Clases 5 y 6: Mecanismos Genéticos Básicos I y II

Membrana
Envoltura nuclear externa
nuclear Poros
Membrana nucleares
nuclear interna

Cromatina
(DNA + Proteínas

Nucleolo

El Núcleo
(Células Eucariontes)
Compartimiento que
contiene el material
genético (cromosomas)
Cariotipo: Contenido Total de Cromosomas en una Célula.
Considera número y tamaño de los cromosomas

Cariotipo
Humano Normal
 Los Cromosomas Eucariontes necesitan 3 estructuras para
mantenerse durante generaciones celulares
Interfase Mitosis Interfase

Telómero

Cinetocoro
Origen de
Replicación

Centrómero

Parte del huso

mitótico Cromosomas
duplicados
Figure 4-21 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
 Estructura de los
Cromosomas
Eucariontes

Ejemplo:
Cromosoma
humano 22

Figure 4-15 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2015)

 Estructura de la Cromatina

DNA (información genética)

La cromatina existe en
Cromatina diferentes grados de
condensación
Proteínas Asociadas

HETEROCROMATINA:
Más condensada y
EUCROMATINA:
densamente teñida
Más relajada, contiene
(genes
la mayoría de los genes
transcripcionalmente
transcripcionalmente
inactivos)
activos
Empaquetamiento del DNA: Estructura de la Cromatina
Fibra de 30 nm (Solenoide)

“collar de perlas” o “collar de cuentas” de la cromatina

(fibra de 11 nm)
 Fibra de 11 nm (“collar de perlas o collar de cuentas”)

DNA Colas de
Internucleosomal Histonas

Nucleosoma:
“Core” u Octámero de Histonas:
2 x H2A
2 x H2B
2 x H3
2 x H4
Estructural real
+ 2 vueltas de DNA de un
nucleosoma
DNA Nucleosomal + DNA Internucleosomal = 200 pb Figure 4-23 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2015)
 La Histona H1 es Extranucleosomal

Se asocia tanto al DNA espaciador como al nucleosoma,

conformando un Cromatosoma
 La Formación de la Fibra de 30 nm depende de la Histona H1

Dos Modelos de la Fibra

de 30 nm

Solenoide Zig-zag
Nucleosomas vecinos se asocian mediante
la histona H1 (extranucleosomal)
Niveles de Empaquetamiento de la Cromatina

https://www.youtube.com
/watch?v=xk7jE4MRCR8

Resultado neto: cada

molécula de DNA ha sido
empaquetado en un
cromosoma mitótico que es
10.000 veces más corto que
su forma extendida
 CENTRO FIBRILAR
Nucleolo (genes de rDNA)

Zona dentro del núcleo donde COMPONENTE

ocurre la Síntesis y FIBRILAR DENSO
(Transcritos COMPONENTE
procesamiento de RNAs nacientes de pre- GRANULAR
ribosomales 28S, 18S y 5,8S rRNA) (procesamiento de
rRNAs)
Procesamiento NÚCLEO
de pre-rRNA y
Ensamblaje de
Ribosomas

Las proteínas
ribosomales son
importadas del
citoplasma al
nucleolo y se
ensamblan sobre el
pre-rRNA 45S
antes de su
procesamiento
CITOPLASMA

Junto con el rRNA 5S (sintetizado fuera del nucleolo), se forman partículas pre-ribosomales. Después de la
exportación de éstas al citoplasma, ocurren pasos adicionales de maduración, dando origen a las
subunidades ribosomales 40S y 60S.
 Estructura del DNA: La Doble Hélice (1953)

Cristalografía de
rayos X (Rosalind
Franklin & Maurice
Wilkins)
 La Doble Hélice del DNA

Surco
menor

Surco
mayor

Esqueleto azúcar-
fosfato en el
exterior de la hélice
(carga negativa)

Los pares de bases se ubican al centro,

perpendicular al eje de la doble hélice
Figure 4-5 Molecular Biology of the Cell (©
Garland Science 2008)
La Doble Hélice del DNA
• 10 pares de bases por cada
vuelta de hélice
• Es de mano derecha
 Replicación de DNA
Reparación de DNA

Replicación del DNA Recombinación

generación de una copia exacta

del genoma de una célula

Síntesis de RNA (Transcripción)

Transcripción Reversa
(Virus)

FLUJO DE LA
INFORMACIÓN GÉNICA:
Síntesis de Proteínas
Dogma Central de la (Traducción)
Biología Molecular
 El DNA Actúa como Molde para su propia Síntesis

El nucleótido A sólo se apareará con éxito con T y G con C, por lo que cada cadena de
DNA puede especificar la secuencia de nucleótidos de su cadena complementaria. Así, la
doble hélice de DNA se puede copiar fielmente.

Figure 5-2 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 La Replicación del DNA es
Semiconservativa

En cada ronda de replicación,

cada una de las dos hebras es
usada como templado (molde)
para la formación de una hebra
de DNA complementaria.

La síntesis del DNA

transcurre en
dirección 5’ à 3’
 La Replicación es llevada a cabo
por la DNA POLIMERASA

• La DNA Polimerasa cataliza la adición de un

desoxirribonucleótido al extremo 3’-OH de una
hebra de DNA, por lo tanto la nueva hebra se
sintetiza en el sentido 5’ à 3’.

• El apareamiento de bases entre el

desoxirribonucleótido entrante y la hebra molde
guía la formación de la nueva cadena de DNA, la
cual, por ende, tendrá una secuencia de bases
complementaria a la de la hebra molde.

• Los nucleótidos entran en la reacción como

desoxirribonucleósidos TRIFOSFATO. La
rotura del enlace fosfoanhídrido (asterisco) del
nucleósido trifosfato entrante entrega la energía
necesaria para la reacción de polimerización.
La Replicación se Inicia desde Orígenes de Replicación

eucariontes

procariontes
 La Replicación del DNA es Bilateral (transcurre en ambos sentidos)

Origen de replicación

Hebras templado de Proteínas

hebra simple (bases iniciadoras abren
expuestas para ser la doble hélice
copiadas) HORQUILLA de
HORQUILLA de Replicación
Replicación

Dirección de apertura “Burbuja” u “Ojo” de Replicación Dirección de apertura

de la doble hélice de la doble hélice
 Estructura de la Horquilla de Replicación
Hebra templado de la
Contínua o hebra contínua
Líder

Hebra Discontínua templado de la

o Retrasada hebra discontínua
(Lagging)

Ambas hebras nuevas son sintetizadas en la dirección 5 a 3’

La síntesis de la hebra discontínua se realiza inicialmente como una serie de
moléculas cortas de DNA, llamadas Fragmentos de Okazaki.
 Asimetría de la Burbuja de Replicación

A un lado del orígen de replicación, la hebra de arriba es la líder y la de abajo es la

discontínua: Al otro lado del origen de replicación la situación es la inversa.
 Iniciación de los Fragmentos de Okazaki
con Partidores (“Primers” de RNA

extensión del
iniciación de síntesis del partidor de RNA
DNA templado síntesis de RNA partidor de RNA por DNA polimerasa

Primasa DNA Polimerasa

rNTPs dNTPs
 síntesis de un nuevo partidor
Partidor de RNA de RNA por la PRIMASA
templado de
la hebra
DNA polimerasa III elonga desde
el nuevo partidor para iniciar
discontínua nuevo fragmento de Okazaki
DNA polimerasa III termina el
nuevo fragmento de DNA
partidor de RNA removido y
reemplazado por DNA Polimerasa I
Síntesis de Fragmentos
de Okazaki en la Hebra
Discontínua
• En eucariontes, los partidores de
RNA en la hebra retrasada son
sintetizados a intervalos separados
en alrededor de 200 nucleótidos y
cada partidor es de 10 nucleótidos
de largo.
• Cada partidor es luego borrado y
reemplazado por DNA.

• Los fragmentos de Okazaki son

Espacio (“nick”) sellado por DNA ligasa unidos por DNA ligasa.
El nuevo fragmento de Okazaki
se incorpora a la cadena creciente
 DNA Polimerasas de Procariontes y Eucariontes

E. coli Levaduras Mamíferos Función

I I a Relleno de espacios durante replicación (en

fragmentos de Okazaki) y reparación de DNA

II II b Relleno de espacios
Replicación desde templados dañados

III III g Elongación de la hebra nueva de DNA en la

horquilla de replicación
Dirección de Desenrolla la
movimiento de doble hélice
la Horquilla de (utiliza ATP)
Helicasa
Replicación
Proteínas de Unión a
DNA De Hebra Simple

Mantienen las hebras

Hebra Hebra
de DNA templado
Líder Discontínua
“estiradas”
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 El desenrollamiento de
la doble hélice templado
(mediado por la
helicasa) genera
tensión detrás de la
zona de apertura

Esta tensión es
aliviada por la
Topoisomerasa
 Relacione los nombres de la columna con los elementos de la figura:

DNA polimerasa I

Partidor de RNA

primasa

Templado de DNA

Proteinas de unión a
DNA de doble hebra

helicasa

fragmento de Okazaki

Toposiomerasa

DNA ligasa

DNA polimerasa III

Acortamiento de Telómeros en Cromosomas Eucariontes (Lineales)

Después de 50-70
divisiones, los
telómeros alcanzan
un acortamiento
crítico, con lo cual
las células
proliferativas
normales entran en
Senescencia
Replicativa
 Telomerasa:

DNA polimerasa
dependiente de RNA:

Proteína (Telomerase
Reverse Transcriptase,
TERT)

RNA (TERC, molde

interno)
 Actividad correctora de
Nucleótido desapareado en el extremo 3’-
OH bloquea la elongación
pruebas de la DNA
polimerasa
“Proofreading”
La actividad exonucleasa de la DNA
polimerasa remueve el nucleótido en Corrige errores introducidos por la
dirección 3’ a 5’ misma DNA polimerasa durante la
Replicación

DNA polimerasa vuelve a polimerizar

nucleótidos
 Reparación del DNA
Para corregir errores en la secuencia del DNA (MUTACIONES)

MUTACIÓN = cambio heredable en el material genético de una célula.

2 Tipos Generales:

- Mutaciones Cromosómicas (deleción o repetición de un trozo de cromosoma)

- Mutaciones Puntuales: afectan una o unas pocas bases

- Sustituciones
- Inserciones o Deleciones
- Formación de Dímeros de Pirimidina
Mutaciones Puntuales

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Las modificaciones químicas de nucleótidos pueden producir mutaciones
La desaminación de la citosina podría provocar una sustitución:
Las modificaciones químicas de nucleótidos pueden producir mutaciones
La despurinación de un nucleótido podría provocar una deleción:
La irradiación del DNA con luz UV provoca la formación de
dímeros de pirimidinas (generalmente timinas)
 Agentes que producen daño genético
- Rayos X
- Agentes alquilantes - Radiación ionizante
- Hidrólisis - Radiación UV (X, gamma)
- Radicales de oxígeno (ROS) - Mutágenos - Agentes Errores replicativos
químicos antitumorales

- Bases anormales - Desapareamientos

- Aductos de bases - Inserciones de bases
- Roturas de una hebra - Roturas de doble - Deleciones de bases
- Aductos
voluminosos hebra
- Dímeros de timina - Entrecruzamientos
entre hebras

Mecanismos de reparación
Reparación por
Reparación por recombinación Reparación de
Reparación por escición de - Homóloga desapareamientos
escición de bases nucleótidos - No homóloga
 Mecanismos de Reparación del DNA
La mayoría de los errores genéticos provocados por diferentes causas (internas y
externas) son eficientemente reparados por la maquinaria de reparación de DNA.

• Reparación dependiente de la hebra complementaria:

– Reparación de Desapareamientos (Mismatch Repair, MMR)
– Escisión de bases (Base excision repair; BER)
– Escisión de nucleótidos (Nucleotide excision repair; NER)

• Reparación de cortes de las dos hebras del DNA (double-strand breaks):

– Unión No homóloga de extremos (Non-homologous end-joining; NHEJ)
– Reparación por Recombinación Homóloga
 REPARACIÓN DE DESAPAREAMIENTOS EN EL DNA
(Mismatch Repair, MMR; Mismatch proofreading)
Repara errores en la secuencia de
UNIÓN DE bases, como inserciones, deleciones y
PROTEÍNAS DE MMR sustituciones, que aparecen durante la
replicación y recombinación, además
MutS se une al desapareamiento de reparar algunas formas de daño en
MutL recorre la doble hélice hasta el DNA.
encontrar una discontinuidad (“nick”).
La hebra con el error es reconocida
REMOCIÓN DEL SEGMENTO DE por la presencia de “nicks” que
LA HEBRA QUE CONTIENE EL quedan por la síntesis de la hebra
ERROR discontínua durante la replicación.

SÍNTESIS DE DNA
SELLADO DE NICK RESULTANTE (DNA LIGASA)
 C desaminada

pares de
bases

REPARACIÓN POR
ESCISIÓN DE BASES URACILO DNA
Remueve sólo la base,
dejando la desoxirribosa y
GLICOSILASA
el fosfato

(Base Excision Repair; Hélice de DNA

con una base
BER) menos

AP ENDONUCLEASA Y
Generalmente para FOSFODIESTERASA REMUEVEN
EL AZÚCAR-FOSFATO
reparar bases modificadas
químicamente, que Hélice de DNA con
podrían producir un nucleótido
menos
mutaciones de sustitución DNA POLIMERASA ADICIONA NUEVOS NUCLEÓTIDOS
DNA LIGASA SELLA EL ESPACIO
 Dímero de pirimidinas

REPARACIÓN POR pares de

bases
ESCISIÓN DE
NUCLEASA DE
NUCLEÓTIDOS ESCISIÓN

(Nucleotide Excision
Repair; NER)
Reparación de lesiones que
DNA
producen deformaciones HELICASA

en la doble hélice, como:

Hélice de DNA
con un espacio
Dímeros de timinas de 12
Uniones a grupos químicos DNA POLIMERASA + DNA
nucleótidos

voluminosos LIGASA
Reparación de cortes de doble hebra en el DNA (double-strand breaks)
UNIÓN NO HOMÓLOGA DE EXTREMOS RECOMBINACIÓN HOMÓLOGA

Corte de dos hebras

Cromátidas
hermanas

Procesamiento Procesamiento
de extremos de extremos

Unión de Recombinación
extremos homóloga

Deleción de un
segmento del DNA El daño es reparado en forma precisa al
utilizar la cromátida hermana como templado