UNIVERSIDAD DE

SONORA

División de Ciencias Biológicas y

de la salud

Departamento de Ciencias Químico-Biológicas

Laboratorio de Química Analítica II

Dra: Yedith Soberanes Duarte

Práctica #2: Espectroscopia de ultravioleta visible

Integrantes

Figueroa acosta Patricia Michelle

Robles Anaya Antonio de Jesús

Urrea Ramírez Ivana

Valenzuela Moroyoqui Zuceth Elí

Hermosillo, Sonora a 08 de septiembre del 2021.

 Objetivo

Conocer el funcionamiento del espectrofotómetro ultravioleta visible mediante la

obtención de los espectros de disoluciones de fenolftaleína a diferentes valores de
pH

Introducción

La espectrofotometría UV-visible es una técnica muy utilizada en la Química

analítica, y esta permite determinar la concentración de un compuesto en una
solución. Esta técnica consiste en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez la cantidad de luz absorbida depende de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en
el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución
y medir la cantidad de luz absorbida por la misma.

Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo
que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.

Materiales y reactivos

Equipo:

Espectrofotómetro de ultravioleta visible

Materiales:

● 2 celdas de cuarzo de 1 cm de paso óptico

● 2 pipetas Pasteur
● 1 recipiente para residuos
● 1 piceta con agua destilada
● Sanitas para la celda
Reactivos:

Soluciones de fluoresceína a pH ácido, neutro y básico con una concentración de

1x10-4 M

Diagrama de flujo
 Resultados

1.- Anotar en la siguiente tabla los valores de los máximos de absorción de los
espectros en cada disolución

Fluoresceína pH ácido Fluoresceína pH neutro Fluoresceína pH básico

λmáx 437 Abs 0.25 λmáx 490 Abs 0.25 λmáx 421 Abs 0.125
0 0

λmáx 437 Abs 0.25 λmáx 490 Abs 0.25 λmáx 490 Abs 2
0 0

Análisis de los datos

Reportar los coeficientes de extinción molar para cada máximo de absorbancia en

cada una de las soluciones

Fluoresceína pH ácido Fluoresceína pH neutro Fluoresceína pH básico

λmáx 437 εmáx 2,500 λmáx 440 εmáx 2,500 λmáx 421 εmáx 1,250
nm nm nm

λmáx 437 εmáx 2,500 λmáx 440 εmáx 2,500 λmáx 440 εmáx 20,000
nm nm nm

Conclusiones
Como conclusión de esta práctica es que pudimos terminarla correctamente, gracias
a ella pudimos conocer más sobre la técnica de espectrofotometría y también
aprendimos sobre los cálculos.

Puede que a la hora de hacer los cálculos, no hayan salido tan exactos, ya que
puede haber algún error al sacar las longitudes de onda, pero aun así pudimos
llegar a un resultado.

Cuestionario

1.- ¿Por qué los espectros, y por tanto las longitudes de onda máximas, de la
fluoresceína son diferentes en medio ácido y en medio básico? Por la cantidad
de luz que absorbe la longitud de onda, en este caso cuando hablamos de un medio
ácido quiere decir que tiene una longitud de onda con mayor magnitud que una de
medio básico, la cual es de menor longitud.

2.- ¿Se podrá realizar esta práctica en un espectrofotómetro que solo trabaje
en región visible? Sí, ya que las longitudes de onda obtenidas se encuentran entre
los 400-550 nm.

3.- ¿En esta práctica podrían utilizarse celdas de vidrio en vez de cuarzo? Sí,
ya que la región que se puede observar con las celdas de cuarzo va desde los 200
hasta los 900,000 nm.

4.- Si las celdas están sucias o rayadas, la luz de la fuente será dispersada. En
esta situación ¿será menor o mayor concentración real de la muestra, el valor
de concentración que se reporta en el laboratorio? Será menor, esto porque no
estaría absorbiendo la luz necesaria.
 Bibliografía

● Díaz, N. A., Bárcena Ruíz, J., & Fernández Reyes, E. (s. f.). Espectrometría:
Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas. uco.
Recuperado 7 de septiembre de 2021, de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.
pdf