UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA

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Asignatura: Bioquímica Avanzada

Práctica No: 1

Título de la práctica: Reacciones colorimétricas de las

proteínas.

Grupo No:1

Integrantes:

1. Cumbicus Torres Mariuxi Carolina.

2. Montalvan Ruilova Mayra Stefania.
3. Robles Arevalo Paulo Roberto.

Docente: PhD. Santiago Ojeda

Loja, Ecuador 06/02/2022

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REACCIONES COLORIMÉTRICAS DE LAS PROTEÍNAS

INTRODUCCIÓN

Las proteínas son moléculas esenciales para los seres vivos por lo que se hallan en una proporción elevada
en animales y plantas cumpliendo una función biológica específica, la cual está dada por la disposición y tipo
de composición. Así existen proteínas estructurales como el colágeno, enzimas, hormonas, entre otras. Están
formadas por elementos como carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno en mayor proporción, pero también
presentan azufre, hierro, magnesio, cobre y fósforo. Se diferencian de los lípidos y de los hidratos de carbono
por la presencia precisamente de nitrógeno. Son cadenas de más de 50 unidades de aminoácidos unidos por
enlaces peptídicos, cuya estructura química se basa en un grupo amino y un grupo carboxilo o ácido terminal
unidos a un carbono α unido a su vez a un hidrógeno y a una cadena lateral –R. Existen 20 aminoácidos que
las conforman, diferentes entre sí por su grupo radical R. Los grupos amino y carboxilo de los aminoácidos
tienden a protonarse o desprotonarse a diferentes pH (Carbajal Azcona, 2013; Gutiérrez, Santa Cruz &
Barrantes, 2002).

Muchos de los métodos de identificación y cuantificación de proteínas se basan en ciertos criterios o

propiedades de las proteínas, como son la capacidad de absorber la luz ultravioleta, la generación de
derivados químicos y la tendencia de unirse a ciertos colorantes. De la misma manera, la detección
cualitativa de algunos aminoácidos en solución se puede realizar gracias a que la cadena lateral de estos
reacciona con ciertos compuestos formando sustancias coloreadas. Un ejemplo de ello son los anillos
bencénicos que se encuentran en los aminoácidos tirosina y triptófano que al reaccionar con el ácido nítrico
forman un compuesto de color amarillo (Carbajal Azcona, 2013).

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Reconocer la presencia de proteínas en diferentes muestras mediante reacciones colorimétricas de los

aminoácidos que las componen en presencia de diferentes reactivos.

GENERALIDADES

Existen varias pruebas colorimétricas, entre estas están la: reacción de ninhidrina, oxidante poderoso que a
un pH entre 4 y 8 interacciona con los α-aminoácidos dando un compuesto de color purpura; la reacción
xantoproteica, donde los anillos aromáticos al calentarse con ácido nítrico concentrado forman compuestos
de color amarillo; la reacción de Millón, donde el radical hidroxibenceno de la tirosina y sus derivados
reacciona con el reactivo de Millón originando compuestos rojos; reacción con acetato de plomo alcalino,
en la cual los aminoácidos con azufre como son la metionina, cisteína y cistina forman precipitados de sulfuro
de plomo reconocidos por su color gris o negro en presencia de acetato de plomo en medio alcalino; prueba
de nitroprusiato, en la que los tioles en presencia de nitroprusiato de sodio y amoníaco dan una coloración
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roja y la prueba de biuret usada para determinar enlaces peptídicos, en la cual se produce un complejo de
color violeta entre el Cu+2 y los grupos NH de los enlaces peptídicos de las proteínas en medio alcalino. Si
bien esta prueba es específica tiene baja sensibilidad (Ramírez Regalado, 2017).

METODOLOGÍA:
Materiales y Equipos.
Materiales Equipos Sustancias

1 pinza de madera Hielo

2 balones de aforo de 50 ml
2 gradillas Ácido nítrico concentrado
2 balones de aforo de 25 ml
1 baño maría Hidróxido de sodio al 40% y 20
2 pipetas de 5ml %
1 gotero
3 tubos de ensayo Sulfato cúprico 1 %
1 termómetro
Vaso de precipitación de Acetato de plomo al 5 %
1 pizeta
250 y 500 ml
1 pera

Procedimiento.

Esta práctica consto de 3 partes:

Reacción Xantoproteíca (utilizada para identificar aminoácidos con que tienen un núcleo bencénico)

1. Colocamos en un tubo de ensayo 3ml de muestra (clara de huevo, leche, juego verde).
2. Añadimos 1ml de HNO3 concentrado previamente preparado.
3. Calentamos los tubos a baño maría durante 2 minutos.
4. Enfriamos los tubos con hielo por 2minutos.
5. Añadimos 4 gotas de NaOH al 40% previamente preparado-
6. Observamos si ocurre o no un cambio de colorar es donde si es anaranjado oscuro nos indica un
positivo.

Reacción de Biuret (utilizado para identificar uniones peptídicas)

1. Colocamos en un tubo de ensayo 3ml de muestra (clara de huevo, leche, juego verde).
2. Añadimos 2ml de NaOH al 20% previamente preparado.
3. Añadimos 4-5 gotas de sulfato cúprico 1% previamente preparado.
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4. Observar algún cambio de color en donde si es un colorar violeta rosácea nos indica un positivo.

Reacción de aminoácidos azufrados

1. Colocamos en un tubo de ensayo 2-3ml de muestra (clara de huevo, leche, juego verde).
2. Añadimos 2ml de NaOH al 20% previamente preparados.
3. Añadimos 10 gotas de acetato de plomo al 5% previamente preparados.
4. Calentamos los tubos hasta que estos embullan.
5. Observamos si ocurre algún cambio en donde si hay un precipitado negro nos indica un positivo

RESULTADOS:

Reacción Xantoproteíca se produjo una reacción positiva para claro de huevo y jugo verde ya que se produjo
un color naranja oscuro; y negativo para la leche.

Muestra Resultados

Leche Negativo

Clara de huevo Positivo

Jugo verde Positivo

Reacción de Biuret se produjo un resultado positivo en el caso de la clara de huevo y en la leche y un

resultado negativo en el caso de las espinacas y lechuga (jugo verde). En el caso de la leche no se formó un
color violeta rosácea, sino un color un poco más violeta y en el caso del jugo verde apenas se distinguía el
color violeta.

Muestra Resultados

Leche Positivo

Clara de huevo Positivo

Jugo verde Negativo

Reacción de aminoácidos azufrados se produjo un resultado positivo en las tres muestras, en pequeña
porción, se produjo un precipitado negro, luego de llevar hasta ebullición las muestras.
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Muestra Resultados

Leche Positivo

Clara de huevo Positivo

Jugo verde Positivo

IMÁGENES

Reacción Xantoproteica

Leche (-) Jugo verde (+) Clara de huevo (+)

Reacción de Biuret
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Leche (+) Clara de huevo (+) Jugo verde (-)

Reacción de aminoácidos azufrados

Leche (+) Clara de huevo (+) Jugo verde (+)

DISCUSIÓN
En nuestra practica el juego verde echo por lechuga y pepino en nuestro caso presento como resultados
positivo para aminoácidos que tienen anillo bencénico, y aminoácidos azufrados, pero negativo para
identificar uniones peptídicas puesto que la lechuga se caracteriza por presentar principios activos muy
importantes y micronutrientes como los aminoácidos por ejemplo alanina, glicina necesarios para la
formación de las proteínas y en el caso del pepino tiene una composición de aminoácidos totales 53%;
aminoácidos libres 10%; materia orgánica 54%; N total 9% (N orgánico 8,6%); carbono orgánico 27,2%.

Los resultados que obtuvimos en la clara de huevo fue positivo en las 3 reacciones que realizamos tanto en
aminoácidos que tienen anillo bencénico, aminoácidos azufrados y uniones peptídicas puesto que la
composición de la proteína en los huevos contiene los 20 aminoácidos proteogénico requeridos para la
síntesis de proteínas. La clara de huevo es considera nutricionalmente completa y de proteínas de gran
calidad para los humanos; contiene las cantidades adecuadas de los aminoácidos esenciales recomendados.

Los resultados de la leche fueron positivos en las pruebas de uniones pepetidicas y aminoácidos azufrados
pero negativo en anillos bencénicos la leche en su mayor parte del nitrógeno de la leche se encuentra en la
forma de proteína. Los bloques que construyen a todas las proteínas son los aminoácidos. Existen 20
aminoácidos que se encuentran comúnmente en las proteínas. El orden de los aminoácidos en una proteína,
se determina por el código genético, y le otorga a la proteína una conformación única. Posteriormente, la
conformación espacial de la proteína le otorga su función específica, la leche es un alimento muy completo y
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de gran calidad para los humanos, su resultado negativo en los aminoácidos con anillo bencénico se pudo
dar por no dar la agitación correcta al momento de realizar la práctica.

CONCLUSIONES

¿Qué son los aminoácidos?

Los aminoácidos son sustancias orgánicas que contienen por lo menos, un grupo amino (-NH2) con
naturaleza básica, un grupo carboxilo (-COOH) de carácter ácido, y un radical en el carbono alfa.
Tiene algunas funciones biología importantes
Es la unidad estructural de las proteínas.
Es un componente normal en la dieta.
Neurotrasmisor.
Trasporta los ácidos grasos activados.
Participación metabólica en la síntesis de: glucosa, urea, purinas y pirimidinas.

1. Dibuje la estructura básica de los aminoácidos

2. Dibuje el enlace peptídico entre dos aminoácidos

3. ¿Qué son las proteínas?

Son macromoléculas que se encargan de la mayoría de las funciones de las células de los seres vivos,
además forman parte de la estructura básica de tejidos como los músculos, tendones, piel, uñas, etc., crean,
reparan y mantienen los tejidos corporales; y también se encargan de desempeñar algunas funciones
metabólicas por ejemplo actúan como enzimas, hormonas, anticuerpos y reguladoras a saber: asimilación de
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nutrientes, transporte de oxígeno y de grasas en la sangre, eliminación de materiales tóxicos, regulación de

vitaminas liposolubles y minerales, etc.

4. ¿Cómo influyen los aminoácidos en la dieta?

Los aminoácidos están presentes en las proteínas, y juegan un papel clave en casi todos nuestros procesos
biológicos, ya que funcionan como vínculo para llevar nutrientes al cuerpo. Por eso, son componentes
necesarios para el correcto funcionamiento del organismo que se deben tomar necesariamente con la dieta.

5. Pon el fundamento y un ejemplo de las reacciones de Xantoproteica, de Biuret y de aminoácidos

azufrados.
Reacción Xantoproteica es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico
(tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también
darán la reacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la
formación de nitrocompuestos (Yanira & Jabiel, 2014).
Entre los ejemplos tenemos tirosina, fenilalanina, triptófano.
Reaccion de Biuret es una prueba general para polipéptidos y proteínas, ya que sirve para reconocer las
uniones peptídicas. La positividad se manifiesta por la aparición de una coloración violeta, debido a la
formación de un complejo de coordinación entre los cationes cúpricos en medio alcalino con las uniones
peptídicas (Yanira & Jabiel, 2014).
Entre los ejemplos tenemos proteínas, polipéptidos de cadena corta.
Aminoácidos azufrados es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que los
contienen, se reconocen por la formación de una coloración negra o gris (Yanira & Jabiel, 2014).
Como ejemplos tenemos metionina.
6. Dibuje los aminoácidos que tienen anillo aromático y azufre.

Aromáticos Azufre

7. ¿Qué
tipo
de

patologías se asocian con una disminución de aminoácidos y proteínas en la dieta?

El metabolismo es el proceso que nuestro cuerpo utiliza para poder así producir energía a partir de los
alimentos que consumimos. Los alimentos se componen de proteínas, carbohidratos y grasas. El sistema
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digestivo descompone la comida en azúcares y ácidos, que es el combustible para nuestro cuerpo, podemos
utilizar este combustible en forma inmediata, o bien podemos almacenarlo. Si tuviéramos un trastorno
metabólico, tuviéramos problemas en este proceso.

Uno de estos problemas son los trastornos del metabolismo de los aminoácidos. Estos incluyen
la fenilcetonuria y la enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce. Los aminoácidos son los "bloques de
construcción" que se unen para formar proteínas, en donde el cuerpo puede tener problemas para
descomponer ciertos aminoácidos, o puede haber un problema para que los aminoácidos ingresen a las
células. Estos problemas causan una acumulación de sustancias nocivas en su cuerpo. Eso puede conducir
a problemas de salud graves e incluso mortales.

Generalmente por deficiencia de proteínas ocurre cuando hay personas que están haciendo dietas no
supervisadas para poder perder peso, en algunos niños desnutridos o en adultos de edad avanzada quienes
pueden tener una dieta deficiente por falta de cuidados o de economía.

También las personas que son más sensible a la de deficiencia y desnutrición proteica, como el caso de
convalecientes, recuperándose de alguna cirugía, accidentes, enfermedades o de infecciones, incluyendo el
virus del Covid 19, de este año 2020. También las mujeres embarazadas deben por lo general aumentar su
consumo de proteínas, procurando comentarlo con su médico o algún especialista en Nutrición que la pueda
orientar. La carencia proteica produce disminución de masa muscular, deficiencia en el crecimiento,
metabolismo lento, bajo rendimiento físico e intelectual, daño en el desarrollo del feto, un sistema
inmunológico o de defensa deficiente, fatiga, agotamiento, apatía, falta de concentración y de estado de
ánimo (Watabiki et al., 1989).

BIBLIOGRAFÍA:
Carbajal Azcona, Á. (2013). Manual de Nutrición y Dietética (1st ed.). Madrid: Departamento de
Nutrición. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Obtenido de
https://www.ucm.es/nutricioncarbajal/.

Gutiérrez, A., Santa Cruz, C., & Barrantes, I. (2002). Guía de prácticas-Bioquímica (1st ed.). Lima:
Universidad Nacional Federico Villarreal. Facultad de Ciencias Naturales y Matemáticas.

Ramírez Regalado, V. (2017). Introducción a la Bioquímica para Bachilleratos tecnológicos (1st ed.).

Ciudad de México: GRUPO EDITORIAL PATRIA.

Watabiki, T., Tokiyasu, T., Ishida, N., & Ogawa, K. (1989). Double Staining Procedure for
Histochemical Localization of Alcohol and Aldehyde Dehydrogenase Activities in the Mouse
Liver. Acta Histochemica et Cytochemica, 22(3), 401–406. https://doi.org/10.1267/ahc.22.401

Yanira, G., & Jabiel, F. (2014). Caracterización físicoquímica y contenido de proteínas de extractos
fluidos del ostión de mangle (Crassostrea rizophorae). Revista Cubana de Química, XXVI(1),
66–74

MedlinePlus en español [Internet]. Bethesda (MD): Biblioteca Nacional de Medicina (EE. UU.);
[actualizado 28 ago. 2019; consulta 30 ago 2019]. Disponible
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en: https://medlineplus.gov/spanish/.

ANEXOS

CÁLCULOS:

8g NaOh aL 40 %−10 ml

40 x 20 40 x 10
= =4 g
100 ml 100 ml

4g NaOh aL 20 %−25 ml

20 x 25
=5 g
100 ml

CuSO ₄ al 1%−100 ml=0.1 g

Acetato de Plomo al 5 %−25 ml=1,25 g