calibración adecuada con tampones de pH.

Los electrodos de pH planos, también llamados electrodos de pH de fondo plano,

electrodos de pH de punta plana y electrodos de pH de superficie plana, se usan
comúnmente para medir el pH de los medios de cultivo, especialmente para
placas de agar. Tanto la membrana de detección como la unión de referencia del
electrodo de pH plano están construidos en la punta de la superficie plana del
cuerpo del electrodo. Esta configuración de punta es perfecta para medir el pH de
una sola gota o un pequeño volumen de muestras líquidas, así como superficies
húmedas de muestras blandas sólidas o semisólidas.
 Control de equipos
a) Autoclave
Se puede realizar el control de este equipo por medio de dos métodos un método
físico que controla: la temperatura, la presión y el tiempo que debe llevar a cabo la
autoclave para su funcionamiento. En este método se puede hervir agua dentro de
la autoclave y medir sus características para ser comparadas con el rango que es
15min 1atm y 120 C.
Método químico donde se coloca el test dentro de un paquete, que irá pasar por el
ciclo de esterilización de la autoclave. Normalmente los hospitales lo utilizan en el
primer ciclo, y coloca el paquete test en el punto mas frio de la autoclave, que es
abajo junto al dreno. Este llega a cambiar de color y así determinará las
condiciones de la autoclave.
b) Estufa de incubación
Se debe determinar la temperatura óptima para la proliferación de
microorganismos, siendo esta 35 C. Normalmente se debe revisar que este equipo
no se apague, porque puede llegar a perjudicar en el proceso.
c) Refrigerador
Se debe determinar una temperatura óptima para la contención de los diferentes
materiales, la temperatura debe mantenerse 2-4 C.
Fase analítica En esta fase se refiere a la etapa del procedimiento.
 Toma de muestra
Dependiendo del tipo de muestra se tomarán diferentes medidas de control. Una
de las medidas más comunes es referida a la muestra de orina. Este muestra
debe contener controles, uno de estos es evitar que el paciente se encuentre con
tratamiento antibiótico, debe realizar el lava previo, deber ser en un tiempo mínimo
de traslado de la orina al laboratorio la cantidad necesaria.
Un ejemplo a parte de toma de muestra puede referirse al cuproculrivo, debe ser
una cantidad necesa, tiempo mínimo de traslado, etc.
 Control de medios de cultivo
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN EL LABORATORIO
Para la preparación de los medios de cultivo se siguen las indicaciones del
fabricante, sin embargo en algunos casos los medios se preparan a partir de cada
uno de sus diferentes componentes. Se debe utilizar agua destilada que haya sido
sometida a controles que aseguren su calidad. Los principales análisis que se
realizan al agua son: conductividad, pH, determinación de mesofílicos aerobios y
determinación de metales pesados. Otro aspecto a tener en cuenta es el correcto
lavado del material de vidrio. El laboratorio debe contar con un procedimiento para
esta actividad en el que se especifica que el material contaminado debe
esterilizarse y posteriormente lavarse usando una solución de detergente neutro,
el enjuague debe ser con agua de la llave, posteriormente con agua destilada, y
como paso final se realiza la prueba con azul de bromotimol para determinar la
eliminación de residuos alcalinos o ácidos

CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO

Una vez que se ingresa un medio de cultivo al laboratorio se debe identificar con
una clave, registrar la fecha de recepción, la de apertura y la de caducidad. El
almacenamiento debe realizarse en las condiciones especificadas por el
fabricante. Los envases deben estar herméticamente cerrados, especialmente
cuando se trate de medio deshidratados. No es recomendable utilizar medios
deshidratados que presenten apelmazamiento o un cambio de color. Se debe
verificar que los medios de cultivo y diluyentes preparados por el laboratorio
tengan las características adecuadas con respecto a:

› Esterilidad
› Propiedades físicas: pH, color
› Productividad o promoción de crecimiento: Recuperación o
supervivencia de los microorganismos de interés.
› Selectividad: Inhibición de los microorganismos no deseados.
› Porcentaje de recuperación bacteriana. Es el rendimiento o
recuperación de un microorganismo que se espera que se desarrolle en
el medio de cultivo.

Control de esterilidad de los medios de cultivo

Este procedimiento se lleva a cabo cada vez que se prepara un lote de medio de
cultivo o diluyente. Los medios de cultivo preparados se incuban en estufa a 35 °C
durante 24h. Esta prueba se realiza sobre el 5% del lote preparado. El criterio de
aceptación es que no debe haber crecimiento, sí se presenta desarrollo se
rechaza el lote. Pruebas de funcionalidad de medios de cultivo. Para evaluar los
medios de cultivo se usa una cepa de referencia apropiada para el medio de
acuerdo a la norma ISO/TS 11133-2:2000. A partir de la cepa de trabajo, se
prepara un cultivo en fase estacionaria en un caldo no selectivo por ejemplo, caldo
nutritivo o caldo infusión cerebro corazón, con este cultivo se realizan las pruebas
correspondientes para cada medio de cultivo.

Prueba de promoción de crecimiento

Para los medios de cultivo líquidos se realiza la prueba de promoción de

crecimiento para evaluar su productividad y selectividad.

Productividad en medios líquidos

Del cultivo en fase estacionaria se inoculan por separado 100, 10, 1, UFC/ mL en
el medio a probar, se incuba a la temperatura y tiempo correspondiente y se
observa el desarrollo en cada uno de los tubos inoculados con el microorganismo
de prueba. Si el medio de cultivo es conforme se espera que haya desarrollo en
todos los tubos inoculados y el lote de medio se acepta.

Selectividad

Para llevar a cabo la prueba de la selectividad se emplea un microorganismo que

se inhibido por el medio de cultivo selectivo por ejemplo para el caldo lauril sulfato
se evalúa el desarrollo del microorganismo que si crecen y otro que es inhibido por
el medio de cultivo. En este caso la cepa que sí crece en el medio de cultivo es
Escherichia coli ATCC 25922 y la cepa que se inhiben es Enterococcus faecalis
ATCC 29212. El criterio de aceptación es observar crecimiento (turbidez) y
producción de gas en los tubos inoculados con E. coli e inhibición del desarrollo de
E. faecalis (ISO/ TS 11132-1: 2009).

Porcentaje de recuperación bacteriana

Es el rendimiento o recuperación de un microorganismo que se espera que se

desarrolle en el medio de cultivo. Este parámetro aplica únicamente para agares
empleados en la técnica de cuenta en placa por ejemplo en un medio de cultivo
agar cuenta estándar se evalúa el adecuado desarrollo de las cepas de prueba,
empleando agar soya tripticaseína como medio de cultivo de referencia. El
porcentaje de recuperación bacteriana (PR) es definido como sigue:

PR = (Ns /No) (100)

Dónde: Ns: es la cuenta total de colonias obtenida en el medio de cultivo a probar

No: es la cuenta total de colonias obtenida en el medio de cultivo de referencia y

debe ser ≥ 100 UFC/mL.
Si en cada lote de preparación el porcentaje de recuperación bacteriana es ≥ 70 %
se considera aceptable (Standard Methods for the Examinations of Dairy Products,
2004).

Selectividad y especificidad de medios de cultivo selectivos

Prueba Ecométrica Con esta prueba se evalúa la selectividad y especificidad de

medios de cultivo selectivos. Se emplean tres microorganismos que se desarrolla
en el medio de cultivo y tres cepas de microorganismos que son inhibidos en el
medio de cultivo.

De cada microorganismo se prepara un cultivo en fase estacionaria y se siembra

con un asa calibrada de 1 µL trazando sobre la superficie del medio de cultivo en
forma paralela 5 estrías sobre cada cuadrante y una estría central sin esterilizar y
recargar el asa, como se muestra en la Figura 1. Las cajas Petri se incuban a 35°
C durante 24 horas, y después se efectúan las lecturas teniendo en cuenta que

cada estría tiene un valor de 0.2 y la estría central de 1.0.

Si hay crecimiento en las cinco estrías de los cuatro cuadrantes y la estría central,
el índice de crecimiento tiene un valor de 5.

Criterios de aceptación: 555-000

Prueba de Selectividad en Agares selectivos

La prueba de selectividad se evalúa con el método ecométrico determinando la

inhibición o crecimiento de los microorganismos de prueba así como la morfología
colonial
(Figura 2).

Almacenamiento de los medios de cultivo

Se debe determinar y verificar el período de validez de los medios preparados en

las condiciones de conservación especificadas. Se debe observar el cambio de
color, la evaporación, la deshidratación, y si ocurre crecimiento microbiano. En
general los medios preparados se guardan a 4° C, no más de tres meses

Informe de Control de calidad

El informe como mínimo debe contener nombre del medio de cultivo evaluado,
número de lote de medio evaluado, fecha de realización del análisis, cepa usada
(género y especie del microorganismo, y clave), medio de referencia usado para
evaluar la productividad, los resultados de productividad, selectividad, promoción
de crecimiento, prueba ecométrica, porciento de recuperación bacteriana, prueba
de esterilidad y pH.

Control De Calidad Del Asa bacteriológica

El asa se debe esterilizar antes y después de usar. Para esterilizar el asa

bacteriológica en el mechero se procede de la siguiente manera: se debe colocar
el asa en la parte alta de la llama, adoptando una posición lo más vertical posible,
de tal manera de esterilizar desde la punta hacia arriba.
Cuando el fino filamento se torna color rojo vivo, se puede decir que está estéril.
Para usarla se enfría y se toma la muestra elegida. Esto se lo realiza ya que si no
se esteriliza la asa, esta puede aumentar la carga microbiana dando como
resultados falsos positivos.

Control De Calidad De Reactivos:

Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio de microbiología lo

constituyen los reactivos, tanto comerciales como de preparación doméstica, que
son utilizados en la caracterización de microorganismos. Por ello, deben
efectuarse controles diarios con las bacterias tipo y seguir estrictamente las
indicaciones en cuanto a almacenamiento de los reactivos, metodología de la
prueba y tiempo de lectura. Es recomendable que los reactivos comerciales sean
examinados inmediatamente cuando se abre un nuevo lote o vial y llevar un
registro de su funcionamiento. El registro de funcionamiento debe efectuarse en
forma diaria o al menos cada vez que se efectúa la prueba

Control De Calidad De Las Tinciones:

1. La concentración de las soluciones de tinción, por efecto de la evaporación

de los solventes o las variaciones introducidas en los métodos
recomendados, pueden afectar los resultados de las tinciones para
diferenciar microorganismos por su reacción a la tinción de Gram y la
morfología, tintes para cápsulas, esporas, etc.
2. El control de calidad de éstos tintes debe realizarse primero con cada
nuevo lote, luego basta con un control semanal para mantener un grado
Organismo Control Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae
Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae Pseudomonas
aeruginosa Salmonella sp. Escherichia coli Staphylococcus aureus
Escherichia coli Escherichia coli Enterococcus faecalis Reacción esperada
Crecimiento Crecimiento Β-hemólisis α-hemólisis Crecimiento en la
superficie Colonia incolora con H2 S Colonia rosada Colonia amarilla No
crece Colonia rosada No crece REVISTA HNN-40-1.indd 12 9/13/07
4:15:25 PM Revista Médica del Hospital Nacional de Niños / 40 (1) 2005 13
de seguridad apropiado en su uso. Para facilitar el control de los tintes, se
recomienda preparar placas con microorganismos aislados en el trabajo
rutinario o cepas de la ATCC frescas, tomado en cuenta aquellos que
pudieran ser más útiles según la tinción a evaluar.
3. Para el control diario de la tinción de Gram, se recomienda el uso de una
cepa ATCC de Staphylococcus aureus y de Escherichia coli. 4.4 Es
necesario llevar un registro de estos controles.
Control de calidad de la prueba de sensibilidad:

Se debe monitorear la precisión y exactitud del procedimiento de la prueba de

susceptibilidad, el comportamiento de los reactivos utilizados en la prueba y el
desempeño de las personas que llevan a cabo las pruebas y sus resultados.

Al hacer el control de calidad de discos, tiras de E-test o métodos de sensibilidad

para sistemas automatizados o semi automatizados, se recomienda utilizar cepas
ATCC. Cada nuevo lote de estos insumos debe evaluarse antes de su uso
rutinario y luego una vez al mes, si no existe cambio de lote en ese periodo

Etapa Postanalítica: Informe De Resultados

En esta etapa, los resultados obtenidos por el laboratorio de microbiología son

transferidos al sistema informático, emitiéndose un informe final, el cual debe estar
disponible rápidamente para ser visualizado por el personal de las diferentes áreas
del laboratorio clínico y por el médico tratante. Se debe asegurar la
confidencialidad de los datos del paciente a través de políticas institucionales Así
mismo se recomienda verificar los datos del paciente para descartar errores y
mostrar resultados erróneos y no confiables
3. CONCLUSIÓN
Dentro del informe se tocó, varios puntos, en especial el control de calidad dentro
del laboratorio de microbiología en especial, bien sabemos que dentro del
laboratorio manejamos microorganismos que pueden ser o no patógenos, y que si
no se hace el debido control, estás muestras o estos “resultados” que tenemos
que tener dentro del laboratorio tienen que ser 100% fieles, y para eso se hace un
distinto tipo de control a las muestras, o a los cultivos, ya que para cada uno de
ellos es distinto, y a eso queremos llegar con el informe, como nuestro objetivo es
conocer los tipos de control que se hace en el laboratorio, si se cumplió con el
objetivo, ya que podemos hacer los distintos controles de calidad con efectividad.
Y también en nuestro informe dar a conocer o dar la información correspondiente
de nuestro fin, y es dar a conocer a los demás los métodos de control de calidad
en microbiología.
4. BIBLIOGRAFÍA

CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO. (s/f). Ipn.mx. Recuperado el

29 de mayo de 2023, de
https://www.repositoriodigital.ipn.mx/bitstream/123456789/8164/1/Maricela
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Gil, M. (2019, agosto 27). Asa bacteriológica: características, tipos, usos. Lifeder.
https://www.lifeder.com/asa-bacteriologica/

Herrera, M. L., & Campos, y. M. (s/f). Control de la Calidad para un Laboratorio de

Microbiología. Scielo.sa.cr. Recuperado el 29 de mayo de 2023, de
https://www.scielo.sa.cr/pdf/rmhnn/v40n1/3567.pdf

Margareta Mühlhauser, P., & Lina Rivas, J. (2014). Laboratorio de microbiología:

conocimientos básicos para un clínico. Revista médica Clínica Las Condes, 25(3),
569–579. https://doi.org/10.1016/s0716-8640(14)70072-0
5. CUESTIONARIO
 CONTROL DEL MEDIO DE CULTIVO DEBE REALIZARSE CUANDO
SE ABRE UN NUEVO FRASCO PH DEL MEDIO DE CULTIVO DEBE
ESTAR EN UN RANGO DE 7,2-7,4.

El control de pH del medio de cultivo es importante mantener la esterilidad durante

todo el proceso de cultivo. La contaminación puede afectar negativamente el
crecimiento y la viabilidad de las células, y puede dar lugar a resultados
experimentales inexactos. Para mantener la esterilidad, todo el equipo debe
esterilizarse antes de su uso y deben seguirse las técnicas asépticas adecuadas
durante su manipulación. Este rango de pH proporciona un entorno propicio para
el crecimiento y la proliferación celular. Si el pH del medio de crecimiento es
demasiado alto o demasiado bajo, puede afectar negativamente el crecimiento y la
viabilidad celular. Para controlar el pH del medio de cultivo, se debe utilizar un
sistema tampón. Los tampones son soluciones que resisten los cambios de pH
cuando se agregan pequeñas cantidades de ácido o base. Los tampones
comunes utilizados en el cultivo celular incluyen HEPES, MOPS y MES. Estos
tampones son efectivos para mantener un rango de pH estable en los medios de
cultivo celular. En general, controlar el pH del medio de crecimiento y mantener la
esterilidad son pasos esenciales para un cultivo celular exitoso.
 PROFUNDIDAD DEL AGAR DEBE SER DE 4MM

La profundidad del agar en microbiología es un factor crucial que afecta el

crecimiento de los microorganismos. La profundidad estándar del agar en placas
de Petri es de 4 mm, lo cual es necesario para garantizar condiciones de
crecimiento óptimas para la mayoría de los microorganismos. Esta profundidad
permite la difusión adecuada de nutrientes y oxígeno a los microorganismos, que
son esenciales para su crecimiento y supervivencia. El grosor de la capa de agar
también influye en la determinación de la susceptibilidad de los microorganismos a
los antibióticos y otros agentes antimicrobianos. Las capas finas de agar pueden
dar lugar a resultados falsos, ya que pueden provocar una difusión inadecuada de
los agentes antimicrobianos, lo que da lugar a pruebas de susceptibilidad
imprecisas. Además, la profundidad del agar también puede afectar la
visualización de colonias bacterianas. Una capa demasiado superficial puede
causar dificultades para contar las colonias o distinguirlas, mientras que una capa
demasiado gruesa puede provocar la superposición de colonias y la dificultad para
identificar colonias individuales.