BIOCATALISIS

Enzimas
La mayoría son

Proteínas
Biocatalizadores Que
intervienen

Incrementan la Reacciones
velocidad químicas
De los

Existen enzimas compuestas

Organismos
de ARN llamadas Ribozimas. vivos
 Enzimas La energía de activación es la mínima cantidad de
energía que se requiere para que ocurra la reacción.

Aceleran la velocidad
de las reacciones
Mediante la

Disminución de la
energía de activación
de la reacción
 Actividad enzimática
es
Directamente
proporcional Determinación Cantidad sustrato consumido
Por medio de (producto formado)/unidad
A su concentración de tiempo
Velocidad de la
reacción que Se debe expresar en
cataliza Unidades Internacionales
(UI) de actividad enzimática

Se recomienda al Katal como # moles de sustrato

medida de la actividad enzimática transformado/minuto
1 Katal = 60 UI
 Distribución
En la células
Si sólo se
encuentran en el Organelas
citosol
cito sol se (ejm)
conocen como mitocondrias
Uniloculadas
Si presentan un porcentaje en citosol
TGP ( transaminasa y otro en organelas son Bilobuladas
glutámico pirúvica )
LDH ( láctato
deshidrogenasa ) TGO transaminasa glutámico oxalacetica 60% en citoplasma 40 % en
mitocondria
Malato deshidrogenasa (MDH 50 % en citoplasma y 50 % en mitocondria
 Enzimas plasmáticas

Enzimas plasmo específicas Enzimas secretadas o Enzimas celulares o

exocitoenzimas endocitoenzimas
Sintetizadas en
determinados tejidos , pero Secretadas por glándulas o Su lugar de acción es en la
su acción es en el plasma tejidos especializados , su misma célula que la
lugar de acción está alejado sintetiza
Complejo protrombínico,
lipoproteínlipasa, Amilasa, lipasa, tripsina Ubicuas Organoespecíficas
plasmológeno

Enzimas de Enzimas del ciclo

glicólisis de la úrea
 Enzimas Séricas Hepáticas
Transaminasas Gammaglutamiltranspeptidasa Fosfatasa Alcalina

 Se encuentra en
riñón, hígado, bazo y  Fuentes mas
 Catalizan reacciónes pulmón importantes hígado,
de transaminación  Valores normales huesos e intestino
 TGO y TGP difieren en ambos  En crecimiento los
 Aumentan en sexos valores son altos por
enfermedades  Aumenta en actividad
hepáticas , hepatitis hepatobiliopatias , osteoblastica , como
víricas y tóxicas procesos en el embarazo (III
obstructivos o trimestre)
neoplásicos
Enzimas Séricas Pancreáticas
Amilasa Lipasa sérica

 El aumento de estas enzimas en plasma y orina apoya una

fuerte exististencia de lesión pancreática ( pancreatitis
aguda )
 Las principales causas de pacreatitis son enfermedades de
las vías biliares y el alcoholismo crónico.
 La amilasa salival proviene también de otro órganos como
trompas de Falopio, ovarios, glándulas salivales , intestino ,
pulmón , próstata e hígado , por lo tanto su aumento
puede indicar un proceso inflamatorio en éstos.
 La lipasa también es producida en intestino, faringe riñon y
bazo, por lo que su aumento también está relacionado a
procesos inflamatorios en estos.
 Enzimas séricas en infarto de Miocardio
Creatinina
Lactato Deshidrogenasa
Fosfoquinasa

 En individuos sanos la
actividad total de la CK en  En el infarto la
suero se compone de CK-MM alteración que se
 En el infarto es la importancia manifiesta es el
la actividad de la CK-MB. aumento de LDH1,
 Ayudan a reconocer antes de los de LDH
precozmente reinfartos total.
 El aumento de la CK también
se da en esfuerzo físico,
heridas musculares, dalo
hipoxido
 Enzimas
Factores que modifican
la actividad enzimática

Tiempo de
pH del medio reacción

Concentración Efecto de
de la enzima inhibidores y
activadores

Temperatura Fuerza iónica

Concentración
del medio
del sustrato
 Enzima
proteolítica
Enzimas Código enzimático:
3.4.23.1
es

Acción
hidrolítica Pepsina
La pepsina, es una
endopeptidasa, hidroliza
enlaces peptídicos situados Sobre
al lado amino de Phe, Tyr,
Trp, Asp, Glu y Leu. No actúa Proteínas
si el residuo anterior es Pro.
Ya que rompen

Enlaces
peptídicos

La pepsina, se forma a partir de un precursor inactivo, el

pepsinógeno (es un zimógeno o proenzima), que se almacena
en las células del estómago y activa en medio ácido, ya que
remueve un péptido bloquedor de su amino terminal extremo.
 Ovoalbúmina
584
Constituida
Proteína aminoácidos
globular
presente Peso
64500 g/mol
Molecular
Altas Huevo
concentraciones fresco PI 4.6
en
La desnaturalización de la ovoalbúmina se logra
Clara de Solución viscosa, hirviendo el huevo, se extrae la clara, se licua
huevo ligeramente con agua destilada, y se obtiene la solución de
ovoalbúmina por filtración.
opalescente
 1

Evaluación de los factores que afectan la actividad

enzimática
(Parar video hasta Práctica II)

Ingrese al
siguiente link
https://www.youtube.com/wat
ch?v=aXgqmb_o_pI&t=0s
 Efecto del pH sobre la
actividad enzimática

Enzimas
Carboxilo poseen

Amino Por ejemplo

Grupos químicos Se altera su
Tiol ionizables carga eléctrica
En sus
Imidazol
Cadenas laterales De acuerdo al
de sus aminoácidos pH del medio
pH óptimo
Nota: La conformación de las enzimas depende de sus cargas
eléctricas, por lo que habrá un pH en el cual la conformación será la
mas adecuada para la actividad catalítica (pH óptimo).
 Efecto del pH sobre la
actividad enzimática

Pepsina Tripsina Lisozima pH Optimo

Donde se produce
Velocidad inicial
(Nmol/min)

Mayor velocidad de
reacción enzimática
Por lo tanto

Mayor actividad
enzimática
 Efecto del pH sobre la velocidad
Experimento 1
Procedimiento
de una reacción enzimática
a) Preparar 5 tubos de prueba de acuerdo al siguiente cuadro.
1 2 3 4 5
Solución de ovoalbúmina 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL
HCl 1.0 N 2.0 mL 0.5 mL 0.0 mL 0.0 mL 0.0 mL
Na2CO3 10% 0.0 mL 0.0 mL 0.0 mL 0.5 mL 2.0 mL
Agua destilada 0.0 mL 1.5 mL 2.0 mL 1.5 mL 0.0 mL

1 2 3 4 5
 Efecto del pH sobre la velocidad
Experimento 1
Procedimiento
de una reacción enzimática
b) En 5 tubos pequeños, medir 0.3 mL
de una solución de pepsina al 1%. d) Agregar rápidamente a cada uno
de los 5 primeros tubos, los 0.3 mL
de la solución de pepsina que se
1 2 3 4 5 encuentra en los segundos tubos.

c) Preincubar los 10 tubos en baño e) Mezclar y continuar la

maría a 37 oC por 5 minutos. incubación a 37 oC por 10 minutos.
Observar cuidadosamente los
5 minutos tubos antes y después de agregar
la enzima.

10 minutos
 Efecto del pH sobre la velocidad
Experimento 1 de una reacción enzimática
Resultados
a) Expresar el aclaramiento (la actividad enzimática) b) Determinación del pH con papel indicador universal.
de cada uno de los tubos, con 0 – 5 cruces al final
de 1, 5 y 10 minutos.

1 2 3 4 5

1 minuto

1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
pH calculado 0.54
5 minutos
pH práctico 1 - - -
1 minuto 4 5 3 2 1
1 2 3 4 5 Aclaramiento 5 minutos 5 5 3 2 1
10 minutos 5 5 3 2 1
10 minutos
El pH óptimo de la pepsina es: ………………………………………..
 Efecto del pH sobre la velocidad
Experimento 1 de una reacción enzimática
Cálculos
a) Haga el calculo teórico de pH de cada tubo, y
compruebe con papel indicador el pH de todos los tubos.

Tubo 1

𝑉 1 𝑥 𝐶 1=𝑉 2 𝑥 𝐶 2 𝐴𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐹𝑢𝑒𝑟𝑡𝑒

2 𝑚𝐿 𝑥 1 𝑁=7.0 𝑚𝐿 𝑥 𝐶 2 𝑝𝐻 =− log ⁡¿
𝐶 2=0.286 𝑁 𝑝𝐻 =− log ⁡[0.286]
𝐶 2=0.286 𝑀 𝑝𝐻 =0.54

Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

 Efecto del pH sobre la velocidad
Experimento 1 de una reacción enzimática
Resultados
Construya en Microsoft Excel una grafica 6
con los resultados obtenidos colocando
en el eje X el pH y en el eje Y la actividad 5

Actividad Enzimática
enzimática (aclaramiento).
4

0
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

pH
 2

Efecto del concentración de la enzima sobre

la velocidad de una reacción enzimática

Ingrese al
siguiente link
https://www.youtube.com/wat
ch?v=aXgqmb_o_pI&t=566s
 Influencia de la concentración de la
enzima sobre la velocidad de reacción

Aumento [E]
Velocidad inicial

Aumenta
(nmol/min)

proporcionalmente
Velocidad
enzimática

Concentración de enzima
(µg/mL)
 Efecto del concentración de la enzima sobre
Experimento 2
Procedimiento
la velocidad de una reacción enzimática
a) Preparar 4 tubos de prueba de acuerdo al siguiente cuadro.
1 2 3 4
Solución de ovoalbúmina 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL
HCl 1.0 N 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Agua destilada 1.5 mL 3.5 mL 4.2 mL 4.2 mL

1 2 3 4
 Efecto del concentración de la enzima sobre
Experimento 2
Procedimiento
la velocidad de una reacción enzimática
b) Preincubar lo siguiente en 4 tubos pequeños

1 2 3 4 d) Agregar rápidamente a cada

1 2 3 4 Pepsina 1 % uno de los 4 primeros tubos,
preincubada 3.0 mL 1.0 mL 0.3 mL 0.0 mL
las soluciones de pepsina de
Pepsina 1% los 4 segundos tubos.
hervida 0.0 mL 0.0 mL 0.0 mL 0.3 mL

c) Preincubar los 8 tubos en baño maría

a 37 oC por 5 minutos. e) Mezclar y continuar la
incubación a 37 oC por 10 minutos.
5 minutos Observar cuidadosamente los
tubos antes y después de agregar
la enzima.

10 minutos
 Efecto del concentración de la enzima sobre
Experimento 2
Resultados
la velocidad de una reacción enzimática
a) Expresar el aclaramiento (la actividad enzimática) de cada uno
de los tubos, con 0 – 5 cruces al final de 1, 5 y 10 minutos.

1 2 3 4

1 minuto
1 2 3 4

1 2 3 4 1 minuto 4 2 1 0

Aclaramiento 5 minutos 5 3 1 0
5 minutos

10 minutos 5 4 1 0
1 2 3 4
3mg
10 minutos
 Efecto del concentración de la enzima sobre
Experimento 2
la velocidad de una reacción enzimática
Cálculos
Calcule la concentración de la pepsina en cada uno de los tubos en miligramos por tubo.

Solución pepsina 1%

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

1g Pepsina ----- 100 mL
X ----- 3 mL

X = 0.03 g = 30 mg
 Efecto del concentración de la enzima sobre
Experimento 3
la velocidad de una reacción enzimática
Resultados
Construya en Microsoft Excel una grafica
con los resultados obtenidos colocando 6
en el eje X el [E] y en el eje Y la actividad

Actividad Enzimática
enzimática (aclaramiento). 5

0
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

[E]
 3

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

 Efecto de la temperatura
sobre la actividad enzimática
Reacciones Reacciones
químicas enzimáticas

Por cada 10oC Siguen esta regla

de incremento hasta cierto punto
Ya que a

Velocidad de Cierta temperatura,

la reacción se se desnaturaliza por
duplica el calor https://www.youtube.com/watch?v=IoDEjeRZ0xE

La temperatura altera la conformación de las enzimas, por lo que

habrá una temperatura en la cual, la conformación será la mas
adecuada para la actividad catalítica (temperatura óptima).
 Efecto de la temperatura sobre la
Experimento 3
velocidad de una reacción enzimática
Procedimiento
a) Preparar 4 tubos de prueba de acuerdo al siguiente cuadro.
1 2 3 4
Solución de ovoalbúmina 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL 5.0 mL
HCl 1.0 N 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Agua destilada 1.5 mL 1.5 mL 1.5 mL 1.5 mL

1 2 3 4
 Efecto de la temperatura sobre la
Experimento 3
Procedimiento
velocidad de una reacción enzimática
d) Agregar rápidamente a cada uno de los 4 primeros
b) En 4 tubos pequeños, medir 0.3 mL de tubos, las soluciones de pepsina de los 4 segundos tubos.
pepsina al 1%

2
1

4
2
1 2 3 4 3 4

37 oC
100 o C

c) Preincubar los 8 tubos por 5 minutos e) Mezclar y continuar la incubación a la temperatura

a las siguientes temperaturas: correspondiente por 10 minutos. Observar cuidadosamente
5 minutos los tubos antes y después de agregar la enzima.
1 1
1 2
2 2
3 4 10 minutos
3 4 3 4
37 oC
100 oC
37 oC
100 o C

0 oC 20 oC 37 oC 92 oC 0 oC 20 oC 37 oC 92 oC
 Efecto de la temperatura sobre la
Experimento 3
Resultados
velocidad de una reacción enzimática
a) Expresar el aclaramiento (la actividad enzimática) de cada uno
de los tubos, con 0 – 5 cruces al final de 1, 5 y 10 minutos.

1 2 3 4

1 minuto
1 2 3 4

1 2 3 4 1 minuto 1 1 4 1

Aclaramiento 5 minutos 1 2 4 1
5 minutos

10 minutos 1 3 5 1
1 2 3 4

10 minutos
 Efecto de la temperatura sobre la
Experimento 2
velocidad de una reacción enzimática
Resultados
Construya en Microsoft Excel una grafica 6
con los resultados obtenidos colocando
en el eje X la temperatura y en el eje Y la 5

Actividad Enzimática
actividad enzimática (aclaramiento).
4

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Temperatura (oC)
 Ensayo de actividad
Simulador Virtual enzimática

Ingresar aquí

http://biomodel.uah.es/lab/abs/activ_enz.htm#
 Ensayo de actividad Ramnosil
Simulador Virtual enzimática glucosidasa
 Ensayo de actividad Ramnosil
Simulador Virtual enzimática glucosidasa
En este simulador o laboratorio virtual podemos explorar cómo la actividad de una enzima varía dependiendo de las condiciones del
medio en el que se encuentra. La enzima que vamos a estudiar es la 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidasa, EC 3.2.1.168, de Actinoplanes
missouriensis, y está contenida en la muestra del ensayo.

El objetivo es encontrar las condiciones óptimas de pH y temperatura para esta enzima.

Procedimiento

Desplaza los controles para elegir un pH y una temperatura para el

ensayo.

Ve pulsando, en orden, los botones para añadir los componentes de la

reacción a la cubeta del ensayo.
El botón “añadir sustrato” vaciará antes la cubeta. El botón “añadir
muestra” iniciará la incubación.

Una vez se haya desarrollado el color, pulsa en el espectrofotómetro el

botón para medir la absorbancia y anota su valor.

Modifica de forma sistemática el pH o la temperatura. Primero evalué

diferentes pH con un misma temperatura y luego diferentes
temperaturas a un mismo pH. Anote cada valor de absorbancia en tu
cuaderno de trabajo o en la tabla de la derecha.
 Ensayo de actividad Ramnosil
Simulador Virtual enzimática glucosidasa
1.2

Resultados 1.0

Absorbancia
Construya en Microsoft Excel una grafica 0.8
Temperatura: 55 oC
con los resultados obtenidos colocando 0.6

en el eje X el pH o temperatura y en el 0.4

pH óptimo: ………
eje Y la absorbancia. 0.2

0.0
0 2 4 6 8 10 12 14

pH
1.2

1.0

Absorbancia
0.8

0.6
pH: 7
0.4

0.2 Temperatura óptima: …..

0.0
10 20 30 40 50 60 70 80 90

Temperatura oC