Introducción a la Biología Molecular y

Celular

Segundo Cuatrimestre
2023

ADN recombinante (Ingeniería Genética)

Omar Coso
 Cromosoma de 1,5 x 108 pares de bases, conteniendo aproximadamente 3000 genes

0,5% del cromosoma, conteniendo 15 genes

Un gen de 105 pares de bases de longitud

Promotor y regions regulatorias intrón exón

TRANSCRIPCIÓN

Transcripto primario o pre-mRNA

intrón

exón
mRNA
100.000 colonias, una de las cuales
lleva el gen de interés
 Comportamiento el DNA en solución acuosa
(invitro)

Calentamiento a 90ºC
DESNATURALIZACIÓN

Enfriamiento lento
RENATURALIZACIÓN
hebras complementarias
a 90 ºC

CONDICIONES QUE FAVORECEN LAS DESNATURALIZACIÓN DEL DNA

- Temperatura

- Soluciones concentradas de urea, formaldehído o formamida

- Baja concentración de sales (baja fuerza iónica)

- Alto contenido de pares A=T (bajo contenido de pares G=C)

 renaturalización apareamiento parcial
hebras sólo parcialmente
complementarias

desnaturalización renaturalización
=
DNA DNA de
HIBIRDACÓN
humano ratón

80% de
similitud de
secuencia

HIBRIDACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

- DNA:DNA, DNA:RNA, RNA:RNA
- Las hebras que hibridan pueden ser total o parcilamente
complementarias
- En medio líquido
- En soporte sólido donde una de las hebras está inmovilizada
- Concepto de SONDA molecular
 CONDICIONES QUE FAVORECEN LAS DESNATURALIZACIÓN DEL DNA

- Temperatura

- Soluciones concentradas de urea, formaldehído o formamida

- Baja concentración de sales (baja fuerza iónica)

- Alto contenido de pares A=T (bajo contenido de pares G=C)

 transcripción traducción

DNA RNA PROTEÍNA

retro-transcripción

duplicación
RT-PCR = reverse transcriptase PCR
3' 5' RNA
5' 3'
Primer de Transcriptasa reversa: DNA
DNA polimerasa dependeinte de
RNA

3' 5' RNA

5' 3'
Primer de cDNA
DNA
Degradación del RNA molde

3' 5' RNA

5' 3'
Primer de
DNA
cDNA
Primer de Apareamiento del segundo
DNA primer
3' 5'
5' 3'
Primer de Taq-DNA polimerasa
DNA
3' 5'

PCR
5' 3'
Vectores

Plásmidos: elementos de ADN circular que se pueden encontrar

en bacterias además del ADN “cromosómico” de la bacteria

Vectores de clonado: Son plásmidos que obviamente tienen un ORI

y además tienen al menos otros dos elementos característicos:
Un gen de resistencia a un antibiótico y un sitio único de corte para una enzima
de restriccion (o un polilinker)

Vectores de expresión: Son plásmidos similares a los Vectores de Clonado

pero con elementos adicionales como ser: promotores procarióticos
o eucarióticos contiguos a los sitios de clonado y además
ORI de replicación para células eucariotas.
 Cromosoma de 1,5 x 108 pares de bases, conteniendo aproximadamente 3000 genes

0,5% del cromosoma, conteniendo 15 genes

Un gen de 105 pares de bases de longitud

Promotor y regions regulatorias intrón exón

TRANSCRIPCIÓN

Transcripto primario o pre-mRNA

intrón

exón
mRNA
 Cromosoma de 1,5 x 108 pares de bases, conteniendo aproximadamente 3000 genes

0,5% del cromosoma, conteniendo 15 genes

Un gen de 105 pares de bases de longitud

Promotor y regions regulatorias intrón exón

TRANSCRIPCIÓN

Transcripto primario o pre-mRNA

intrón

exón
mRNA
Figure 8-18a Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Ejemplo real de resultado de PAGE/SDS
distintas proteínas y distintas cantidades de ellas

PM
Figure 4-72 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 4-72 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 4-72 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 8-38 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 1 of 4) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 2 of 4) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 3 of 4) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 8-38 (part 4 of 4) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)