Organización del material hereditario

1
Organización del material hereditario

Necesidad de compactación
Volumen limitado
Neutralización de cargas del ADN

Organización funcional del ADN

Mecanismos de segregación en duplicación
Accesibilidad de proteínas reguladoras de la
expresión génica

2
El nucloide bacteriano
El genoma bacteriano incluye un cromosoma
circular y moléculas pequeñas circulares
(plásmidos).

No existe núcleo definido.

ADN en “región nucleoide”.

Varios dominios de 40-80 Kb superenrrollados

asociado a ARN y proteínas

3
El núcleo eucariota

10,000 nm

El genoma nuclear humano

comprende 46 moléculas de ADN
lineales

El largo sumado de este ADN es

más de 1.5 metros

El diámetro del núcleo es aprox. 10

um

4
El ciclo celular

Durante la división se visualizan

cromosomas individuales.

Los cromosomas metafásicos

son la forma más condensada
de la cromatina.

Los cromosomas son herramientas de

segregación del material hereditario

Cuáles son los pasos de compactación?

5
La cromatina

A partir de núcleos aislados se puede aislarse cromatina

Al microscopio electrónico se observan fibras de 30 nm y

collar de cuentas de 10 nm

6
La cromatina

Análisis bioquímico

Cantidades similares de ADN y proteínas

Digestión de ADN con nucleasas

repetidos de 160-200pb

Proteínas básicas – HISTONAS

7
Las histonas

Proteínas básicas pequeñas

Altamente conservadas
Centro globular y colas ricas en Lys y Arg H1
Sitios de acetilación de Lys en colas N terminales (+)
Sitios de fosforilación en Ser en colas de H1
H2A

H2B hélice

variable
H3

Histone Fold H2A/H2B Dimer “handshake” conservado

H4

8
El octámero de histonas

Las histonas H2A y H2B forman un

dímero.

Dos H3 y dos H4 forman un tetrámero.

Dos dímeros H2A-H2B y un tetrámero

H3-H4 forman un octámero con forma
de disco aplanado.

9
El nucleosoma

 Sobre el octámero se enrolla el ADN.

 Cada octámero organiza 145 pb en 1 ¾ vuelta.
 48 nm ADN en un disco de 6x11nm.
 Sitios distantes en el ADN se aproximan (accesibilidad).
 Otros sitios quedan cubiertos (en la cara interna).

10
Extremos de las histonas

 Cargadas positivamente

 Pasan entre las vueltas de ADN

 Contactan con el ADN adyacente

y del octámero próximo

11
La histona H1

 No forma parte del

octámero

 Organiza el ADN a la
entrada y salida del
octámero

12
El solenoide

Hélice nucleosomal

6 nucleosomas por vuelta

13
Correlación estructura - función

 La modificación de histonas es VITAL en la expresión génica.

 La acetilación y desacetilación de histonas es cíclica.

 Colas cargadas +  Colas acetiladas

Se unen al ADN de NO se unen al ADN
nucleosomes adyacentes
 Bajo nivel
 Alto nivel de histona H1 de histona H1

Existe transcripción génica

NO es posible la transcripción

Fibra de 30 nm Cuentas 10 nm

14
Las proteínas no histónicas

Eliminación de histonas
(Tratamiento con detergentes leves o
altas concentraciones salinas)
DNA loops

Matriz nuclear proteica y bucles de ADN

unidos a la matriz

Matriz nuclear
+ 2M NaCl

histonas

15
El andamiaje (Scaffold)

Igual tratamiento en cromosomas metafásicos revela un esqueleto proteico del

cromosoma (scaffold) del que salen bucles de ADN de 30 a 100 Kb.

La matriz nuclear proteica es el scaffold durante la interfase.

16
Los bucles de cromatina

Existen regiones de ADN que se unen al

scaffold:
SARs (scaffold attachment regions)
MARs (matrix attachment regions)
SARs=MARs

Loops of 30 – 90 kb

17
Los bucles como dominios
Cada bucle fijado al scaffold puede presentar una estructura diferente, mas o
menos condensada.

Pueden ser dominios funcionalmente independientes.

18
Los bucles como dominios

TAD – Dominios asociados topologicamente

19
El núcleo eucariota

20
Los dominios condensados

Los bucles de ADN fijados al scaffold se pliegan formando una superhélice

radial loop
chrosomosome model

Cromosoma mitótico
10 m
1m cromátidas
cromátida
21
El cromosoma metafásico
Forma de máxima compactación de la cromatina

Unidad estructural segregacional de la

información hereditaria

Constricción secundaria
Región organizadora
nucleolar
Con genes ribosomales

Centrómero
Constricción primaria
Sitio de unión de proteínas
que forman cinetocoro

Brazos
Porciones del cromosoma
entre el centrómero y el
telómero

22
El cromosoma

Unidad funcional de la información hereditaria

Telómeros
Regiones terminales de los cromosomas
Secuencias repetidas particulares
Mecanismo de duplicación particular
Función = Integridad cromosómica

Orígenes de replicación
ARS (sec. de replicación autónomas)
Varios por cromosoma
Función = replicación

Centrómero
Constricción primaria
Rico en secuencias repetidas
Sitio de unión de proteínas que forman
cinetocoro
Función = segregación

23
Citogenética

La CITOGENETICA analiza la cantidad y morfología

de los cromosomas.
Los cromosomas se pueden describir en base a la
posición del centromero.

Bandeo cromosómico:
Tratamiento desnaturalizante o enzimático del
cromosoma y posterior tinción.
Cada cromosoma revela un patrón específico
de bandas claras y oscuras.

24
25
Técnicas de bandeo cromosómico

Revelan diferencias estructurales en la cromatina que constituye cada banda.

Tratamiento desnaturalizante o enzimático y tinción

Bandas oscuras y claras (1-10 Mb)

 Bandeo G
 tratamiento con tripsina
Bandas claras zonas activas
replicación temprana
Bandas oscuras zonas inactivas
replicación tardía
 Bandeo R
 patrón opuesto a Bandeo G

 Bandeo C
 heterocromatina constitutiva
 pericentromérica

26
Técnicas de localización cromosómica
FISH
Hibridación in situ sobre cromosomas con
sondas fluorescentes

Cariotipo Espectral
Múltiple FISH con sondas específicas
de cada cromosoma marcadas con un
fluorocromo diferente.

27
ChromEMT

Coloración selectiva y
Tomografía electro molecular

28
ChromEMT

En vivo En solución

29
Niveles de compactación

Compactación debida al scaffold / matriz nuclear

Compactación debida a histonas

Tamaño compacto DNA longitud compactado

Núcleo (humano) 2 x 23 = 46 cromosomas 92 moléculas ADN 10 m esfera 12,000 Mbp 4 m DNA 400,000 x
Cromosma mitótico 2 cromátides, 1 m espesor 2 moléculas ADN 10 m forma X 2x 130 Mbp 2x 43 mm DNA 10,000 x
Dominio de ADN Bucle de AND anclado 1 replicón ? 60 nm x 0.5 m 60 kbp 20 m DNA 35 x
Fibra de cromatina approx. 6 nucleosomas por vuelta of 11 nm 30 nm diámetro 1200 bp 400 nm DNA 35 x
nucleosoma disco 1 ¾ vueltas de ADN (146 bp) + ADN linker 6 x 11 nm 200 bp 66 nm DNA 6 - 11 x
Par de bases 0.33 x 1.1 nm 1 bp 0.33 nm DNA 1x
30
Correlación estructura - función

mecanismos de segregación
en duplicación

Dominios asociados Compactación

topológicamente

Represor transcripcional
Neutralización de cargas
del ADN
Problemas
Que sucede durante la
duplicación y la
transcripción?

31
 Por disminuir el
límite de
resolución del
microscopio
óptico

32
Niveles de compactación

Compactación debida al scaffold / matriz nuclear

Compactación debida a histonas

Tamaño compacto DNA longitud compactado

Núcleo (humano) 2 x 23 = 46 cromosomas 92 moléculas ADN 10 m esfera 12,000 Mbp 4 m DNA 400,000 x
Cromosma mitótico 2 cromátides, 1 m espesor 2 moléculas ADN 10 m forma X 2x 130 Mbp 2x 43 mm DNA 10,000 x
Dominio de ADN Bucle de AND anclado 1 replicón ? 60 nm x 0.5 m 60 kbp 20 m DNA 35 x
Fibra de cromatina approx. 6 nucleosomas por vuelta of 11 nm 30 nm diámetro 1200 bp 400 nm DNA 35 x
nucleosoma disco 1 ¾ vueltas de ADN (146 bp) + ADN linker 6 x 11 nm 200 bp 66 nm DNA 6 - 11 x
Par de bases 0.33 x 1.1 nm 1 bp 0.33 nm DNA 1x
33
Correlación estructura - función

mecanismos de segrega-
ción en duplicación

Dominios asociados Compactación

topológicamente

Represor transcripcional
Problemas
Que sucede durante la
Neutralización de cargas duplicación y la
del ADN transcripción?

34
Microscopía STED

STimulation
Emission
Depletion

35