>PROGRAMA DE INGENIERA DE ALIMENTOS

UNIVERSIDAD DEL QUINDO

RECUENTO DE ESTAFILOCOCO COAGULASA POSITIVA

Count of Coagulase Positive Staphylococcus

Laura Milena Rivera Garca, Luisa Fernanda Rincn Herrera, Programa de ingeniera de alimentos, Facultad de ciencias agroindustriales, Universidad del Quindo - Colombia.

ResumenEn el siguiente informe se presenta el recuento de bacterias estafilococo coagulasa positiva, siendo stos cocos gram positivos, que poseen una enzima llamada coagulasa que al reaccionar con el fibringeno son capaces de producir un coagulo de fibrina; estos microorganismos son una amplia fuente de contaminacin alimentaria por medio de la enterotoxina.i 1 2 Se llevaron a cabo siembras de 10 y 10 en caldos de cultivo BHI asi como de plasma deshidratado de conejo EDTA y agar Baird Parker, tomando como muestra un producto de repostera llamado suspiro. El aislamiento del microorganismo se realizo en el medio solido (agar) y el enriquecimiento se llevo a cabo en el medio liquido (caldo de cultivo). Se obtuvieron 130 UFC para 11g de muestra a analizar (suspiro). Palabras clave- agar baird parker, caldo BHI, caldo EDTA, enterotoxina, estafilococo coagulasa positiva. Abstract- The following report presents counts of coagulase positive staphylococcus bacteria, and these gram-positive cocci possessing an enzyme called coagulase which reacts with fibrinogen are capable of producing a fibrin clot, these organisms are a rich source of food contamination through the enterotoxin. Were performed sowing and BHI breeding grounds as well as EDTA and Baird Parker agar, using as sample a pastry product called "breath. Isolation of the organism was performed in the solid medium (agar) and enrichment was carried out in liquid medium (broth). Keywords-Baird Parker agar, BHI broth, bouillon EDTA, enterotoxin, coagulase positive staphylococcus.

I. INTRODUCCIN

La presencia de la bacteria estafilococo coagulasa positiva en alimentos desencadena una toxiinfeccin alimentaria o sndrome gastrointestinal, debido a la toxina que esta produce. En resposteria se encuentra la mayor proliferacin de estas bacterias y se da la toxiinfeccin debido a la manipulacin de alimentos con deficientes prcticas higinicas, exposicin de los alimentos a temperaturas apropiadas para el crecimiento de estos microorganismos, tiempo prolongado entre la elaboracin y el consumo de los productos alimenticios, as como la coccin insuficiente de los alimentos.ii Las enterotoxinas son metabolitos segregados al medio de cultivo durante el crecimiento bacteriano y se clasifican segn el patrn antignico. El aislamiento de las cepas de estafilococo coagulasa positiva se hace por medio del agar baird parker al cual se adiciona una suspensin de telurito de potasio; el cual permite observar las colonias aisladas de color negro debido a la conversin del telurito a teluro metalico.iii II.MONTAJES Y EXPERIMENTO

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UNIVERSIDAD DEL QUINDO (telurito) y libera el telurio (elemento), lo que provoca la aparicin de colonias negras. Esta bacteria produce lecitinasas que hidrolizan los lpidos de la yema de huevo. Esta capacidad se manifiesta por la aparicin zonas clarificadas alrededor de las colonias.

EQUIPO Y MATERIAL: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Lo necesario para la preparacin y dilucin de los homogenizados de los alimentos. Incubadora a 35C. Pipetas de 1ml estriles. Peras Pipeteadoras. Cajas de petri. Tubos tapa rosca. Varillas de vidrio. gradillas.

Medio utilizado: 1. Peptona: 2. pH= 6.2 T=25C Composicin: mezcla de protenas animales. Casa: Oxoid L.T.D.

Componente Agar Extracto de carne de vacuno Glicina Cloruro de Litio Piruvato Sdico Triptona Extracto de Levadura Enriquecimiento con yema de huevo/telurito

Cantidad 20 g 5 12 5 10 10 1 50 ml

III. RESULTADOS Y ANLISIS 1. Para el aislamiento de las cepas de estafilococo coagulasa positiva, se tomaron 2 diluciones ( 10 y 10 ); las cuales se sembraron cada una por duplicado en agar baird parker + emulsin de yema de huevo al 20 % por superficie. los recuentos obtenidos fueron: Para la dilucin 10 : en la primera siembra se obtuvieron 20 colonias y en la segunda siembra se obtuvieron 6 colonias; por tanto:
1

caldo BHI:

Componente Agar Fosfato Disdico Glucosa Infusin de corazon de vacuno Infusin de cerebro de ternera Proteosa Peptona Cloruro Sdico
3.

Cantidad 15 g 2,5 2 250 200 10 5

Plasma deshidratado de conejo EDTA: este medio es un liofilizado de plasma de conejo al que se le ha aadido EDTA como anticuagulante. La coagulasa es una enzima capaz de coagular el plasma de los humanos, caballos, conejos y otros animales. La coagulacin se produce porque la enzima reacciona con el fibringeno del plasma. La actividad coagulasa se analiza mezclando el cultivo con el plasma reconstituido. Si la coagulacin (aparicin de grumos) se produce en menos de 6 horas, es indicativa de que el proceso ha producido la coagulasa. Agar Baird Parker: es un medio selectivo y diferencial diseado especialmente para la deteccin y el recuento de Staphylococcus el cual forma en l colonias negras, brillantes, convexas y que se rodean de una zona clara. El telurito potsico selecciona a la mayor parte de las especies que no pertenecen al gnero de Staphylococcus la diferenciacin entre las especies de ste gnero se consigue mediante las reacciones en telurito y en yema de huevo; Staphylococcus reduce la sal

20 6 26 colonias 26 13 2

Multiplicando por el inverso de la solucin:

13 *10 130 U.F.C.

Para la dilucin 10 : en la primera siembra se obtuvieron 50 colonias y en la segunda siembra se obtuvieron 6 colonias; por tanto:
2

50 6 56colonias 56 28 2
Multiplicando por el inverso de la dilucin:

4.

28 *10 2 2800 U.F.C.

Por consiguiente:

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2800 21.54 > 2 130

Por cada 11 gr. de muestra se obtuvieron 130 U.F.C. en la etapa de aislamiento de la cepa de estafilococo coagulasa positiva, las cuales se reconocieron por la coloracin blanquecina. 2. Para la etapa de enriquecimiento se obtuvo: En las cuatro muestras tomadas, se registro presencia de turbidez en la siembra en caldo de cultivo BHI. En la siembra con plasma de conejo deshidratado; en las dos primeras horas de seguimiento no se observo presencia de coagulo, a partir de la tercera hora de observacin se registro aumento de la viscosidad en la muestra y a las 24 horas se confirmo la presencia de coagulo en el inoculo.

Referencias:
1. 2. 3.

4.

Microbiologia moderna de los alimentos. Jay M. James. 2edicion, Edit. Acribia. confitera y pastelera, manual de formacin. Vicente Madrid Antonio. biblioteca virtual en salud. Intoxicaciones alimentarias por especies clostridium. Determinacin de clostridium sulfito reductores mtodo de recuento. Chilealimentos.com

Luisa Fernanda Rincn, e-mail: liri92_6@ hotmail.com. Laura Milena Rivera Garca. e-mail: lauramilenarivera@hotmail.com

Anlisis de resultados: 1. En la etapa de aislamiento de la cepa, se obtuvieron colonias de color blanco debido a la ausencia del telurito de potasio en el agar. Segn INVIMA, en productos de dulces duros no se debe encontrar presente este tipo de microorganismo, de manera que se hace necesario hacer hincapi en las normas de higiene y seguridad que se deben implementar en el momento de la manipulacin de este alimento. IV.CONCLUSIONES.
LAS TOXIINFECCIONES ASOCIADAS A ESTAFILOCOCO COAGULASA POSITIVA INDICAN CONTAMINACIN SANITARIA, POR LO CUAL ES NECESARIO TOMAR MEDIDAS CORRECTIVAS TALES COMO SER REPORTADAS A LOS REFERENTES DE MEDIO AMBIENTE DE LA LOCALIDAD RESPECTIVA, QUIENES SON LOS ENCARGADOS DE REALIZAR LA INVESTIGACIN CORRESPONDIENTE Y LA TOMA DE MUESTRAS DE SER NECESARIO, DE IGUAL FORMA SE PROCEDE PARA ADELANTAR iv UNA QUEJA RELACIONADA CON ALIMENTOS.

2.

La presencia de estafilococo coagulasa positiva en el alimento analizado (suspiro) se debe a que esta bacteria sobrevive en alimentos con un contenido en agua reducidos, adems de exponerse a temperaturas en donde se active la produccin de la toxina (a temperatura ambiente por un tiempo de 3 o 4 horas), un alimento se hace toxico despus de un recuento de 10 a 10
6 10

microorganismos/ gr.v

Tomado de: practica N 9, recuento e identificacin de estafilococos aereus; Scribd.com ii Tomado de:http://www.inha.sld.cu/vicedirecciones/eta.htm iii Tomado de: manual de procedimientos de laboratorio, anlisis de aguas y alimentos en medios de cultivo. iv Tomado de: anlisis de alimentos, secretaria distrital de salud de Bogot. v Tomado de: Microbiologa Alimentaria, aspectos microbiolgicos de la seguridad y calidad alimentaria, vol. 1, Ed. Acribia.