PRACTICA N°11

ESPECTROFOTOMETRÍA I

I. OBJETIVOS:
1. Reconocer el adecuado funcionamiento del espectrofotómetro.
2. Determinar experimentalmente la longitud de onda óptima por medio de la
realización de una curva espectral.

II. MARCO REFERENCIAL

2.1. Química Analítica.- Es la rama de la Química que tiene como finalidad el
estudio de la composición química de un material o muestra, mediante diferentes
métodos. Se divide en Química analítica cuantitativa y Química analítica
cualitativa.
2.1.1 Análisis Químico:
El Análisis Químico es la parte práctica que aplica los métodos de análisis para
resolver problemas relativos a la composición y naturaleza química de la materia.
Los ámbitos de aplicación de los análisis químicos son muy variados, en la
industria destaca el control de calidad de materias primas y productos acabados;
en el comercio los laboratorios certificados de análisis aseguran las
especificaciones de calidad de las mercancías; en el campo médico los análisis
clínicos facilitan el diagnóstico de enfermedades.
2.1.2 Métodos analíticos
Los métodos que emplea el análisis químico pueden ser:
Métodos químicos: se basan en reacciones químicas o clásicos:
Análisis volumétrico
Análisis gravimétrico
Métodos fisicoquímicos: se basan en interacciones físicas o instrumentales:
Métodos espectrométricos
Métodos electroanalíticos
Métodos electroanalíticos
Métodos cromatográficos
2.1.3 Características de calidad de los métodos analíticos:
Exactitud: Grado de concordancia entre el resultado y un valor de referencia
certificado. En ausencia de exactitud se tiene error sistemático.
Precisión: Grado de concordancia entre los datos obtenidos de una serie.
Refleja el efecto de los errores aleatorios producidos durante el proceso analítico.
Sensibilidad: Capacidad para discriminar entre pequeñas diferencias de
concentración del analito. Se evalúa mediante la sensibilidad de calibración, que
es la pendiente de la curva de calibración a la concentración de interés.
Límite de detección: Concentración correspondiente a una señal de magnitud
igual al blanco más tres veces la desviación estándar del blanco.
Intervalo dinámico: Intervalo de concentraciones entre el límite de
cuantificación (LOQ) y el límite de linealidad (LOL).
Selectividad: Cuantifica el grado de ausencia de interferencias debidas a otras
especies contenidas en la matriz.
Seguridad: Amplitud de condiciones experimentales en las que puede realizarse
un análisis. Además, habrá que considerar otro tipo de parámetros asociados y
de gran importancia práctica como son la rápidez, costo, seguridad del proceso,
peligrosidad de los residuos, etc.
2.1.4 Importancia de la química analítica:
La Química analítica es una de las ramas más importantes de la Química
moderna. Comprende la separación, identificación y determinación de las
cantidades relativas de los componentes que forman una muestra de materia. Lo
que hace a la Química Analítica tan importante en la actualidad, son sus diversas
aplicaciones ya que la determinación de la composición química de una
sustancia es fundamental en el comercio, en las legislaciones, en la industria y
en muchos campos de la ciencia como lo es la medicina.
2.2. Espectrofotometría. - Es uno de los métodos de análisis más usados, y se
basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de
una sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz
incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia de la
intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad
de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del
compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra puede estar en fase líquida,
sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una solución.
Espectrofotometría UV-visible.- Es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las
moléculas que absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida dependen de forma lineal de la concentración.
Además, es usada para identificar compuestos por su espectro de absorción y
conocer la concentración de un material o sustancia.
Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, es un equipo
de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por medio de una longitud
de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un medio es proporcional
a la concentración del soluto presente, es entonces así que la concentración de
un soluto colorido en solución puede ser determinada en el laboratorio mediante
la medición de su absorción de luz a una longitud de onda específica. Las
muestras en estos equipos se utilizan en estado líquido y se colocan en el
compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaños
y materiales.

En espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación

electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm). La región UV se define como
el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una región de energía muy
alta. En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que
corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El
color que absorbe es el complementario del color que transmite. Por tanto, para
realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la
que absorbe luz la solución coloreada. La fuente de radiación visible suele ser
una lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente energía por debajo de 320
nm.

La región visible del espectro electromagnético abarca aproximadamente de 400

a 780 nm. Esta región del espectro es usada ampliamente en el laboratorio
analítico. La siguiente tabla muestra la división de la región visible del espectro:

Longitud de onda Color absorbido Color reflejado

(nm)
380 Ultravioleta --------------------------------
--------
380-435 Violeta Verde amarillento
435-480 Azul Amarillo
480-490 Azul verduzco Anaranjado
 490-500 Verde azuloso Rojo
500-560 Verde Púrpura
560-580 Verde amarillento Violeta
580-595 Amarillo Azul
595-650 Anaranjado Azul verduzco
650-780 Rojo Verde azuloso
780 Infrarrojo cercano --------------------------------
---------

Deben tomarse en cuenta los datos anteriores para el trabajo analítico en el

VISIBLE.
La luz que utilizamos para leer, así como la luz del sol es policromática, contiene
todas las longitudes de onda de la lista anterior. Cuando vemos un objeto, vemos
luz reflejada. La luz reflejada es la que quedó de la iluminación “blanca”, después
que el objeto absorbió varias longitudes de onda.

La transmitancia(T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad

de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra y
la absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que
nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.
Ley de Lambert-Beer Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en
solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su
concentración:
– A mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución
– A igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más
moléculas se encontrará; y por último, depende de ε, una constante de
proporcionalidad denominada coeficiente de extinción- que es específica de
cada cromóforo.
III. MATERIALES Y REACTIVOS DE USO GENERAL
 Espectrofotómetro
 Celdas de cuarzo
 Agua destilada
 Azul de metileno
 IV. PROCEDIMIENTO:
 Encender el espectrofotómetro, reconocer las partes y el correcto
funcionamiento del mismo.
 Preparar una solución de azul de metileno
 Medir el espectro de absorción máximo del azul de metileno, para ello
mediremos a partir de la mínima longitud de onda en nm en intervalos de
50nm en 50nm hasta los 800nm. Una vez ubicado el máximo, mediremos
de 10nm en 10nm próximos al máximo de absorción.

V. CALCULOS Y RESULTADOS:
VI. CONCLUSIONES:
VI. CUESTIONARIO:
 Defina los siguientes términos: absortividad molar, coeficiente de
extinción molar, espectro de absorción, curva estándar, patrón estándar o
primario, blanco.
 Indique las principales características y componentes del
espectrofotometro e indique sus aplicaciones en el campo ambiental.
VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS.

 Wikia. Quimica Absorbancia. Recuperado el 08 de mayo de 2013

de: http://quimica.wikia.com/wiki/Absorbancia
 Fisica 2000. Espectros de Absorción. Recuperado el 08 de mayo de 2013 de
: http://maloka.org/fisica2000/quantumzone/fraunhofer.html
 Equipos y laboratorio de Colombia. Colorímetro y espectrofotómetro.
Recuperado el 08 de mayo de 2013
de: http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1027