Microbiologic Characterization and Antimicrobial Susceptibility of Clostridium

tetani Isolated from Wounds of Patients with Clinically Diagnosed Tetanus

(Campbell, J. 2009)

La manera en cómo se obtuvo la muestra fue directamente de los pacientes infectados por
medio de un hisopo esteril. Este mismo hisopo fue el que se usó para la inoculación de la
muestra de Clostridium tetani en 2 placas de agar sangre pre-reducidas en oxígeno
(incubación anaerobia 30min antes de uso) con 10% de sangre de oveja. En una placa se
aplica el método de estría y en el otro de inocula con el hisopo frotando en círculos sobre el
agar. Posteriormente se incuba a 37 grados centígrados por 48 horas. Sin embargo, el
hisopo con la muestra se incuba en un caldo de carne cocida (medio para microorganismos
anaerobios) mientras que se somete el caldo a calentamiento de 80 centígrados por 10
minutos y se incuba a 37 grados centígrados por 48 horas. Este último proceso fue con el
propósito de poder eliminar los contaminantes conviviendo con la cepa de interés
Clostridium tetani y poder aislarla.

Isolation and Antibiogram of Clostridium tetani from Clinically Diagnosed

Tetanus Patients
(Hanif, H. 2015)

Se obtuvo la muestra mediante un hisopo esteril en contacto con el tejido infectado de

tétanos de los pacientes presentes. Ese hisopo ya conteniendo la muestra, se somete a un
medio de transporte Cary-Blair para microorganismos anaerobios. Este medio está
compuesto de: solución salina que permite solucion isotonica manteniendo un equilibrio
osmótico en el medio que también evita la deshidratación ; el fosfato de sodio y cloruro de
calcio mantienen en equilibrio en pH, tioglicolato de sodio actúa como agente reductor
reduciendo el potencial de oxidorreducción y la cantidad de agar incluida es para mantener
el estado semisólido del medio. Este transporte permite que la muestra tampoco se vea
contaminada y se encarga de mantener su integridad celular. No busca el crecimiento
microbiano sino busca su conservación . Una vez ya en el laboratorio, la muestra se inocula
en un caldo de tioglicolato (para microorganismos anaerobios y facultativos) y se incuba a
37 grados centígrados por 48 horas. Una vez que haya crecimiento, se busca aislar
exclusivamente a Clostridium tetani purificando la muestra, por lo que se somete la muestra
a un medio de cultivo de carne cocida y se incubaron a 4 grados centígrados para
posteriormente continuar con el análisis. Para almacenamiento a largo plazo se sometieron
a una solución de 15% de glicerol y se incubaron a -80 grados centígrados. El glicerol que
actúa como agente crioprotector, esto es porque protege a los microorganismos a bajas
temperaturas reduciendo la formación de cristales de hierro que puedan dañar estructuras
microbianas y manteniendo la hidratación de la cepa gracias a su capacidad de retener
líquidos
 PIA metodología

Aislamiento, traslado y manejo de C.tetani

Se preparan los materiales necesarios como para el aislamiento y traslado de la cepa, esto
es esterilizando área de trabajo, hisopos con los que se busca extraer la muestra, etc. Se
dirige hacia los pacientes infectados y se toma la muestra mediante el hisopo esteril del
tejido contaminado y se somete al medio transportador de Cary-Blair hasta llegar al
laboratorio. Este medio no contiene nutrientes debido a que su propósito es conservar la
muestra y evitar que sufra cambios o daños en el transporte. Este medio está compuesto
de: solución salina que permite solucion isotonica manteniendo un equilibrio osmótico en el
medio que también evita la deshidratación ; el fosfato de sodio y cloruro de calcio mantienen
en equilibrio en pH, tioglicolato de sodio actúa como agente reductor del potencial de
oxido-reduccion favoreciendo un ambiente anaerobio y la cantidad de agar incluida es para
mantener el estado semisólido del medio.
Inoculación e incubación de C.tetani

Se preparan los medios de cultivo que se van a usar los cuales son el caldo de tioglicolato,
carne cocida y solución de 15% de glicerol. Se inocula la muestra mediante un asa
bacteriologica esteril en un caldo de tioglicolato y se incuba a 37 grados centígrados por 48
horas. Ya que hay crecimiento se somete la muestra mediante un asa bacteriologica esteril
a un medio de carne cocida y se incuba a 37 grados centígrados por 48 horas. Este medio
permite el crecimiento de la cepa C.tetani debido a la aportación de nutrientes del medio.
Para poder aislar la cepa y eliminar contaminantes se somete el medio con la muestra a 80
grados centígrados por 10 minutos. El medio de cultivo con la muestra dentro, se incuba a 4
grados centígrados para análisis posterior, sin embargo para un almacenamiento a largo
plazo se somete la muestra a un cultivo con 15% de glicerol a una temperatura de -80
grados centígrados.