CÓDIGO: 30622

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
UNIDAD ACADEMICA: Departamento de Biología y Química
CURSO: Fundamentos de bioquímica II
PRACTICA Nº4: CARACTERIZACIÓN QUÍMICA DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

1. OBJETIVOS
Comprobar la solubilidad de la proteína albúmina, en diferentes solventes. Desnaturalizar la
albúmina mediante diferentes agentes.
Analizar el comportamiento de aminoácidos y proteínas en diferentes reacciones químicas.

2. CONSULTA PREVIA
Resaltar los aspectos más importantes de la estructura química y propiedades de una proteína. Consultar la
composición de aminoácidos de la albumina de la clara de huevo.
En un cuadro comparativo escribir las diferencias principales entre:
a. hidrólisis y la desnaturalización de una proteína.
b. Prueba de Biuret y la prueba de la Ninhidrina
c. Reacción xantoproteica y el ensayo de azufre

3. FUNDAMENTO TEORICO
Aminoácidos: Son compuestos orgánicos que contienen grupos amino y carboxílicos en la misma molécula, por lo tanto
poseen propiedades ácidas y básicas. De los 22 o más aminoácidos encontrados en una proteína, casi todos son alfa-
aminoácidos.

Desnaturalización: Es el cambio del ordenamiento de la estructura tridimensional ordenada de la molécula nativa a otro
de una configuración más desordenada.

Durante la desnaturalización se rompen los puentes de hidrogeno y hay un incremento en el grado de desorden de la
molécula con pérdida de la actividad biológica. En la mayoría de los casos no es posible restituir las proteínas su estado
nativo luego de haber sido desnaturalizada.

Después de la desnaturalización la proteína se vuelve menos soluble y pierde su actividad biológica como hormona,
capacidad de actuar como antígeno o la actividad enzimática, dependiendo de si la proteína es una hormona, un antibiótico o
una enzima. También aumenta el número de grupos ionizables para su valoración, como su reactividad química.

Agentes desnaturalizantes: Estos pueden ser de varias clases, entre ellas se encuentran:

Físicos: Calor, luz, presión, congelamiento, rayos X, rayos ultravioleta, ultrasonido y agitación mecánica.

Químicos: Solventes orgánicos: alcohol, éter, acetona, etc.

ELABORADO POR: Cesar Turriago CARGO: Docente Unillanos FECHA:

Hernández y Santiago Valbuena pensionado. Junio 12 de 2017
Rodríguez Docente FCBI, Unillanos
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Bases orgánicas: Amidas y urea.

Detergentes.

Valores de pH altos o muy bajos. Sales

de metales pesados (Hg y Pb).

Ácidos fuertes: Tricloroacético, perclórico, sulfúrico, clorhídrico

Bases fuertes.

Biológicos: Enzimas proteolíticas.

Las proteínas desnaturalizadas tienden a formar agregados moleculares y se precipitan. Esto se conoce con el nombre
de coagulación.

Reacciones químicas: Los aminoácidos como unidades constitutivas de las proteínas, contienen gran cantidad de
grupos químicamente activos, lo que hace que una proteína tenga una amplia reactividad frente a compuestos
orgánicos. Esta es la base de las siguientes reacciones:

Reacción con la ninhidrina: Los aminoácidos y las proteínas dan compuestos de color violeta o purpura con este
reactivo.

Reacción de Biuret: El sulfato de cobre alcalino reacciona con compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos
dando un complejo de coloración violeta. La intensidad del color es una medida del número de enlaces peptídicos que
contiene la proteína a analizar.

Reacción Xantoproteíca: Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático, forman nitro-derivados de color amarillo
cuando se calientan con ácido nítrico concentrado y por álcali pasan a un color anaranjado oscuro.

Ensayo de azufre: Si una solución de proteína se hierve con KOH o NaOH concentrado y luego con acetato de plomo
se forma un precipitado negro, esto si en la proteína están presentes los aminoácidos cistina, cisteína y/o metionina.

Reacción de Millón: El reactivo consta de una solución de nitrato mercúrico en HNO 3. Los compuestos que contienen
un grupo hidroxibenceno reaccionan con este reactivo formando compuestos de color rojo. Los aminoácidos que
pueden dar positiva esta prueba son la tirosina y sus derivados.

Reacción del ácido glioxílico: El grupo indólico del triptófano reacciona con el ácido glioxílico en presencia del ácido
sulfúrico concentrado dando color purpura. El ácido acético glacial que ha sido expuesto a la luz contiene ácido
glioxílico.

4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

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Equipos Materiales
Tubos de ensayo Gradilla
para tubos de ensayo
Mechero
Campana de extracción
Sustancias y/o Reactivos
Reactivo de Biuret
Reactivo de ninhidrina
Reactivo de Millón
Etanol 95%
Ácido nítrico
concentrado Hidróxido
de sodio
10%
Acetato de plomo

5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA

Extraiga la clara de un huevo de gallina. Divídala en dos porciones aproximadamente iguales. A una de ellas adiciónele un
volumen igual de agua destilada, agitar para homogenizar. Se tendrá así dos porciones de clara o de albúmina; sin diluir (sin
agua) y otra diluida (con agua).

Solubilidad de una proteína a diferentes valores de pH:

Colocar tres ml de clara de huevo diluida en (4) tubos de ensayo, a cada uno agregue poco a poco, agitando y observando, 3
ml de las siguientes sustancias: agua destilada, NaCO3 al 10%, NaOH al 10% y HCl al 0.2% respectivamente. Anote en
cada caso si hay solubilidad total, parcial o precipitación. En cada caso medir el pH con un papel indicador universal, para
esto impregnar un pedazo del papel indicador en la solución a ensayar, luego leer el valor del pH sobre la escala de colores
del indicador.

Desnaturalización de proteínas

Calor: Caliente suavemente 2 ml de albúmina sin diluir hasta que observe el primer cambio. Compare con la albúmina no
calentada y anote la diferencia.

Alcohol: A 2 ml de albúmina sin diluir agregue 2 ml de etanol al 90%. Anote el resultado.

Metales pesados: En un tubo de ensayo colocar 1 ml de albúmina diluida, agregue 5 gotas de AgNO 3 al 5% Observe y
reporte los resultados. No arrojar los residuos al desaguadero, pregunte al auxiliar en donde se deben depositar.

Ácidos orgánicos fuertes: Tome un tubo con dos ml de albúmina diluida agregue 1 ml de ácido Tricloroacético al 5%. Anote
el resultado.

Reacciones químicas

Ninhidrina: A un ml de albúmina diluida agréguele un ml de solución ninhidrina. Caliente el tubo cuidadosamente hasta que
observe el primer cambio. Reporte el resultado. Precaución: al calentar un líquido en un tubo de ensayo, incline el tubo
dirigido hacia donde no haya nadie, acercando y alejando el tubo de la llama, con mucho cuidado, no permita que hierva
fuertemente.

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Biuret: A dos ml de albúmina diluida agréguele dos ml del reactivo de Biuret. Observe y reporte sus observaciones.

Xantoproteíca: En un tubo de ensayo coloque tres ml de albúmina sin diluir, añada un ml de ácido nítrico concentrado,
agite, caliente con cuidado y observe, deje enfriar, luego agregue gota a gota NaOH al 40%, observe. Escriba sus
observaciones.

Ensayo de azufre: En un tubo coloque dos ml de albúmina sin diluir, añada cinco gotas de NaOH al 40%, caliente
cuidadosamente (menos de un minuto). Agregue 10 gotas de solución de acetato de plomo. Escriba sus observaciones. No
arrojar los residuos al desaguadero, pregunte al auxiliar en donde se deben depositar.

Ácido glioxìlico: A dos ml de albúmina sin diluir, añada dos ml de ácido acético glacial, luego deje caer lentamente por las
paredes del tubo dos ml de ácido sulfúrico concentrado (precaución, tenga cuidado), hasta que se formen dos capas. Observe
y reporte los resultados. No arrojar los residuos al desaguadero, pregunte al auxiliar en donde se deben depositar.

6. RESULTADOS
Hacer el análisis de los resultados para cada ensayo y en cada uno dar una explicación teórica de lo sucedido.
En el caso de las reacciones químicas, empezar con la reacción correspondiente y hacer la correlación de lo
observado en el laboratorio. Escribir la bibliografía consultada.

7. BIBLIOGRAFIA
Bioquímica de Harper, Murray, manual moderno,16 ed, 2004, México

Libro multimedia de bioquímica. Santiago Valbuena, Ed Universidad de los Llanos, 2010.

http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organica/guia_9_aminoacidos.pdf

http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1020111502/1020111502.PDF

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?id=43046

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