Cuestionarios Mole

UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE
CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA
NRC: 9186
Integrantes: Asencio Merelyn, Gavilánez Sebastián, Guillén Vanessa, Sagasti Camila, Solís
Nathalia, Torres Diana.
GRUPO Nº4: “Vanessa y sus chaperoninas”
CAPÍTULO 5.2: Clonación del DNA y caracterización
En la clonación del DNA se utiliza una variedad de técnicas, una de estas es conocida
como tecnología de DNA recombinante, lo cual permite que los investigadores preparen
grandes cantidades de moléculas de DNA idénticas.
Las enzimas de restricción cortan el DNA generando fragmentos que tiene una “cola” de
hélice sencilla en ambos extremos, estos fragmentos son complementarios a otros
fragmentos generados por la misma enzima de restricción. Estos fragmentos se unen o
se insertan al vector de DNA con la ayuda de una DNA ligasa.
Los plásmidos más comúnmente utilizados en la tecnología del DNA recombinante son
aquellos que se replican en E. coli , se han diseñado estos plásmidos para usarlos como
vectores en la clonación de DNA esto se realiza a través de la introducción de un
fragmento de DNA a un vector plasmídico y este al replicarse replica el fragmento pero
no todas las bacterias lo tienen así que se trata de clasificar en las que tienen y las que
posteriormente esta reproduce
Figura 1. Componentes básicos de un vector de clonación plasmídico que puede replicarse

dentro de una célula de E. coli (a la izquierda) y componentes de un vector lanzadera para la
clonación de genes de Saccharomyces (a la derecha).
(ARS) secuencia de replicación autónoma, (CEN) centrómero de levadura, (URA3) marcador
seleccionable, (ORI y ampr) secuencias para la replicación y la selección en E. coli y un policonector.
Las bibliotecas de cDNA representan las secuencias de los genes que codifican
proteínas. Los cDNA preparados mediante transcripción inversa de los mRNA celulares
pueden clonarse para generar bibliotecas de cDNA. El paso fundamental para la
preparación de una biblioteca de cDNA es aislar el mRNA total de un tipo de célula o
tejido de interés.
La enzima transcriptasa inversa, que se encuentra en los retrovirus, se emplea para

sintetizar una hebra de DNA complementario a cada molécula de mRNA, a partir de un
cebador oligo-dT. Las moléculas híbridas cDNA-mRNA resultantes son convertidas, en
moléculas de cDNA doble hebra correspondientes a todas las moléculas mRNA en la
preparación original. Cada clon lleva un cDNA derivado de un mRNA único. Los clones
de cDNA de transcripción abundante estarán representados en una biblioteca. Los clones
de cDNA de transcripción infrecuente no están en la biblioteca.
Se encuentran disponibles dos técnicas generales para la búsqueda de bibliotecas, con el

fin de identificar clones que llevan un gen u otra región del DNA de interés: (1)
detección con sondas de oligonucleótidos que se unen al clon de interés y (2) detección
basada en la expresión de la proteína codificada. La base para la búsqueda con sondas de
oligonucleótidos es la hibridación.
Para que un oligonucleótido sea útil como sonda, debe ser lo suficientemente largo
como para que su secuencia aparezca únicamente en los clones de interés y no en otros
clones. Oligonucleótidos que contienen unos 20 nucleótidos. Con los instrumentos
automatizados hoy disponibles, los investigadores pueden programar la síntesis química
de oligonucleótidos de una secuencia específica de hasta unos 100 nucleótidos. Si se
encuentra una coincidencia, una sonda de DNA única con base en esta secuencia
genómica conocida se hibridará perfectamente con el clon que codifica la proteína de
interés.
La estrategia de búsqueda de una biblioteca para expresar una proteína funcional que
complemente una mutación recesiva podría constituir un modo eficiente para aislar un
gen clonado que corresponda a una mutación recesiva de interés, identificada en un
organismo experimental. Las bibliotecas entre secuencias génicas de levadura suelen
construirse a partir de DNA genómico, más que de cDNA.
Un vector lanzadera es el que tiene la capacidad de propagación en dos huéspedes

diferentes. Por ejemplo, para construir una biblioteca genómica de plásmidos y que sea
rastreada por complementación funcional en células de levadura, el vector plasmídico
debe ser capaz de replicarse tanto en células de E. coli como en células de levadura.
Además, para aumentar la probabilidad de que todas las regiones del genoma de
levadura sean clonadas y representadas de manera exitosa, el DNA genómico solo es
digerido parcialmente para obtener fragmentos de restricción superpuestos de
aproximadamente 10 kb.
CUESTIONARIO
1) El DNA de doble hebra (dúplex) puede desnaturalizarse a hebras simples

mediante _______________ en una solución salina diluida. Si luego se _______ a
la temperatura y se ____________ la concentración de iones, las hebras simples
complementarias volverán a asociarse (se ___________) para formar dúplex.
a) calentamiento, baja, aumenta, separarán.

b) calentamiento, sube, aumenta, hibridarán.
c) enfriamiento, baja, aumenta, hibridarán.
d) calentamiento, baja, aumenta, hibridarán.
2) Las enzimas de restricción BamHI y Sau3A, son utilizadas para preparar tanto
el vector lanzadera como el ADN genómico de levadura, debido a que:
a) Producen los mismos extremos cohesivos.

b) Su sitio de reconocimiento es diferente.
c) Producen los mismos extremos romos.
d) El microorganismo fuente es el mismo.
3) Si se quiere preparar los cDNA de ______ hebra para la clonación el investigador

debe ______ ambos extremos de los cDNA mediante _______.
a) única, separar, DNAreductasa

b) doble, separar, mRNA
c) unica, ligar, DNAligasa
d) doble, ligar, DNAligasa
4) Se le denomina biblioteca de DNA a:
a) Conjunto de clones que colectivamente representan todas las secuencias de

DNA en el genoma.
b) Una colección de moléculas de DNA, cada una clonada en una molécula
vector.
c) Conjunto de organismos que suelen contener secuencias intrónicas muy largas.
d) Secuencia de ADN que forma parte de un gen, pero no codifica ninguna
secuencia de aminoácidos de la proteína respectiva.
5) Las colas, en los ____________ generados en un sitio de restricción determinado,
son __________ a aquellas en todos los otros fragmentos generados por la misma
________ de restricción.
a) sitios, opuestas, enzima.

b) fragmentos, opuestas, DNA polimerasa.
c) fragmentos, complementarias, enzima.
d) sitios, complementarias, enzima.
6) Los plásmidos de que bacteria son los más usados en la clonación de fragmentos
de DNA :
a) Escherichia coli
b) Staphylococcus aureus
c) Bacillus subtilis
d) Mycobacterium tuberculosis.
13/2/23, 21:01 UIII (7160) Prueba Parcial de Biología Molecular Aplicada
UIII (7160) Prueba Parcial de Biología Molecular

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LOS EXTRACTOS DE PROTEÍNAS QUE CARGAS EN UN GEL DE POLIACRILAMIDA POSEEN SDS 1/1
PARA
DESCARGARLAS Y ASÍ PUEDEN MIGRAR LIBREMENTE POR EL GEL
CARGAR LAS PROTEÍNAS POSITIVAMENTE Y ASÍ SE SEPARAN POR EL PESO O

TAMAÑO DE LAS MISMAS
CARGAR LAS PROTEÍNAS NEGATIVAMENTE Y ASÍ SOLO SE PUEDEN SEPARAR

EN EL GEL POR LOS DIFERENTES TAMAÑOS ( O PESOS)
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DESPUÉS DE AISLAR Y PURIFICAR EL ARN, SE EMPLEA UNA TRANSCRIPTASA INVERSA 1/1

CUANDO VAS A REALIZAR
UNA PCR
UNA RT-PCR
UNA NORTHERN BLOT
SI USTED ES UN ARN Y QUIERES EVITAR DEGRADARTE CUANDO TE EXTRAEN? ¡QUE HARÍAS? 1/1
ME BAÑO EN AGUA DESTILADA A 4 GRADOS CENTÍGRADOS
ME BAÑARÍA EN UNA RICA AGUA DE DEPC
ME BAÑO EN HELADO Y QUEDO MUY RICO
ME DESESPERO Y ME LAVO CON AGUA DEL GRIFO
SI QUIERES SABER SI UN GEN SE ESTÁ EXPRESANDO EN UN ORGANISMO, QUÉ TÉCNICA/S 1/1

UTILIZARÍAS, SOUTHERN, NORTHERN O WESTERN?
NORTHERN Y WESTERN
NORTHERN ÚNICAMENTE
SOUTHERN
CUANDO REALIZAS UNA EXTRACCIÓN DE RNA, MIDES LA ABSORBANCIA PARA 1/1
SABER SI TIENES CONTAMINACIÓN DE DIFERENTES CLASES ÚNICAMENTE
SABER SI TIENES CONTAMINACIÓN Y TAMBIÉN TE PERMITE CUANTIFICAR LA

MUESTRA
NINGUNA DE LAS ANTERIORES ES VERDADERA
¡CUÁLES SON LOS CICLOS DE LAS PCRs? 1/1
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA, ALINEAMIENTO Y ELECTROFORESIS
EXTRACCIÓN DE ARN, DESNATURALIZACIÓN Y AMPLIFICACIÓN
DESNATURALIZACIÓN, ALINEAMIENTO Y EXTENSIÓN
AMPLIFICACIÓN, ELECTROFORESIS Y ELONGACIÓN
SI QUIERES PRODUCIR GRANDES CANTIDADES DE PROTEÍNAS EN UNA BACTERIAS, A 1/1

TRAVÉS DE UN PLÁSMIDO CONSTRUIDO CON TU GEN DE INTERÉS, ES IMPORTANTE
COLOCARLE
UN PROMOTOR FUERTE
UN PROMOTOR DÉBIL
UN PROMOTOR CUALQUIERA
PARA EL ESTUDIO DE EXPRESIÓN DE MICROMATRICES, SE PREPARAN
DOS TIPOS DE cDNAS MARCADOS FLUORESCENTEMENTE,

CORRESPONDIENTES A 2 ORGANISMOS TRATADOS DE FORMA DIFERENTE
DOS TIPOS DE cDNAS MARCADOS FLUORESCENTEMENTE, CORRESPONDIENTES

A 2 ORGANISMOS TRATADOS CON LAS MISMAS CONDICIONES
DOS TIPOS DE RNAs MARCADOS FLUORESCENTEMENTE, CORRESPONDIENTES A

2 ORGANISMOS TRATADOS CON DIFERENTES CONDICIONES
EN UNA PCR, PARA AMPLIFICAR UNA REGIÓN ESPECÍFICA DE DNA, EL INVESTIGADOR *1/1
DISEÑARÁ Y SINTETIZARÁ (A TRAVÉS DE ALGÚN LABORATORIO ESPECIALIZADO)
DOS TIPOS DE POLIMERASAS PARA REALIZAR LA REACCIÓN
DOS CEBADORES DE OLIGONUCLEÓTIDOS (DE 18 PARES DE BASES

APROXIMADAMENTE) COMPLEMENTARIOS A LAS SECUENCIAS QUE
FLANQUEAN LA REGIÓN DE INTERÉS
DOS SECUENCIAS DE ADN COMPLEMENTARIO
EL TRIZOL ES FANTÁSTICO PARA EXTRAER RNA PORQUE 1/1
SIRVE PARA SALIR DE VACACIONES
ES UNA VÍA SEGURA PORQUE NO CONTAMINA EL RNA CON COVID
MANTIENE LA INTEGRIDAD DEL ARN, INHIBIENDO RNAsas
SIRVE PARA PRECIPITAR EL RNA
CUAL ES EL OBJETIVO DEL RNA-seq 1/1
OBSERVAR LA VIDA EN UN DETERMINADO MOMENTO
OBSERVAR PATRONES DE EXPRESIÓN DE GENES A TRAVÉS DEL ANÁLISIS DEL

UN RNA, EN UN MOMENTO DADO CON DETERMINADAS CONDICIONES
OBSERVAR PATRONES DE EXPRESIÓN DE GENES A TRAVÉS DEL ANÁLISIS DEL UN

RNA, CON CONDICIONES VARIADAS Y EN DIFERENTES MOMENTOS
SI QUISIERAS PRODUCIR GRANDES CANTIDADES DE UNA PROTEÍNA, COMO ES EL CASO DE 1/1

LA INSULINA
TIENES QUE OBTENER EL RNA DE LA PROTEÍNA Y COLOCARLA EN UN VECTOR DE

EXPRESIÓN (PLÁSMIDO), POSTERIORMENTE COLOCARLA EN UNA CÉLULA
HUÉSPED, QUE PODRÍA SER POR EJEMPLO UNA BACTERIA
TIENES QUE OBTENER EL cDNA DE LA PROTEÍNA Y COLOCARLA EN UN

VECTOR DE EXPRESIÓN (PLÁSMIDO), POSTERIORMENTE COLOCARLA EN UNA
CÉLULA HUÉSPED, QUE PODRÍA SER POR EJEMPLO UNA BACTERIA
TIENES QUE OBTENER EL DNA GENÓMICO DE LA PROTEÍNA Y COLOCARLA EN UN

VECTOR DE EXPRESIÓN (PLÁSMIDO), POSTERIORMENTE COLOCARLA EN UNA
CÉLULA HUÉSPED, QUE PODRÍA SER POR EJEMPLO UNA BACTERIA
EN EL GEL DE POLIACRILAMIDA QUE REALIZARON PARA CORRER LAS PROTEÍNAS, 1/1

MANTIENES A LAS PROTEÍNAS
DESNATURALIZADAS
DEGRADADAS
RENATURALIZADAS
LOS VECTORES DE CLONACIÓN DE E.COLI, SON MOLÉCULAS PEQUEÑAS DE DNA CIRCULAR 1/1
(PLÁSMIDOS) QUE INCLUYEN TRES REGIONES FUNCIONALES
UN ORIGEN DE REPLICACIÓN, UN GEN RESISTENTE A FÁRMACOS Y UN SITIO

DONDE PUEDE INSERTARSE UN FRAGMENTO DE DNA DE INTERÉS
UN ORIGEN DE TERMINACIÓN Y UN SITIO DONDE PUEDE INSERTARSE UN

FRAGMENTO DE DNA DE INTERÉS
UN ORIGEN DE TERMINACIÓN, UN GEN RESISTENTE A FÁRMACOS Y UN SITIO

DONDE PUEDE INSERTARSE UN FRAGMENTO DE DNA DE INTERÉS
LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN SE UTILIZAN PARA 1/1
CORTAR TROZOS DE PROTEÍNAS
CORTAR Y UNIR TROZOS DE DNA
CORTAR TROZOS DE DNA (ENDONUCLEASAS)
PARA REALIZAR UN ESTUDIO DE MICROMATRICES (MICROARRAYS) ES NECESARIO 1/1

PREPARAR cDNAs MARCADOS FLUORESCENTEMENTE CON LOS CORRESPONDIENTES
mRNAs EXPRESADOS POR LAS CÉLULAS DEL EXPERIMENTO QUE SE ESTÁ

REALIZANDO
DNAs GENÓMICOS DE LAS CÉLULAS DEL EXPERIMENTO QUE SE ESTÁ

REALIZANDO
NINGUNA DE LAS RESPUESTAS ANTERIORES ES VERDADERA
EL AZÚL DE BROMOFENOL, EN UNA CORRIDA ELECTROFORÉTICA DE PROTEÍNAS (EN UN GEL 1/1

DE POLIACRILAMIDA), SE UTILIZA PARA
PODER VISUALIZAR LAS BANDAS, DESPUÉS DE HABER CORRIDO A LA

ELECTROFORESIS
TEÑIR LAS PROTEÍNAS Y PODER VISUALIZAR SUS BANDAS EN EL GEL
TEÑIR LAS PROTEÍNAS EN EL MOMENTO DE CARGAR EL GEL, PERO LUEGO SE

PODRÁN VISUALIZAR, PORQUE SE TEÑIRÁN CON SOLUCIÓN DE TINCIÓN CON
COOMASIE
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13/2/23, 21:02 UIII (7160) Prueba de Fin de Unidad de Biología Molecular Aplicada
UIII (7160) Prueba de Fin de Unidad de Biología

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¡QUE FUNCIÓN TIENE EN LA ELECTROFORESIS LA SOLUCIÓN DE BROMURO DE ETIDIO? 0/1
ES UN INTERCALANTE QUE SE UTILIZA COMO COLORANTE FLUORESCENTE PARA

VISUALIZAR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
MANTIENE EL PH CONSTANTE EN MIENTRAS SE TIÑE EL ADN CON UN

COLORANTE FLUORESCENTE
PERMITE QUE LA SOLUCIÓN CON AGAROSA SE POLIMERICE
Respuesta correcta
ES UN INTERCALANTE QUE SE UTILIZA COMO COLORANTE FLUORESCENTE PARA

VISUALIZAR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
EN UN PLÁSMIDO SE PUEDE UTILIZAR UN GEN QUE CODIFICA PARA UNA PROTEÍNA QUE DA 1/1
COLOR Y SE LE LLAMA
GEN NATURICOLOR
GEN CONSTITUTUVO
SOBREEXPRESIÓN DE UN GEN
NO HAY OPCIÓN VERDADERA
¡CUÁLES BUFFERS DE CORRIDA SE UTILIZAN EN LA ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA? 1/1
TAMPÓN BICARBONATO
TBE Y TAE
SÓLO TBE
SOLO TAE

¡CUÁL ES LA PROTEÍNA PURA ESTÁNDAR QUE SE UTILIZA GENERALMENTE PARA LA 1/1
CONSTRUCCIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN DE PROTEÍNAS, CON EL FIN DE
DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN DE LAS PROTEÍNAS TOTALES DE LAS MUESTRAS QUE SE
VAN A ANALIZAR?
MIOSINA SÉRICA BOVINA O MSB
FIBRINA SÉRICA BOVINA O FSB
NINGUNA DE LAS ANTERIORES ES VERDADERA
EL ESQUEMA BÁSICO PARA EL ADN RECOMBINANTE ES 1/1
UN FRAGMENTO DE ADN Y UN FRAGMENTO DE DNA DE CROMOSOMA

BACTERIANO
UN FRAGMENTO DE ADN Y UN VECTOR
UN FRAGMENTO DE ADN Y 4 DESOXIRIBONUCLEÓTIDOS TRIFOSFATADOS
LAS ENFERMEDADES HEREDITARIAS MUESTRAN QUE UN TRASTORNO AUTOSÓMICO 1/1

RECESIVO NECESITA
AMBOS ALELOS MUTANTES PARA EXPRESAR LA ENFERMEDAD
UNA DIVERSIDAD DE ALELOS PARA EXPRESAR LA ENFERMEDAD
SOLO UN ALELO MUTANTE PARA EXPRESAR LA ENFERMEDAD

CUÁL ES EL ISÓTOPO RADIACTIVO MAS UTILIZADO PARA EL MARCAJE DE UNA SONDA DE 1/1
SOUTHERN
CARBONO 14
POTASIO 40
FÓSFORO 32
COCA COLA EN LAS ROCAS
EL BROMURO DE ETIDIO SE UTILIZA 1/1
PARA VISUALIZAR LAS MEMBRANAS FOSFOLIPÍDICAS
PARA VISUALIZAR LAS BANDAS DE DNA
PARA VISUALIZAR LAS PROTEÍNAS INCREMENTANDO SU FLUORESCENCIA
QUE ENZIMAS PERMITEN LA INSERCIÓN DE UN FRAGMENTO DE ADN DE INTERÉS EN UN 1/1

VECTOR
ENDONUCLEASAS Y ADN POLIMERASAS
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Y ADN LIGASAS
ADN LIGASAS Y ATPasas
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Y ENDONUCLEASAS
EL COSTO DE LA PCR CONVENCIONAL, REPRESENTA UNA VENTAJA SOBRE LA PCR EN *1/1

TIEMPO REAL?
VERDADERO
FALSO
QUÉ NECESITA LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA, PARA OBTENER UN GRAN 1/1

NÚMERO DE COPIAS?
CADENA MOLDE Y TAQ POLIMERASA, CEBADORES, DESOXINUCLEÓTIDOS

TRIFOSFATADOS

TRIFOSFATADOS Y FLUOROCROMOS

TRIFOSFATADOSY FLUORESCENCIA
UN BUEN CAFÉ O TÉ HELADO CON DESOXINUCLEÓTIDOS TRIFOSFATADOS
LAS ENFERMEDADES RESULTANTES DE MÚLTIPLES CAUSAS, COMO LA DIABETES Y LA 1/1

OBESIDAD, SON:
ENFERMEDADES MONOGENÉTICAS
ENFERMEDADES HETEROGENÉTICAS
UNA ENFERMEDAD RECESIVA LIGADA AL CROMOSOMA X ES CAUSADA POR UNA 1/1
MUTACIÓN RECESIVA EN EL CROMOSOMA X Y ENTONCES...
PRESENTA UN PATRÓN AUTOSÓMICO DOMINANTE
PRESENTA UN PATRÓN AUTOSÓMICO RECESIVO
LOS DOS GELES DE QUE HICISTE PARA LA ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS SE DIFERENCIAN 1/1
POR
LA CANTIDAD DE AGAROSA
LA RIGIDEZ
LA POROSIDAD
EN QUÉ TÉCNICA UTILIZAS ANTICUERPOS 1/1
EN SOUTHERN BLOT
EN WESTERN BLOT
EN NORTHERN BLOT
CUANDO REALIZAS UNA GEL DE POLIACRILAMIDA, ¿ POR QUÉ COLOCAS EL TEMED Y EL APS 1/1
AL FINAL ?
PORQUE TIENES GANAS DE IRTE DE VACACIONES PRONTO
PORQUE SI NO, EL GEL SE DESINTEGRA
PORQUE SI LO COLOCAS ANTES, EXPLOTA
NO HAY RESPUESTA VERDADERA
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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS “ESPE”
CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA
Integrantes: Brandon Bedon, María Emilia Durán, Karen Morales, Stefanny Piedra y
Alexander Tapia
NRC: 9186
Fecha de entrega: 02/02/23
Resumen
Para realizar técnicas moleculares como Southern Blot o RNA seq es necesario
conocer conceptos clave como lo es la extracción y cuantificación y electroforesis de
DNA.
Extracción y cuantificación de ADN
La extracción comienza con la homogeneización del tejido y la lisis con sustancias

capaces de romper las membranas celular y nuclear, y liberar el ácido nucleico de la
muestra. Posteriormente se realiza el proceso de purificación, que permite obtener
un ADN libre de moléculas contaminantes, esto se consigue con soluciones de
cloroformo/isoamil alcohol. El ADN disuelto en la solución acuosa se precipita
añadiendo alcohol absoluto (isopropanol o etílico), ya que los ácidos nucleicos son
insolubles en soluciones alcohólicas; una centrifugación posterior permite la
obtención de una pastilla o botón del ácido nucleico en el fondo del tubo, al decantar
el alcohol. Finalmente se realiza un lavado del ADN obtenido en la precipitación con
etanol al 70%.
La cuantificación de ácidos nucleicos de una muestra se puede realizar utilizando la
espectrofotometría si la muestra es pura o cuantificando la fluorescencia emitida por
bromuro de etidio de una muestra si esta es impura. En la espectrofotometría se
toma en cuenta que los nucleótidos de ADN y ARN presentan la absorción máxima
a una longitud de onda de 260 nm (luz ultravioleta, UV). Mientras más luz absorba la
muestra (absorbancia) mayor será la concentración de ácidos nucleicos. El método
fluorimétrico proporciona ventajas clave como una sensibilidad significativamente
mayor, alta selectividad por el ADN bicatenario y mayor tolerancia a contaminantes.
Electroforesis
La electroforesis es una de las metodologías más utilizadas en el laboratorio en todo

lo relacionado con el trabajo con ácidos nucleicos. Mediante la electroforesis
podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño, visualizarlos
mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos
nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de
entereza. Podemos además extraer del gel los fragmentos de ADN que sean de
interés, para posteriormente utilizarlos en diferentes aplicaciones. El razonamiento
de esta técnica es que una combinación de fuerzas eléctricas y de fricción permite el
desplazamiento y separación en función del tamaño o topología de diferentes
moléculas de ADN. (Fierro, 2014).
Técnica Southern Blot
El análisis Southern blot es un método de laboratorio que se utiliza para estudiar el

ADN. Específicamente, el ADN purificado proveniente de una muestra biológica
(como sangre o tejido) se digiere mediante una enzima de restricción, y los
fragmentos de ADN resultantes se separan mediante corriente eléctrica para
hacerlos desplazar a través de un gel o matriz similar a un tamiz, que permite que
los fragmentos más pequeños se desplacen más rápido que los fragmentos más
grandes. Los fragmentos de ADN se transfieren fuera del gel o de la matriz a una
membrana sólida, que luego se expone a una sonda de ADN marcada con una
sustancia radioactiva, fluorescente o química. La marcación permite que los
fragmentos de ADN que contienen secuencias complementarias a la secuencia de
ADN utilizada como sonda sean visualizados en el Southern blot. El método recibió
su nombre debido a su creador, el biólogo molecular británico Edwin Southern.
RNA seq
Es una herramienta que permite evaluar el estado transcripcional de un organismo,

órgano o tejido, para comparar distintos tratamientos, condiciones, o estados de
desarrollo, donde su fundamento es la hibridación de un conjunto de moléculas de
RNA marcadas, tales como los microarreglos. Para realizar esta técnica se cuenta
con 6 pasos bases: extracción de RNA, enriquecimiento del RNAm, preparación de
libraries, ensamblaje de novo, mapeo de la lectura y análisis de los resultados.
Algunas de las técnicas más utilizadas para la secuenciación son: por síntesis, por
semiconducción y en tiempo real de molécula única o SMRT-seq, cada uno posee
diferentes características en cuanto a la secuenciación, siendo la técnica SMRT-seq
la de mejor calidad, debido a que cada fragmento se secuencia de manera continua
múltiples veces al estar circularizado; lo cual permite deducir la secuencia del mRNA
original a partir del consenso que se obtiene al eliminar la secuencia de los
adaptadores y alinear a las sub lecturas resultantes
Bibliografía
Fierro, F. F. (2014). Electroforesis de ADN. Herramientas moleculares aplicadas en

ecología: aspectos teóricos y prácticos, 27.
Jiménez-Ruiz, J., & Luque-Vázquez, F. (2014). Análisis transcriptómico mediante

RNAseq en el olivo.
Molecular Devices. (nd). Detección, cuantificación y análisis de ácidos nucleicos

(ADN/ARN). Obtenido de:
www.es.moleculardevices.com/applications/nucleic-acid-detection-quantitatio
n-and-analysis
National Human Genome Research Institute. (2023). Southern blot. genome.gov.

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Southern-Blot
Rodríguez-Alonso, G., & Shishkova, S. (2019). Estudio del transcriptoma mediante
RNA-seq con énfasis en las especies vegetales no modelo. Revista de
Educación Bioquímica, 37(3), 75-88.
Velázquez, L. P. A., Martínez, M. D. C. A., & Romero, A. C. (2014). Extracción y

purificación de ADN. Herramientas moleculares aplicadas en ecología:
aspectos teóricos y prácticos, 1.
- Preguntas
1. El método fluorimétrico presenta una sensibilidad significativamente mayor a

comparación del método espectrofotométrico. Verdadero
2. La lisis celular se realiza con sustancias capaces de romper:

a. Las membranas celular y nuclear
b. El ácido nucleico de la muestra
c. Las moléculas contaminantes
d. Todas las anteriores
e. Ninguna de las anteriores
3. Responda verdadero o falso

En la técnica de electroforesis la carga neta negativa del ADN y el ARN hará
que estos se muevan en dirección al cátodo. Falso
4. ¿Qué equipo de laboratorio se utiliza para visualizar los resultados en

electroforesis?
a. Electrocardiograma
b. Microscopio electrónico
c. Microscopio de campo oscuro
d. Espectofotómetro
5. ¿Cuál es una de las funciones de la técnica de RNA-seq?

a. Detectar polimorfismos de una sola base a isoformas
b. Ayudar a la secuenciación
c. Detectar pares de bases rotas
d. Detectar la transcripción de genes que se expresan a niveles
excesivamente altos
6. ¿Cuál es el segundo paso para realizar la técnica de RNA-seq?

a. Extracción de RNA total
b. Preparación libraries
c. Enriquecimiento de RNAm
d. Ensamblaje de novo
7. En la técnica de secuenciación por síntesis, Después de que el
nucleótido se agregó a la cadena naciente se capturan:
a. Tres imágenes
b. Cuatro imágenes
c. Dos imágenes
d. Ninguna de las anteriores
8. ¿ Cómo ocurre la secuenciación por semiconducción?
a. Mediante la inyección controlada de cada nucleótido de forma
secuencial a los micropozos.
b. Mediante la adición consecutiva de nucleótidos modifcados que
incluyen un fuoróforo específco para cada base nitrogenada
c. Mediante nucleótidos con marcas fluorescentes en el extremo
trifosfatado y adaptadores que circularizan al fragmento de cDNA a
secuenciar.
9. Enumere y describa las etapas de la técnica Southern Blot

1. Extracción del ADN: se extrae el ADN cromosómico
2. Escisión del ADN: se fragmenta el ADN empleando enzimas de restricción.
3. Electroforesis: se separan los fragmentos de ADN de acuerdo al tamaño
en un gel a lo largo de un campo eléctrico.
4. Transferencia: Los fragmentos de ADN se transfieren fuera del gel a una
membrana sólida
5. Hibridación: Se añade la muestra de ADN marcada con una sustancia
radioactiva, fluorescente o química, para hacer la hibridación con el ADN
complementario, luego se incuba con sonda y se lava.
6. Visualización: puede revelarse mediante autorradiografía para una sonda
radiomarcada o por imagen fluorescente para una sonda marcada con
fluorescencia.
10. Conteste verdadero o falso.

La técnica Southern Blot es la primera técnica de hibridación empleada para
detectar fragmentos de DNA de una secuencia específica.
Verdadero
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
Carrera de Ingeniería en Biotecnología
Biología Molecular Aplicada
Integrantes: Karina Álvarez, Karen Gavilánez, Kelvin Mena, Keren Puente, Nicole Villacis
INTRODUCCIÓN
Las técnicas moleculares son un conjunto de métodos que permiten manipular y estudiar
moléculas individuales, como ADN, ARN y proteínas. Son importantes porque permiten
comprender el funcionamiento de las células y los organismos en un nivel molecular, lo que
lleva a una mayor comprensión de enfermedades, evolución y biotecnología.
WESTERN BLOT
Es una técnica utilizada en los inmunoensayos para identificar proteínas dentro de una
muestra. Para la identificación se usa el epítopo único de cada proteína.
● Técnica de extracción
Selección del Buffer de lisado

Se debe escoger el buffer de lisis tomando en cuenta características como su capacidad
para solubilizar las proteínas y la localización de la proteína dentro de la células
Preparación del lisado
● Cultivo celular: Los pasos para este tipo de muestra consiste en dejar crecer las
células, lavar con PBS, extraer el PBS y agregar el
buffer previamente enfriando, las células
suspendidas ubicarlas a un tubo de centrífuga y
centrifugar a 4°C, colocar en hielo y finalmente
obtener el sobrenadante y descartar el pellet.
● Tejido: Los pasos para este tipo de muestra

consiste en colocar el tejido en suero salino a 4ºC y
seccionar, colocar el tejido en tubos Eppendorf y
criogenizar en nitrógeno líquido, añadir el buffer de
lisado y homogeneizar, centrifugar a 4ºC, colocar en
hielo y finalmente obtener el sobrenadante y
descartar el pellet.
Determinación de la concentración de proteínas

La concentración de la proteína puede realizarse mediante ensayo Bradford, ensayo Lowry
o ensayo BCA.
Preparación de la muestra para carga en gel

● Proteínas desnaturalizadas: el anticuerpo tenga más fácil acceso al epítopo que
reconoce
● Proteínas nativas: , el anticuerpo no reconoce un epítopo lineal en la proteína, sino
un epítopo conformacional
Electroforesis
Este proceso permite separar proteínas de acuerdo con su peso molecular al someterlas a
un campo eléctrico.
Se coloca la muestra en pocillos en un gel de poliacrilamida, que contiene un buffer de
carga y azul de bromofenol. Debido a que las proteínas están cargadas negativamente la
migración de las proteínas se hace desde el cátodo al ánodo. Se realiza una tinción con
azúl de Coomassie para visualizar las bandas de proteína.
Después de esto es necesario realizar la transferencia de las proteínas a una membrana
PVDF o de nitrocelulosa. A continuación se efectúa una inmunotinción, donde se agregarán
anticuerpos marcados que sean afines a la molécula de interés. Finalmente, para la
visualización de las bandas se utiliza una película de rayos X.
MICROARRAYS
Los microarreglos constituyen una distribución ordenada de más de 10 mil genes por cm2
en una pequeña superficie, del tamaño de un portaobjetos, en el cual pueden estudiarse
simultáneamente mediante hibridación y puede obtenerse una interpretación instantánea de
la expresión de múltiples genes en un solo análisis.
Preparación de microarrays
● Se amplifican por PCR ≈ 1 kb de la región

codificante de cada gen analizado.
● Un dispositivo robótico aplica cada muestra de
DNA amplificado a un portaobjeto de vidrio.
● Adherir las secuencias de DNA químicamente.
Una matriz 2x2 cm tiene ≈ 6000 puntos de DNA
Uso de microarrays
● Preparar cDNA marcados con fluorescencia

que corresponden a los mRNA de células de
estudio.
● Aplicar los cDNA a una micromatriz
● Condiciones adecuadas para la hibridación.
● Detección con microscopio láser
PREGUNTAS
1. La técnica Western blot se usa para obtención de:

a. Proteínas
b. ADN
c. ARN
2. ¿Qué desventaja presenta el utilizar los buffers de lisado con detergentes iónicos?
a. Las proteínas se pueden degradar
b. Las proteínas pueden ser digeridas
c. Las proteínas se pueden desnaturalizar
3. Al realizar la electroforesis de proteínas, ¿Qué gel se utiliza?
a. Agarosa
b. Poliacrilamida
c. Membrana de nitrocelulosa
4. En el microarray, una sonda corresponde a:
a. DNA marcado
b. RNA marcado
c. DNA fijado al chip
5. Al realizar un microarray se marca con fluorescencia:
a. mRNA de las células de estudio.
b. cDNA de las células de estudio.
c. Cada gen analizado con un color diferente.
Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE”
Ingeniería en Biotecnología
Departamento de ciencias de la vida y agricultura
Biología Molecular Aplicada

Nombres: Alexandra Gonzalez, Adriana Lara, Leslye Haro, Lamiña Marilyn,
Maria José Brito, Tonato Jessy
NRC: 9186
Fecha: 30/01/2023
EXTRACCIÓN ARN
Es un método por el cual se aísla este tipo de material genético utilizando técnicas físicas y
químicas. La extracción consiste en la separación de polímeros de RNA con el fin de poder
estudiarlo, analizarlo o manipularlo. Para lograr dicha separación se usan generalmente solventes
orgánicos como fenol y cloroformo. En la investigación biomédica se suele utilizar como un paso
previo para separar y estudiar los RNA mensajeros y así conocer la expresión génica en una
enfermedad o en alguna condición de interés.
Recursos- Material
● Material biológico: Células, tejidos, órganos o fluidos corporales
● Proteasas: sirven para la degradación de proteínas que se unen al RNA.
● Solventes orgánicos: soluciones que diluyen a un soluto y permite la dispersión de otras
sustancias para su separación.
● DNAsa I: enzima que degrada cadenas de DNA .
● Centrífuga: equipo que ayuda a acelerar el proceso de separación de componentes de
diferentes densidades mediante la rotación de una muestra.
● Espectrofotómetro: equipo que sirve para medir la concentración de ácidos nucleicos como
el RNA.
Procedimiento de extracción de ARN
Obtención del material biológico
● Lisis celular: es el proceso físico o químico por el cual se rompe la membrana celular y
nuclear.
● Degradación de proteínas: se rompen las proteínas que interactúan con el ARN .
● Proceso de Separación: procesos físicos (centrífuga) o químicos ( solventes) mediante los
cuales se aíslan y separan diferentes componentes celulares como lípidos, proteínas, ARN
, ADN , moléculas pequeñas.
● Degradación de ADN por DNAsa I: proceso que rompe específicamente cadenas ADN con
el fin de evitar contaminación de este material.
● Solubilización del ARN: se diluye el ARN en un volumen conocido de agua ultra pura.
Cuantificación de ARN
NOTHERN BLOT
La técnica de Northern blot es una técnica utilizada para estudiar la expresión de los genes. Se
realiza mediante la detección de un ARN específico (o ARNm aislado). El ARNm suele estar
representado en un 5% de la secuencia total de ARN. Este método revela la identidad, el
número, la actividad y el tamaño del gen concreto.
Específicamente, los fragmentos de ARN purificados provenientes de una muestra biológica
(como sangre o tejido) se separan mediante corriente eléctrica para hacerlos desplazar a través
de un gel o matriz similar a un tamiz, que permite que los fragmentos más pequeños se
desplacen más rápido que los fragmentos más grandes. Los fragmentos de ARN se transfieren
fuera del gel o de la matriz a una membrana sólida, que luego se expone a una sonda de ADN
marcada con una sustancia radioactiva, fluorescente o química. La marcación permite que los
fragmentos de ARN que contienen secuencias complementarias a la secuencia de ADN
utilizada como sonda sean visualizados en el Northern blot.
APLICACIONES DE NOTHERN BLOT

● La técnica se puede utilizar para la identificación y separación de fragmentos de ARN
recolectados de diferentes fuentes biológicas.
● La transferencia Northern se utiliza como una prueba sensible para la detección de la
transcripción de fragmentos de ADN que se utilizarán como sonda en la transferencia
Southern.
● También permite la detección y cuantificación de ARNm específicos de diferentes tejidos y
diferentes organismos vivos.
● La transferencia Northern se utiliza como herramienta para los estudios de expresión
génica relacionados con la sobreexpresión de genes que causan cáncer y la expresión
génica durante el rechazo de trasplantes.
SOUTHERN BLOT
La técnica de Southern blot la desarrolló, en 1975, Edwin Southern y es una estrategia
estándar para analizar ADN previamente digerido con enzimas de restricción. Esta técnica se
utiliza para determinar la presencia de un gen o fragmentos del ADN específicos en una mezcla
de ácidos nucleicos previamente extraídos. Se basa en la aplicación de dos procesos
fundamentales: la desnaturalización o separación de las cadenas complementarias del ADN y
la hibridación o unión de dos cadenas complementarias. Este fundamento es compartido por
todas las técnicas de hibridación.
WESTERN BLOT
Western blot es una técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en
una muestra de sangre o tejido. El método implica el uso de electroforesis en gel para separar
las proteínas de la muestra. Las proteínas separadas se transfieren del gel a la superficie de
una membrana. La membrana se expone a un anticuerpo específico contra la proteína en
estudio. La unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radiactivo o químico. Un
Western Blot se utiliza a veces para diagnosticar enfermedades.
BIBLIOGRAFÍA:
Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ARN total. Conogasi.org Sitio web:
https://conogasi.org/articulos/extraccion-de-arn-total/
Contreras, R. (2014, 8 abril). Northern blot | La guía de Biología. La Guía.

https://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-biologia/northern-blot
CUESTIONARIO:
1. La extracción consiste en la separación de polímeros de RNA con el fin de poder:

a. Estudiarlo
b. Analizarlo
c. Manipularlo
d. Todas las anteriores
2. Una desventaja de la técnica Northern Blot es:
a. Uso de quimioluminiscencia
b. visualización de productos de empalme alternativo
c. Degradación de muestra por RNAsas.
2. Qué visualiza el mètodo de Northern Blot?
a. Proteìnas e Histonas
b. ADN modificado
c. ARN complementario
d. ARN ribosomal
3. ¿Para qué se usa la técnica de Western Blot?
a. Observar componentes de la muestra

b. Identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de las mismas, como la que
se presenta en extractos celulares o de tejidos.
c. Complementar otro proceso anexo en la muestra
4. ¿Para qué se utiliza la técnica del Southern Blot?
a. Determinación de ARNm
b. Encontrar proteínas
c. Detectar secuencias específicas de ADN
d. Diferenciar extractos en la muestra
5. ¿Nothern blont permite la detección y cuantificación de ARNm específicos de diferentes tejidos

y organismos vivos? Verdadero
6. La lisis celular consiste en el proceso físico o químico por el cual se rompe la membrana celular
y nuclear. (V)
7. El proceso de separación se puede dar únicamente por procesos fisicos cómo la centrifugación
mediante los cuales se aíslan y separan diferentes componentes celulares como lípidos,
proteínas, ARN , ADN (F)

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UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA

GRUPO Nº4: “Vanessa y sus chaperoninas”

CAPÍTULO 5.2: Clonación del DNA y caracterización

Figura 1. Componentes básicos de un vector de clonación plasmídico que puede replicarse

La enzima transcriptasa inversa, que se encuentra en los retrovirus, se emplea para

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Un vector lanzadera es el que tiene la capacidad de propagación en dos huéspedes

1) El DNA de doble hebra (dúplex) puede desnaturalizarse a hebras simples

a) calentamiento, baja, aumenta, separarán.

a) Producen los mismos extremos cohesivos.

3) Si se quiere preparar los cDNA de ______ hebra para la clonación el investigador

a) única, separar, DNAreductasa

4) Se le denomina biblioteca de DNA a:

a) Conjunto de clones que colectivamente representan todas las secuencias de

a) sitios, opuestas, enzima.

UIII (7160) Prueba Parcial de Biología Molecular

TIEMPO MÁXIMO 15 MINUTOS

Se ha registrado el correo del encuestado (ralopez11@espe.edu.ec) al enviar este

Romina Abigail López Mendoza

TEMARIO DE LA UNIDAD III (desarrollado en clase) 16 de 16 puntos

DESCARGARLAS Y ASÍ PUEDEN MIGRAR LIBREMENTE POR EL GEL

CARGAR LAS PROTEÍNAS POSITIVAMENTE Y ASÍ SE SEPARAN POR EL PESO O

CARGAR LAS PROTEÍNAS NEGATIVAMENTE Y ASÍ SOLO SE PUEDEN SEPARAR

DESPUÉS DE AISLAR Y PURIFICAR EL ARN, SE EMPLEA UNA TRANSCRIPTASA INVERSA 1/1

UNA NORTHERN BLOT

ME BAÑO EN AGUA DESTILADA A 4 GRADOS CENTÍGRADOS

ME BAÑARÍA EN UNA RICA AGUA DE DEPC

ME BAÑO EN HELADO Y QUEDO MUY RICO

ME DESESPERO Y ME LAVO CON AGUA DEL GRIFO

SI QUIERES SABER SI UN GEN SE ESTÁ EXPRESANDO EN UN ORGANISMO, QUÉ TÉCNICA/S 1/1

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