Tema 3 Transcripción Genética

BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA
José Pedro Vaqué, vaquej@unican.es

BMC_PARTE 1:EXPRESIÓN GENÉTICA Y ORGANIZACIÓN
Capítulo 1: Secuencia del DNA y organización del genoma.
Estructura del DNA structure. Genoma y cromosomas. Organización del genoma de eucariotas: intrones,
exones y DNA repetitivo. Empaquetamiento del DNA. EL nucleosoma. Condensación de la cromatina,
centrómeros y telómeros.
C. 1: Estructura del material

genético.
Capítulo 2: Replicación y reparación del DNA.
Principios generales de la replicación. DNA polimerasas. Otras enzimas y factores implicados.
Replicación del DNA en Procariotas y en Eucariotas. Activaciópn dela replicación. Telómeros.
Reparación del DNA: Agentes, tipos de lesiones y mecanismos.

genético.
C. 2: Cómo la información genética

se transmite y repara,
Chapter 3: Transcripción génica
Tipos funcionales de RNA. Transcripción por la RNA polimerasa II. Genes transcritos por la RNA Pol II.
El promotor. Inicio, elongación y terminación de la transcripción. Procesamiento del pre-mRNA. Splicing.
Transcripción a cargo de la RNA polimerasa I. Procesamiento del pre-rRNA. Transcripción a bargo de la
RNA polimerasa III.

genético.
C. 2: Cómo la información genética

se transmite y repara.
C. 3: Cómo se transcribe la
información para formar proteínas.
LA TRANSMISION GENÉTICA DEL DNA
Capítulo 3: La transcripción.
LA TRANSMISION GENÉTICA DEL DNA
REPLICACIÓN
NUCLEOTIDE
NUCLEOTIDE SEQUENCE
(DNA)
NUCLEOTIDE TRANSCRIPCIÓN
NUCLEOTIDE SEQUENCE
(mRNA)
AMINO-ACID
TRADUCCIÓN
AMINO-ACID-SEQUENCE
(PROTEIN)
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GENÉTICA
CLASE 3.1.
LA MISMA SECUENCIA DE DNA, MISMOS GENES, PERO EXPRESADOS DE FORMA DIFERENCIAL
(TRANSCRIPCIÓN)
Cambios en la
expresión
genética
CAPÍTULO 3: LA TRANSCRIPCIÓN
3.1 Mecanismos generales de transcripción y RNA-polimerasas.

3.2 Transcripción por la RNA polimerasa II
3.3 Procesamiento de los pre-mRNAs
3.4 Transcripción por la RNA polimerasa III
3.5 Transcripción por la RNA polimerasa I
TRANSCRIPCIÓN DEL RNA
REPLICATION
NUCLEOTIDE SEQUENCE
(DNA)
TRANSCRIPTION
NUCLEOTIDE SEQUENCE
(RNA)
TRADUCTION
AMINO-ACID-SEQUENCE
(PROTEIN)
PRINCIPALES TIPOS DE RNA

mRNA: RNA mensajero (proteinas)
rRNA: RNA ribosomal (ribosomas)
tRNA: RNA transferencia (traducción)
THYMIDE; T (DNA)=URACIL; U (RNA)
ncRNA: RNA no codificante (regulación)
TRANSCRIPCIÓN
3 RNA POLIMERASAS EN CÉLULAS EUCARIOTICAS: I, II & III
PRINCIPALES TIPOS DE RNA

mRNA: RNA mensajero (proteinas)
rRNA: RNA ribosomal (ribosomas)
tRNA: RNA transferencia (traducción)
THYMIDE; T (DNA)=URACIL; U (RNA)
REACCIÓN CATALIZADA POR LAS RNA POLIMERASAS
RNA Template DNA strand
U A
G C
PPi
Incluyendo un ribonucleoside
5’-triphosphate
Capítulo 3: La transcripción. “Bioquímica básica de Marks. Un enfoque clínico”. McGraw-Hill Interamericana, 2006.
TRANSCRIPCIÓN: EL MECANISMO
• Replicación y transcripción son muy similares en:
a) El mecanimsmo químico
b) Dirección de síntesis 5’ → 3’
c) Requiere un DNA molde
• Replicación y transcripción son diferentes en:
a) La Transcripción NO requiere un cebador

b) Los fregmentos de RNA transcritos son más cortos que los fragmentos de
DNA replicados.
c) Sólo 1 de las dos hebras de DNA se utiliza como molde para la transcripción
de cada gen.
Requiere:
a) RNA polimerasa
b) Loshe 4 ribonucleótidos tri-fosfato (ATP, GTP, UTP,CTP): el fosfato alfa
permanece en la estructura fial del RNA y se libera un pirofosfato (PPi)
c) EL molde de DNA se copia en dirección 3’→5’
•Reacción: (NMP)n + NTP → (NMP)n+1 + PPi
Capítulo 3: La transcripción. RNA RNA elongado
ALGUNAS PROPIEDADES DE LA TRANSCRIPTCIÓN
1) Hebra de DNA codificante y molde
DNA 5’AAGTATTGATGGTTCCATTT  Hebra que NO se copia, denominada codificante

3’TTCATAACTACCAAGGTAAA  Hebra copiada, es el molde, denomina NO codificante
mRNA 5’AAGUAUUGAUGGUUCCAUUU Las secuencias 5’ y 3’ del mRNA son No

traducidas (untransaletd) (5’UT, 3’ UT, UTR)
5’ UT
Met-Val-Gln-Phe
2) Numeración de las secuencias de los genes
TSS = Transcription Start Site = +1:

=Es el primer nucleótido transcrito Hace referencia a un nucleótido
Hace referencia a un (nt) situado 3’ respecto del TSS
nucleótido (nt) situado 5’ “+”
respecto del TSS “-”
-10 +1 +10
DNA 5’ T A T A A T G A G C A C A C C C T T T C C C A 3’ Hebra codificante

3’ A T A T T A C T C G T G T G G G A A A G G G T 5’ Hebra molde
mRNA: 5’ A C C C U U U C C C A 3’ secuencia de RNA transcrito
3) Asimetría
Agunos RNAs son sintetizados en base a una hebra de DNA mientras que otros RNAs
utilizan la hebra contraria de forma que se sintetizan en direcciones opuestas.
Tránscritos de RNA
5’ 3’
DNA
3’ 5’
Tránscritos de RNA
proteina
RNA
Cada una de las hebra de DNA NO
DNA codifican para la misma proteìna.
RNA
proteina
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/4609
3) Asimetría
4) Diferencias en transcripción entre procariotas & eucariotas
POLICISTRÓNICO: UNA MOLECULA DE mRNA QUE PUEDE SER TRADUCIDA A VARIAS PROTEINAS (ORFS)
TIPOS DE RNA
RNAs implicados en la síntesis de proteínas
• Mensajero ó mRNA (3-5% del RNA total celular) = TRADUCIDOS A PROTEÍNAS

• Ribosomal ó rRNA (80-90%)
• Transferencia ó tRNA
RNAs implicados en el procesamiento y modificación post-transcripcionales

• Small nuclear, snRNA
• Smal nucleolar, snoRNA
• Small citoplasmic RNA, scRNA (7S RNA)
• RNA Telomerasa
RNAs implicados en el silenciamiento génico (silencing)
•Micro, miRNA
•Piwi, piRNA
•Long noncoding, lncRNA (>200 nt. Reguladores de la transcripción)
TIPOS DE RNA Y TRANSCRIPCIÓN
DNA
lncRNA
RNA pol I ...rRNA
TRANSCRIPTION RNA pol II...mRNA NUCLEUS
RNA pol III ..tRNA
snRNA
Pre-mRNA
PROCESAMIENTO snoRNA
mRNA
CYTOPLASM
miRNA
rRNA scRNA
tRNA mRNA
piRNA
TRADUCCIÓN
ribosomas
PROTEINAS

ANATOMÍA DE LA TRANSCRIPCIÓN A CARGO DE LA RNA POLIMERASA II
1. DNA:
Contiene seciuencias reguladoras (denominadas elementos) involucradas

en al controls de la expression genética.
BRE: ELEMENTO QUE ES RECONOCIDO POR TFIIB (B).

TATA BOX: UNIÓN DE LA TATA BINDING PROTEIN (TBP)
INR: ELEMANTO INICIADOR (CONTIENE +1)
ELEMENTOS DEL PROMOTOR DOWNSTREAM DE +1: DCE, MTE & DPE
2. PROTEINAS:
Se denominan Factores de Transcripción Generales y forman el

COMPLEJO DE PRE-INICIACIÓN
A TBP: TATA BINDING PROTEIN. SE UNE A LA TATA BOX /TAFS & TFIIB .
TFIID: COMPLEJO DE PROTEÍNAS TAFs (TBP ASSOCIATED FACTORS), SE
UNE A TBP Y EN DCE, MTE & DPE.
B TFIIB: SE UNE A TBP, RNA-POL II Y EN BRE.
C RNA-POL II: RNA POLIMERASA II.
D TFIIE: RECLUTA OTRAS PROTEÍNAS (RNA-POL)/ Y DESENROLLA DNA?.
TFIIH: HELICASA & KINASA. FORMADA POR 2 SUBUNIDADES: XPD & XPB
TB. INVOLUCRADA EN TRANSCRIPTION COUPLED REPAIR (CAP. 2).
FOSOFRILA SECUENCIAS REPETIDAS EN EL C-TERMINAL DE LA
Cooper & Hausman The Cell, 5e, 2010
RNA-POL II (SIGUIENTE DIAPOSITIVA).
UNA VEZ EL COMPLEJO DE PRE-INICIACIÓN ESTÁ ENSAMBLADO, TFIIH

FOSFORILA UNA SERIE DE SECUENCIAS REPETIDAS EN EL DOMINIO THE
C-TERMINAL DE LA RNA-POL II. ESTO PRODUCE LA LIBERACIÓN DE LA
RNA-POL II. DEL COMPLEJO DE FORMA QUE INICIA LA TRANSCRIPCIÓN.
LA SECUENCIA REPETIDA DEL DOMINIO C-TERMINAL DE LA RNA POL II:
Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser: LA a Ser-5 es Fosforilada

Transcription start site (TSS)

Señal de Poliadenilación
exones AATAAA
DNA +1
Secuencias reguladoras=
5’ 3’
Promotor
ATG TAG
TGA Región 3’ UT
Región 5’ UT intrones
TAA
Región reguladora Región transcrita
mRNA
5’NT Codificante 3’NT = 3’UT
RNA POL II (RPII) TRANSCRIPTION START SITE Y CENTRO PROMOTOR
Alberts et al. Figure 6-17 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Centro promotor
• Incluye la TATA box, el B Recognition Sequence (BRE), el iniciador (Inr) y el
Downstream Promoter Element (DPE)
• Es la region que une los Factores Generales; Lugar de la cromatina donde se

ensambla el Complejo Iniciador de la Transcripción con la RNA pol II
• No todos los genes transcritos por la RNA pol II contienen todos estos elementos
INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN: REGIÓN REGULADORA Y FACTORES DE
TRANSCRIPCIÓN (TFs)
1. Los TFs abren o “desempaquetan” la cromatina y permite la formación del
complejo de Pre-Iniciación ( CAPÍTULO 4)
2. Se forma el Complejo de Pre-Iniciación
3. Reclutamiento de la RNA pol II e inicio de la transcripción.
FACTORES DE TRANSRIPCIÓN ESPECÍFICOS TFIID

TFIIB
ACTIVADORES Ó SUPRESORES FACTORES GENERALES DE
TRANSCRIPCIÓN TFIIF
(Algunos modifican histonas) TFIIE
TFIIH
RNA pol II
Exon 1 Exon 2
GGGCGG TGTGGT CACGTG BRE TATA
-30 +1
SECUENCIAS ACTIVANTES Ó REPRESORAS CENTRO PROMOTOR O BASAL
(CORE PROMOTER)
REGIÓN REGULADORA REGION TRANSCRITA
Chapter 3: RNA expression

CLASE 3.2.

PROCESAMIENTO DEL mRNA EN CÉLULAS EUCARIOTAS
5´capping: Se incorpora Guanosina tri-fosfato (GTP) (5´to 5´)

La Guanosina los 2 primeros nucleótidos son metilados, formando
7-Metilguanosina y los otros 2 nucleotidos metilados en el C2 de la ribosa
3´poliadenilación: La Terminación se produce con una escisión & posterior adición de

Cooper & Hausman The Cell, 5e, 2010 una cola de poli-A al RNA recienetemente transcrito.
AAUAAA: Señal de poliadenilación

CA: Señal de inicio de la poliadenilación
U- ó GU- Elemento con secuencia rica en esos nucleótidos
PROCESAMIENTO DEL mRNA EN CÉLULAS EUCARIOTAS: 5ïCAPPING
5´capping: Se incorpora Guanosina tri-fosfato (GTP) (5´to 5´)

La Guanosina los 2 primeros nucleótidos son metilados, formando
7-Metilguanosina y los otros 2 nucleotidos metilados en el C2 de la ribosa
CH3 CH3
Alberts, Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Funciones de 5’ Cap:
• Portege el mRNA de la degradación por nucleasas
• Facilita la union del mRNA al ribosoma para iniciar la traducción (union de eIF4E)
• Sistema de 3 enzimas:
5’ fosfatasa + guanilato transferasa + metil-transferasa
PROCESAMIENTO DEL mRNA EN CÉLULAS EUCARIOTAS: 3ïPOLIADENILACIÓN
una cola de poli-A al RNA recienetemente transcrito.

CH3 CH3


ALGUNOS mRNAS EUCARIOTAS (I.E., HISTONES) NO SE COFIFICA!
NO TIENEN COLA DE POLI-As. (NO EXISTE UN “TTTTT...” EN EL ÚÑTIMO EXÓN)
LOS 3 GENES MUY CERCANOS, PROTEÍNAS CASI IDÉNTICAS. PERO DISTINTAS POLI-As

ALGUNOS mRNAS EUCARIOTAS (I.E., HISTONES) NO SE COFIFICA!
NO TIENEN COLA DE POLI-As. (NO EXISTE UN “TTTTT...” EN EL ÚÑTIMO EXÓN)
REGULAR: ESTABILIDAD Y TRADUCCIÓN DEL MRNA
PROCESAMIENTO DEL mRNA EN CÉLULAS EUCARIOTAS: DEGRADACIÓN
Exosoma de RNA
(Complejo que incluye RNAsas)
-La longitud de la cola de poli-As es

importante para la estabilidad del mRNA.
-Puede haber secuencias en la región 3’UT

que desestabilizan el mRNA
EL DESCUBRIMIENTO DE LOS INTRONES
RNA SPLICING: SELECCIÓN DE LOS EXONES DEL PRE-MRNA
PyPy
TODOS los intrones

comienzan con GU TODOS los intrones
terminan con AG
PyPy
PyPy
SPLICEOSOMA
snRNPs Splicing
snoRNPs
RiboNucleoProteínas, RNPs scRNPs
Ribosomas
Telomerasa
• snRNPs U1, U2, U5, U4/U6 forman el SPLICEOSOMA, que realiza el proceso de
splicing
• U snRNAs (uracil-rich small nuclear RNAs):
• 100 - 200 nts

• Sytetizados fundamentalmente por la RNA pol II (excepto U6)
• Se unen a otras 6-10 proteínas para formar los snRNPs (small nuclear
ribonucleoproteins)
ENSAMBLANDO EL SPLICEOSOMA
Lehninger Principios de Bioquímica", 4ª ed. Nelson, D.L. y Cox, M.M. Omega. 2006.
1. Unión de U1 snRNP U1 al
splicing site (SS) en 5’
2. Unión de U2 snRNP al branch
point.
point.
3. Unión de U4/6 + U5 snRNPs
para formar el spliceosoma
spliceosoma
point.
3. Unión de U4/6 + U5 snRNPs
para formar el spliceosoma
4. Lariat: Es un enlace formado
entre la A del branching point y la
G del sitio de splicing 5’
5. Escisión de intrones y
ligación de exones
CLASE 3.2.

TRANSCRIPCIÓN A CARGO DE LA RNA POL III
GENES TRANSCRITOS POR LA RNA POL III CUIDADO!!: U1, U2, U3, U4 y U5 snRNAs
son sintetizados por la RNA pol II
CUIDADO!!: 28s, 18s and 5.8s rRNAS son
sintetizados por la RNA pol I
• Los elementos se sitúan en 3’ del TSS
(“promotor intragénico”)
• Participa la TBP pero NO hay TATA box

• Participa la TBP pero NO hay TATA
box
• No TFIIIA
• Los elementos se sitúan en 5’

del TSS
• Participa la TBP y SI hay TATA
box
• No TFIIIA, ni TFIIIC

box
• No TFIIIA

del TSS
box

box
• No TFIIIA

del TSS
box
ESTRUCTURA DE LOS tRNAs
Figure 6-52 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
PROCESAMIENTO DE LOS tRNAs
1. Escisión de los nucleótidos en

extremos 5’ y 3’.
2. Adición de CCA en el extremos 3’.
3. Modificación extensiva de bases
dihidrouridina, pseudouridina,
metilguanosina, etc
4. En algunos tRNAs, se remueve un
* intrón.
*Producido por
la ribozima:
RNAsaP
Cooper & Hausman The Cell, 5e, 2010 Fig 7.44
PROCESAMIENTO DE LOS tRNAs
1. Escisión de los nucleótidos en

extremos 5’ y 3’.
2. Adición de CCA en el extremos 3’.
3. Modificación extensiva de bases
dihidrouridina, pseudouridina,
metilguanosina, etc
4. En algunos tRNAs, se remueve un
* intrón.
*Producido por
la ribozima:
RNAsaP
Cooper & Hausman The Cell, 5e, 2010 Fig 7.44 NH2-
(Removida de G)
DO NOT LEARN STRUCTURES

CLASE 3.3.

TRANSCRIPTION A CARGO DE LA RNA POL I
GENES TRANSCRITOS POR LA POL

5.8S, 18S, 28S rRNA
“Selectivity factor 1” = 4 subunidades, TBP es uno de ellos
rDNA gene
Pre-rRNA
• Se forman grandes complejos de 12-17 subunidades.

• Comparten hasta 9 subunidades, algunas homólogas a 4 subunidades de la
RNA polimerasa bacteriana
GENES TRANSCRITOS POR LA RNA POL I

5.8S, 18S, 28S rRNA
-Los genes de rRNA están repetidos (~200 por genoma

haploide) y dispuestos en tándem en el brazo p de los
cromosomas acrocéntricos: 13, 14, 15, 21 y 22
-Espacialmente, las regiones rDNA de estos

cromosomas se agrupan en el nucleolo BIOLOGÍA
CELULAR
-Excepto los rRNA 5s, que se clusteriza en el crom. 1
-Cada gen rRNA tiene un tamaño de ~43 kb e incluye

una región transcrita y una región.
-Muy Conservado a lo largo de la evolución.


5.8S, 18S, 28S rRNA
rRNAs
RNAS INVOLUCRADOS EN LA SÍNTESIS DE RNAPROTEÍNAS

• mRNA (3-5% RNA TOTAL CELULAR)
• rRNA (80-90%)
• tRNA
PROCESAMIENTO DE LOS rRNAs
5.8S, 18S, 28S rRNA
1. Escisión endonucleolitica 2. Modificaciones de bases & nucleosidos
snoRNAPs son necesarias para

Figure 6-42 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
la modificación de las base
LOS RIBOSOMAS SE ENSAMBLAN EN EL CITOPLASMA.
snRNPs ENTRAN EN E NUCLEO PARA REALIZAR SU FUNCIÓN
snRNPs
50 proteíns
hnRNPs snoRNPs in 60s
Splicesosomes
Nucleolus
33
Proteíns in
Proteíns 28s
PBP
Ribosomes
snRNAs
mRNAs
(hnRNAs = heterogeneous nuclear RNAs = pre-mRNAs)
RESUMEN: TIPOS DE RNAs & RNA POLiMERASaS
mRNAs Messenger RNAs. Codifica proteínas RNA pol II
RNA pol I
rRNAs RNAs ribosomales. Estructura de los ribosomas
RNA pol III (5sRNA)
RNAs de transferencia. Adaptadores de amino-ácidos

tRNAs RNA pol III
al mRNA en la traducción.
RNAsnNo-codificantes
Small RNAs. Múltiples funciones, incluyendo el RNA pol II

snRNAs
splicing del pre-mRNA. RNA pol III (U6)
RNA pol II
snoRNAs Small nucleolar RNAs. Procesamiento de los rRNAs.
RNA pol II
miRNAs MicroRNAs. Regulación de la expresión genética.
Other non- RNA pol II

coding RNAs: Muchos de ellos soin función conocida, pero muy
probablemente implicados en el control de la
lncRNA scRNAs, expresión genética.
piRNAs RNA pol III (scRNA)

3.6 Ejemplos de aplicación a la práctica clínica.
CARACTERIZACIÓM MOLECULAR Y DIAGNÓSTICO
MÉTODO
HISTOLOGIA TMA Fluorescencia Expresión Aberraciones Mutaciones

(morfología) Inmunohistoquímica (FACS, FISH) genética cromosómicas
(mRNA arrays)
WT
MUT
Una major caracterización de loss of pacientes al diagnóstico

Ayuda a
1. Clasificar las enfermedades

2. Prognosis: Agresividad (cáncer)
3. Guiar terapia
ESTUDIANDO LA EXPRESIÓN DEL mRNA: NORTHERN
NORTHERN: Homologous hybridization using
Radioactive or fluorescent probes GENOMIC DNA (About 25.000 genes in total)
mRNAs
Gen A Gen B Gen C Gen D
Probe gen A ******* ******* Probe gen D

Fluorescent or radioactive Fluorescent or radioactive
Exons gen A Exons gen D
Está el gene expresado?; Dónde?, Cuanto?, Como?

Total mRNA
Sample : 1 2 3 4 Sample: 1 2 3 4
12000 pb
10000 pb
Electroforesis
8000 pb
6000 pb
Sample: 1 2 3 4
28S
1500 pb mRNAGen A
18S
800 pb
600 pb mRNAGen D
400 pb
200 pb
100 pb
Hybrization Imagen
Gen A Cambios: Imaginadlo en células ó tejidos específicos, Cancer?

Gen D Nunca cambia. Lo podenmos utilizar para comparer
Capítulo 3: La transcripción. (HOUSEKEEPING)
ESTUDIANDO
STUDYING THE
LAEXPRESSION
EXPRESIÓN DEL
OF mRNA:
mRNA:RT-PCR
RT-PCR
NORTHERN: Homlogoous hybridization using
RT-PCR: mRNA to cDNA using
Retro-transcriptase
mRNAs

mRNAs gen A mRNAs gen D
Retrotranscription (RT)
Exons gen A (cDNA) Exons gen D
Two oligos gen A Two oligos gen D
X40 cycles
Sample: 1 2 3 4
RT-PCR Gen A
RT-PCR Gen D
Gen A Cambios: Imaginadlo en células ó tejidos específicos, Cancer?

Gen D Nunca cambia. Lo podenmos utilizar para comparer
Capítulo 3: La transcripción. (HOUSEKEEPING)
ESTUDIANDO LA EXPRESIÓN DEL mRNA: ARRAY
Retro-transcriptase
mRNA EXPRESSION ARRAYS mRNAs
Gene sets including the whole
TRANSCRIPTOME Gen A Gen B Gen C Gen D

Staining using a fluorescent probe
Exons gen A (cDNA) ******* ******* ******* *******
Fluorescent Fluorescent Fluorescentt Fluorescent
DNA control DNA problem
DNA control
+ DNA control DNA problem
DNA problem
Hybridize
Gen A Gen A + +++
Gen B Gen B +++ +
Gen C Gen C + +
Pocillo con DNA de un gen +++
Gen D Gen D +++
(Un número de moléculas constante)
ESTUDIANDO LA EXPRESIÓN DEL mRNA: ARRAY
Retro-transcriptase
mRNA EXPRESSION ARRAYS mRNAs
Gene sets including the whole
TRANSCRIPTOME Gen A Gen B Gen C Gen D

Staining using a fluorescent probe
Exons gen A (cDNA) ******* ******* ******* *******
Fluorescent Fluorescent Fluorescentt Fluorescent
DNA control DNA problema 25000 genes

HOW mRNA ARRAY STUDYES CHANGED DIAGNOSYS AND PATIENT SURVIVAL
CÓMO LA TRANSCRIPCIÓN CAMBIÓ EL DIAGNÓSTICO DEL CANCER DE MAMA
IN BREAST CANCER-I
IMPROVED SURVIVAL MOLECULAR CHARACTERIZATION
• mRNA transcriptome profiling

• Mamaprint, BluePrint
CÓMO LA TRANSCRIPCIÓN CAMBIÓ EL DIAGNÓSTICO DEL CANCER DE MAMA
• mRNA transcriptome profiling

• Mamaprint, BluePrint
ÉSTUDIOS CON PROTEÓMICA
NORTHERN: Homlogous hybridization using
WESTERN: Protein recognition
using specific antibodies
mRNAs

mRNAs
Proteínas control Translación
Proteins
Denaturalized
proteins
Anticuerpos que reconocen una proteína
SK-MEL30 293T RIVA PATIENT
S100
TUBULIN
+
ÉSTUDIOS CON PROTEÓMICA: INMUNOHISTOQUÍMICA (IHQ)
NORTHERN: Homlogous hybridization using
WESTERN: Protein recognition using
specific antibodies
IHC: Immunohistochemistry.
Hibridization of proteins with mRNAs
specific antibodies
mRNAs
Translación
Proteins
biopsy
Anticuerpos que reconocen una proteína

APLICACIÓN AL MANEJO DEL PACIENTE EN CLÍNICA

APLICACIÓN AL MANEJO DEL PACIENTE EN CLÍNICA

THERAPY:
-Anti ER: Tamoxifen, Aromatase inhibitors
-Anti PR: Anti-progestins!!.
PR participates together with ER!
CAUTION: ANTI-BABY PILLS

-AND THOSE THAT ARE TRIPLE NEGATIVES????
CAPÍTULO 3. REPASO I
TRANSCRIPCIÓN
• REALIZADA POR 3 RNA POLIMERASAS

SIEMPRE 5´-3´.
• LOS RNAs PARTICIPAN EN LA SÍNTESIS DE

PROTEÍNAS, REGULACIÓN POST-
TRANSCRIPCIONAL Y EN SILENCIAMIENTO
• La RNA-POL II, REQUIERE UNA SERIE DE

PROTEINAS QUE SE UNEN A SECUENCIAS
ESPECÍFICAS EN EL DNA O ELEMENTOS EN
TIEMPOS ESPECÍFICOS PARA INICIAR LA
TRANSCRIPCIÓN.
• UN GEN CONTIENE INTRONES

& EXONES ASÍ COMO UNA SERIE DE SEÑALES
ESPECÍFICAS PARA CONTROLAR SU EXPORESIÓN.
• LOS RNAs SE MODIFICAN POST

TRANSCRIPCIONALMENTE EN 5´(CAPPING) &
3´(POLYADENILACION) PARA INCREMENTAR SU
ESTABILIDAD
CAPÍTULO 3. REPASO II
TRANSCRIPCIÓN
• LOS RNAs SE MODIFICAN POST
TRANSCRIPCIONALMENTE PARA ELIMINAR
SECUENDIAS NO-CODIFICANTES (RNA SPLICING)
• LA RNA-POL III, TRANSCRIBE LOS RNAS 5S,

tRNA, & U6 snRNA
• LOS tRNAs, TIENEN UNA ESTRUCTURA

DETERMINADA POR SECUENCIAS HOMÓLOGAS
& ALGUNAS MODIFICACIONES EN
NUCLEÓTIDOS. INCORPORAN AMINO-ACIDOS
EN 3´.
• La RNA-POL I, TRANSCRIBE LOS RNAs 28S, 18S

& 5,8S rRNAs.
CAPÍTULO 3. REPASO III
APLICACIONES DE LA TRANSCRIPCIÓN
• CARACTERIZAR GRUPO ESPECÍFICOS DE
PACIENTES CON CÁNCER DE MAMA.
• DTEREMINAR PRONÓSTICO
• CON IMPLICACIONES DETERMINANTES EN

SUPERVIVENCIA & USO DE TERAPIA CON FINES
CURATIVOS.
CHAPTER 2: SOCRATIVE QUESTIONS
ROOM NUMBER: VQVDUSXD

Tema 3 Transcripción Genética

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BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA

José Pedro Vaqué, vaquej@unican.es

C. 1: Estructura del material

C. 1: Estructura del material

C. 2: Cómo la información genética

C. 1: Estructura del material

C. 2: Cómo la información genética

3.1 Mecanismos generales de transcripción y RNA-polimerasas.

PRINCIPALES TIPOS DE RNA

3 RNA POLIMERASAS EN CÉLULAS EUCARIOTICAS: I, II & III

PRINCIPALES TIPOS DE RNA

RNA Template DNA strand

• Replicación y transcripción son diferentes en:

a) La Transcripción NO requiere un cebador

DNA 5’AAGTATTGATGGTTCCATTT  Hebra que NO se copia, denominada codificante

mRNA 5’AAGUAUUGAUGGUUCCAUUU Las secuencias 5’ y 3’ del mRNA son No

TSS = Transcription Start Site = +1:

DNA 5’ T A T A A T G A G C A C A C C C T T T C C C A 3’ Hebra codificante

mRNA: 5’ A C C C U U U C C C A 3’ secuencia de RNA transcrito

RNAs implicados en la síntesis de proteínas

• Mensajero ó mRNA (3-5% del RNA total celular) = TRADUCIDOS A PROTEÍNAS

RNAs implicados en el procesamiento y modificación post-transcripcionales

RNAs implicados en el silenciamiento génico (silencing)

3.1 Mecanismos generales de transcripción y RNA-polimerasas.

Contiene seciuencias reguladoras (denominadas elementos) involucradas

BRE: ELEMENTO QUE ES RECONOCIDO POR TFIIB (B).

Se denominan Factores de Transcripción Generales y forman el

UNA VEZ EL COMPLEJO DE PRE-INICIACIÓN ESTÁ ENSAMBLADO, TFIIH

LA SECUENCIA REPETIDA DEL DOMINIO C-TERMINAL DE LA RNA POL II:

Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser: LA a Ser-5 es Fosforilada

Transcription start site (TSS)

Región reguladora Región transcrita

• Es la region que une los Factores Generales; Lugar de la cromatina donde se

FACTORES DE TRANSRIPCIÓN ESPECÍFICOS TFIID

REGIÓN REGULADORA REGION TRANSCRITA

Chapter 3: RNA expression

3.1 Mecanismos generales de transcripción y RNA-polimerasas.

5´capping: Se incorpora Guanosina tri-fosfato (GTP) (5´to 5´)

3´poliadenilación: La Terminación se produce con una escisión & posterior adición de

AAUAAA: Señal de poliadenilación

5´capping: Se incorpora Guanosina tri-fosfato (GTP) (5´to 5´)

Alberts, Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

AAUAAA: Señal de poliadenilación

Alberts, Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

AAUAAA: Señal de poliadenilación

Alberts, Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

AAUAAA: Señal de poliadenilación

AAUAAA: Señal de poliadenilación

REGULAR: ESTABILIDAD Y TRADUCCIÓN DEL MRNA

-La longitud de la cola de poli-As es

-Puede haber secuencias en la región 3’UT

TODOS los intrones

Cooper & Hausman The Cell, 5e, 2010

• 100 - 200 nts

3.1 Mecanismos generales de transcripción y RNA-polimerasas.

• Los elementos se sitúan en 3’ del TSS

• Los elementos se sitúan en 5’

• Los elementos se sitúan en 3’ del TSS

• Los elementos se sitúan en 5’

• Los elementos se sitúan en 3’ del TSS

• Los elementos se sitúan en 5’

Figure 6-52 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

1. Escisión de los nucleótidos en

Probe gen A * * Probe gen D