MÉTODOS DE ANÁLISIS

Detección de proteína por medio de la reacción de Biuret

Materiales
Suplemento proteico
Gelatina sin sabor
Huevo
5 tubos de ensayo
4 pipetas
Agua destilada
3 vasos de precipitado
1 radilla
Reactivo Biuret
1.- Agregamos una pequeña cantidad del suplemento en un vaso de precipitado y
lo diluimos con agua destilada. Con una pipeta medimos 3 ml y lo pasamos a un
tubo de ensayo.
2.- Agregamos una pequeña cantidad de polvo de gelatina sin sabor en un vaso
de precipitado y lo diluimos con agua destilada. Con una pipeta medimos 3 ml y lo
pasamos a un tubo de ensayo.
3.- Separamos la clara y la yema de un huevo, solo se utilizara la clara. Se agrega
la clara en un vaso de precipitado, con una pipeta medimos 3 ml y lo pasamos a
un tubo de ensayo.
4.- Colocamos 5 gotas de reactivo a cada tubo de ensayo y observar la coloración
de la muestra.
Mediante el uso de sustancias como es el reactivo Biuret se pueden identificar
proteínas, que al ponerse en contacto con ellas producen una coloración
específica.
La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la
formación de un complejo de coordinación entre iones Cu2 + y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forman parte de los enlaces
peptídicos.
Refractometria
Materiales
Tubos de ensayo
Vaso precipitado
Algodón
Probeta
Gradilla
Alcohol
Azúcar
Agua
Se prepara la solución de azúcar-agua para concentraciones de porcentaje en
peso: 5, 10, 15, 20, 25, 30, Para todas concentraciones seguir el siguiente
procedimiento para determinar el índice de refracción.
Calibrar el equipo colocando una gota de agua destilada, una vez calibrado
limpiarlo con algodón para secar la muestra, y después algodón con etanol para
eliminar cualquier residuo sobrante.
Una vez limpio el equipo se comienza a colocar las muestras empezando con la
de 5 g y así todas las muestras consecutivamente.
Determinación de fibra cruda
Materiales
3 bolsas para fibra
1 espátula acanalada
1 piceta
3 vasos de precipitado de 1 ml
1 vaso de precipitado de 200 ml
1 crisol
1 pinzas para crisol
1 guantes de asbesto
1 desecador
1 mortero con pistilo
Preparación de la muestra
Pesar cada bolsa vacía y marcarlas para identificación, después se tritura la
muestra de fibra en el mortero hasta quedar polvo, se agrega la muestra en cada
bolsa una bolsa se queda vacía para ser en blanco y ayudar con los cálculos
finales, se sellan las bolsas completamente para así evitar que la muestra se
salga.
Proceso de extracción
Lavado de acetona se sumergen las muestras en acetona y agitarlas
constantemente durante 10 minutos, se tienen que hacer 3 lavados de acetona
diferentes es decir una vez cumplidos los 10 minutos se saca la muestra del
primer lavado y se sumerge en el segundo, y así consecutivamente, al finalizar los
lavados se sacaran las muestras y se colocaran en papel absorbente, presionando
con las manos para así poder quitar la mayor cantidad de acetona posible.
Proceso de digestión
Se colocan las bolsas en el soporte del aparatado como máximo 3 bolsas por cada
nivel y un máximo de 24 bolsas por corrida, colocar un último plato vacío para
finalizar el sistema.
La palanca de drenado debe estar en posición horizontal y agregue de 1900 a
2000 ml de solución de ácido sulfúrico en el analizador de fibras, presione los
botones agitación y git, el nivel del líquido deberá de llegar hasta la altura del
empaque que se encuentra en la parte exterior de la boca del aparato, cierre el
aparato y tenga cuidado de cierra perfectamente la llave, digerir por 45 minutos y
después se apaga el aparato y con la ayuda de guantes de asbesto vamos a
drenar todo el líquido, se cierra la llave de drenado y se abre la llave del aparato
agregando 2 litros de agua caliente, enjuaga con el agua presionando el botón de
agitación de 3 a 5 minutos, drene el agua y repita el procedimiento 2 veces más.
*Repetir procedimiento 2 veces más.
Remover las bolsas de soporte y presionarlas en el papel absorbente para eliminar
el exceso de agua después colocar las bolsas en un vaso de precipitado con
acetona agitar de 2 a 3 minutos, secarlas nuevamente.
Se meten las muestras a la mufla a 60 C 2 horas mínimo, se sacan las y se ponen
en un desecador con la finalidad de que no absorban humedad hasta que estén a
temperatura ambiente. Se pesa cada bolsa y se registra, mientras se pesa cada
bolsa se coloca un crisol en la mufla 135 C por mínimo de 2 horas, se sacan, se
pesan y se registra su peso, se taran los crisol y se pone una muestra de cada uno
de ellos. Por último se meten los crisoles con las muestras en la mufla a 600 C. y
se dejan por 2 horas, se sacan las muestras calcinadas y se pesan nuevamente.
Determinación de azucares
MATERIALES Y REACTIVOS
Papel para limpieza (papel seda o higiénico)
Agua destilada
Refractómetro de mesa o manual
GOTEROS DE PLÁSTICO
PROCEDIMIENTO:
Colocar el refractómetro en una posición tal que difunda la luz natural o cualquier
otra
Forma de luz artificial, que pueda utilizarse para iluminación.
CUANDO SE UTILICE UN RFRACTOMETRO DE MESA (Hacer circular agua a
293 K) o (20ºC) a través de los prismas.
REFRACTOMETRO MANUAL
En los refractómetros manuales se levanta el cristal se coloca la muestra y se
observa a contraluz lo más nítido posible, se toma la lectura directamente
Determinación de acidez total
MATERIAL
Matraz Erlemeyer
Matraz volumétrico
Pipeta
papel filtro
Bureta
Agitador
REACTIVOS
Fenolftaleína al 1%
Hidróxido de sodio 0.1N
PROCEDIMIENTO:
A) Determinar previamente el pH de las muestras a las que se les realice
determinación de acidez
B) Preparación de las muestras
1. Se llena la bureta con una solución de hidróxido de sodio 0.1 N valorada
2. Se coloca la cantidad de muestra (indicada en el inciso A) en un matraz
Erlenmeyer
3. Se adicionan 5 gotas de fenoftaleína al 1%
4. Se realiza la Titulación: Se adiciona gota por gota la solución de hidróxido de
sodio, y se agita el matraz Erlenmeyer con la muestra vigorosamente el matraz
Erlenmeyer, hasta aparición de un color rosado que permanezca por más de 20
segundos
5. Se toma la lectura del volumen de hidróxido de sodio gastados ..
6. Calcular la acidez presente en cada muestra.
Cálculo de la acidez. La acidez del producto se expresa como el porcentaje del
ácido predominante en la muestra, ya sea como % de ácido cítrico, málico, láctico,
etc.