TRANSCRIPCIÓN

Pablo Iturri MSc.

Biólogo Molecular
Genetista Forense
¿QUÉ VAMOS A VER HOY?

 Propiedades del ARN

 Tipos de ARN
 Transcripción
 Diferencias entre procariotas y eucariotas
 PROPIEDADES DEL ARN

1. ARN generalmente es de simple cadena y no doble como el ADN

1. Más flexible, mayor variedad de formas complejas tridimensionales
2. Se dobla y puede emparejarse molecularmente con partes de su propia cadena
2. ARN tiene ribosa en lugar de desoxirribosa (una molécula menos de oxígeno)
1. Cadena tiene extremo 5´ y 3´

3. Ribonuclétidos son A, C, G y U uracilo en lugar de Timina

4. Ribozimas - Pueden catalizar reacciones, funcionando como proteínas (ADN no)
ADN VS ARN
TIPOS DE ARN

 Dos clases generales

 Intermediarios para decodificación de genes a cadenas polipeptídicas. Proveen la información –
mensajeros
 La minoría en que el ARN es el producto final - funcionales

ARN funcional
ARN mensajero
Activos como ARN, no se transcriben.
Intermediarios en la expresión de
Pocos genes los codifican. Estables y
genes, para síntesis de proteínas
en varias copias
 Tipos de ARN

Mensajero Funcional

Codificación a RNA pequeño nuclear

De transferencia Ribosomal
proteínas snRNA

Parte de procesos de
Componentes
transcripción en
Traen el aminoácido mayores de
eucariotas, como guía
correcto al mRNA en ribosomas, quienes
de modificación o
la traducción guían ensamble entre
unir subunidades
mRNA y tRNA
splicing
TRANSCRIPCIÓN

 Síntesis de ARN
 DNA que se transcribe a RNA se llama transcripto
 Depende de la complementaridad de bases
TRANSCRIPCIÓN

 Doble hélice de ADN se separa

 Una hebra es molde para la síntesis de ARN
 Ambas hebras pueden ser molde

 Ribonucléotidos sintetizados en la célula forman la cadena

complemnetaria
 A-U, C-G por acción de la ARN polimerasa

Complementaridad y acción de unión de la

polimerasa-ácido nucleico
TRANSCRIPCIÓN

 Nucleótidos se agregan al
extremo 3’
 Templete debe estar
orientado de 3’ a 5’
 Polimerasa se mueve a
medida que se abre la doble
hélice
 El extremo 5’ del ARN se
desplaza a medida que se
cierra la burbuja de
transcripción

Secuencia de ARN es idéntica a DNA que no

fue templete, excepto por U
TRANSCRIPCIÓN

 Nomenclatura de genes hacen referencia a la no templete que es la cadena codificante

 Transcripcion es asimétrica porque sólo se copia una cadena donde un gen es usado como molde

Secuencia de ARN es idéntica a DNA que no

fue templete, excepto por U
ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIÓN

Iniciación Elongación Terminación

 Debe existir una guía que indique qué gen (segmento pequeño en comparación al genoma): el inicio y el final en
los lugares correctos
 Existen algunas diferencias entre procariotas y eucariotas
 INICIACIÓN

 Cómo encontrar el lugar correcto?

 RNA polimerasa se une a una secuencia en DNA llamada promotor que se encuentra
cerca de la región de transcripción
 El promotor es importante en la función reguladora de la transcripción de genes
 Se encuentra en la región 5’ del gen, también se conoce como región reguladora 5’ “upstream”
 Ej. 7 genes E.coli, misma RNA pol se une a los promotores. Dos regiones con similaridad ‘35 y -
10 tiene secuencias consenso y el resto diferencia
 Se une RNA pol holoenzima y desenrrolla. La primera base está siempre en la posición +1
 La txn comienza antes de segmento codificante (secuencia ATG). Región antes se llama 5’ región
no transcripcional (5’ UTR)
MAQUINARIA DE INICIACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
 GEN
 RNA polimerassa holoenzima es un complejo formado por 4 subunidades en la enzima núcleo (dos α, β y β’),
más un factor sigma σ que se une a la región -10 y -35, separa la hebra en -10 para que se posicione el core
 Cuando el core se une, empieza txn y sigma se disocia

 Existen distintas unidades sigmas para reconocer distintos promotores

ELONGACIÓN

 ADN se desenvuelve y envuelve a medida que se

transcribe y se forma la burbuja de transcripción
 Existen 10 nucleótidos que forma un híbrido
ARN/ADN
 Si la burbja es débil, la RNA polimerasa para hasta
que se estabiliza
TERMINACIÓN

 Al final del transcripto existe una región no

codificante 3’ UTR
 La elongación continúa hasta que se reconoce una
secuencia especial de nucleótidos que actúa como
señal del terminación
 Se conocen dos mecanismos principales en E.coli y
otras bacterias
 Intrínseca
 Dependiente de Rho
TERMINACIÓN

Mecanismo intrínseco
 Aprox 40 bases GC, seguidos de 6 o más A
 Se forman puentes de hidrógeno entre CG,
formando una horquilla
 Después de sintentizar los U, el híbrido queda
inestable y el ARN se libera de la polimerasa y ésta
del ADN
TERMINACIÓN

Mecanismo dependiente de Rho

 Factor Rho reconoce señales de terminación
 RNA dependientes de Rho no tienen residuos de U
ni forman horquillas
 Tienen 40 a 60 nucleótidos ricos en C y un sitio rut
upstream
 Rho se une a sitio rut y facilita la liberación de
RNA polimerasa
 TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

(1823-1884)
 Monje agustino y biólogo
 Nacido en la actual República Checa
 Experimentó con la planta del guisante y desarrolló
las famosas tres leyes de la genética conocidas como
las Leyes de Mendel
 TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

 Es más complicada que en procariotas por:

1. Genoma eucariota es más grande y por tanto se tiene que

reconocer más genes y transcribirlos. También hay más
regiones no codificantes
2. El ARN es sintetizado en el núcleo y debe ser modificado para
transportarse
3. El DNA está organizado en cromatina, mientras que en
procariotas está “desnudo”
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

Genoma eucariota es más grande y por tanto se tiene que reconocer más genes y transcribirlos. También hay más regiones no
codificantes
 Densidad de genes en E.coli 900 genes por millones de pares de base, Drosophila – 100, 9 para humanos
 Cómo encontrar sitos de iniciación?
a) Trabajo de txn divido en 3 polimerasas
RNA pol I transcribe rRNA (menos 5S rRNA)
RNA pol II todas los genes codificantes de proteínas (mRNA) y algunos snRNA
RNA pol III genes de RNA pequeños funcionales (tRNA, snRNA, 5S rRNA)

b) Necesitan el ensamble de varias proteínas al promotor, llamadas factores generales de transcripción GTFs
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

El ARN es sintetizado en el núcleo y debe ser modificado

para transportarse
Procesamiento de RNA
A medida que la primera mitad 5’ se procesa, la otra mitad se
sigue transcribiendo
RNA antes de procesar – transcripto primario o pre-mRNA
RNA procesado – mRNA o RNA maduro
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

El DNA está organizado en cromatina, mientras que en

procariotas está “desnudo”

Algunas estructuras de la cromatina bloquea el acceso de

RNA pol al templete – mecanismos de regulación de
transcripción
 INICIACIÓN

Core de RNA pol II no reconoce promotor, pero no se

une un factor sigma, sino los factores generales de
transcripción GTFs antes que se una la polimerasa
GTFs reconocen al promotor, se unen y atraen al core
de la RNApol II y la posicionan correctamente
GTFs + complejo RNA pol II forman el complejo de
preiniciación (PIC)
6 GTFs que son complejos multipro´teicos y al
menos 12 subunidades del complejo de RNA pol II
La secuencia de aminoácidos de la polimerasa está
muy bien conservada desde levaduras a humanos
 INICIACIÓN
Generalmente en la posición -30 se encuentra una
secuencia TATA (TATA box) donde se ocurre el primer
paso y se une la proteína de unión a TATA (TBP)
Complejo de GTFs es el complejo TFIID donde se
encuentra TBP
Al unirse TBP atrae a las otros GTFs y al core de RNA pol
II formando el PIC
Después de que la txn se inicia, la RNA pol II se disocia
de los GTFs para elongar el transcripto primario
Algunas GTFs se quedan para que entre otro complejo
RNA pol II y sacar varias copias
Existe una cola en la subunidad beta de la RNA pol II,
dominio de cola de carboxil (CTD) que cuando la
iniciación termina, una GTFs la fosforila y se debilita
la unión y prosigue la elongación
ELONGACIÓN

 En procariotas, la traducción ocurre mientras todavía

el extremo 3’ se sigue sintetizando. En eucaritoas,
debe haber omdificaciones para que esto ocurra
1. Adición de cap en extremo 5’
2. Adición de cola de A en extremo 3’
3. Splicing para eliminar intrones
 Proceso de modificación es cotranscripcional
 CDT juega un rol importante. Tiene un repetiociones de
7 aminoácidos que sirven de sitio de unión de otras prot
 A través de fosforilación y desfosforilación se determina qué
proteínas se unen
ELONGACIÓN

 En procariotas, la traducción ocurre mientras todavía

el extremo 3’ se sigue sintetizando. En eucaritoas,
debe haber omdificaciones para que esto ocurra
1. Adición de cap en extremo 5’
2. Adición de cola de A en extremo 3’
3. Splicing para eliminar intrones
 Proceso de modificación es cotranscripcional
 CDT juega un rol importante. Tiene un repetiociones de
7 aminoácidos que sirven de sitio de unión de otras prot
 A través de fosforilación y desfosforilación se determina qué
proteínas se unen
ELONGACIÓN: MODIFICACIONES EN EXTREMOS 5’ Y 3’

5’ 3’

 Elongación sigue hasta que se reconoce la

 Se añade el cap al extremo 5’ por proteínas que
interactúan con CTD secuencia conservada AAUAAA o AUUAA en el
extremo 3’ por una enzima que corta el final unas
 Cap es un residuo de 7-metilguanosina unido a un 20 bases después
transcripto de 3 grupos fosfatos
 Esta secuencia se llama señal de poliadenilación
 Funciones del cap:
 Se adhiere al final una cola poliA de 150 a 200
1. proteger ARN de degradación Adeninas
2. Es requerido para lla traducción
ELONGACIÓN: SPLICING

 Los genes eucarióticos poseen intrones,

segmentos de función desconocida que
no codifican polipéptidos
 Los intrones son removidos del
transcripto primario mientras se sigue
transcribiendo RNA y después de tener el
cap, antes de pasar al citoplasma
 Splicing = remoción de intrones y unión
de exones
 mRNA tiene secuencias codificantes que
es colinear respecto a la proteína que
codifica
 Número de intrones varía entre genes y
especies
ELONGACIÓN: SPLICING ALTERNATIVO

 Diferentes vías de splicing pueden

producir distintos mRNAs, por
tanto diferentes proteínas de un un
solo transcripto primario
ELONGACIÓN: EXON SPLICING

 En las uniones entre exones/intrones se dan las reacciones de splicing

 Existen nucleótidos idénticos y muy conservados entre especies 5’GU y AG3’ y un sitio A enter los 15-45
bases hacia 3’
ELONGACIÓN: EXON SPLICING
 Estos nucleótidos conservados son reconnocidos por
partículas de riboproteínas pequeñas nucleares snRNPs
 Una unidad funcional de splicing se denomina
spliceosoma
 Los compomemtes del spliceosoma interactúan con CTD
y juntan los exones
 snRNAs en spliceosoma alinea los sitios de splicing por
puentes de hidrógeno en los sitios conservados
 Luego spliceosoma cataliza remoción de intrón
1. Sitio uno se a una A conservada formando como un nudo de
cowboy (lariat)
2. Sitio 2 libera lariat y une los exones adyacentes
ELONGACIÓN: EXON SPLICING
 Estos nucleótidos conservados son reconnocidos por
partículas de riboproteínas pequeñas nucleares snRNPs
 Una unidad funcional de splicing se denomina
spliceosoma
 Los compomemtes del spliceosoma interactúan con CTD
y juntan los exones
 snRNAs en spliceosoma alinea los sitios de splicing por
puentes de hidrógeno en los sitios conservados
 Luego spliceosoma cataliza remoción de intrón
1. Sitio uno se a una A conservada formando como un nudo de
cowboy (lariat)
2. Sitio 2 libera lariat y une los exones adyacentes
Ambas reacciones son transesterificaciones
TAREA

 Cómo difiere la estructura de ARN del ADN?

 Cuáles son las diferentes clases de ARN en la célula?
 Cómo se posiciona correctamente la RNA polimerasa al sitio de iniciación en procariotas?
 Cómo se modifica el ARN sintetizado en eucariotas antes de dejar el núcleo?
RESUMEN

 Transcripción
 Etapas: iniciación, elongación y terminación
 Diferencias entre procariotas y eucariotas
TRADUCCIÓN

PROTEÍNAS Y SU
ESTRUCTURA
LOS GENES DE AMBOS PADRES SE MEZCLAN
POR REPRODUCCIÓN SEXUAL

 ¿Cómo se distribuyen los alelos en el apareamiento?

 Si ambas copias de los genes de ambos padres fueran
transmitido a todos sus descendientes, la descendencia tendría
cuatro copias de cada gen, dos de su madre y dos de su padre.
 La próxima generación terminaría con ocho copias y así
sucesivamente.
 Se necesita un mecanismo para asegurar que el número de
copias de cada gen permanezca estable de generación en
generación.
 ¿Cómo se asegura la naturaleza de que se transfiera el número
correcto de copias de genes?
 Cuando los organismos diploides como los animales o las
plantas se reproducen sexualmente, los padres producir
células sexuales o gametos
RESUMEN

Cromosomas homólogos:
Aneuploide: que tiene un Número de copias :El Ploidía: El número de
cuando llevan la misma Tetraploide: que tiene Triploide: que tiene tres
número irregular de número de copias de un gen conjuntos de cromosomas
secuencia de genes en el cuatro copias de cada gen copias de cada gen
diferentes cromosomas que están presentes que posee un organismo.
mismo orden lineal

Alelo dominante: Alelo Dominancia parcial: Alelo recesivo: Alelo

Trisomía :Tener tres copias cuyas propiedades se Heterocigoto: que tiene dos Homocigoto: que tiene dos Cuando un alelo funcional cuyas propiedades no se
de un cromosoma en expresan en el fenotipo, ya alelos diferentes del mismo alelos idénticos del mismo enmascara solo observan porque están
particular sea que esté presente como gen gen parcialmente un alelo enmascaradas por el alelo
copia simple o doble. defectuoso dominante.

Generaciones filiales:
Penetrancia: Variabilidad Gametos: Células
Co-dominancia: Cuando Generaciones sucesivas de
en la expresión fenotípica especializadas para la Gen modificador: Gen que
dos alelos diferentes descendientes de un cruce
de un alelo reproducción sexual que son modifica la expresión de
contribuyen a las genético que se numeran F1,
haploides (tienen un otro gen.
propiedades observadas F2, F3, etc., para realizar un
conjunto de genes)
seguimiento de ellos.