Efecto del pH en la actividad

enzimática

ITESM Campus Toluca

Escuela de Ingeniería y Ciencias
Depto. de bioingeniería
IBT Juan Jesús Cruz Maldonado
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Agenda
• Efectos del pH sobre la estabilidad de la enzima e intervalo de actividad óptimo

• Retomar sitio catalítico y ejemplos de algunos mecanismos de reacción

• Grupos ionizables dentro del sitio activo

• Efecto del pH en grupos ionizables (relación que guardan los pKa’s de los grupos ionizables
implicados en la catálisis)
• Ejemplo invertasa
• pKa’s aminoácidos y pKa’s perturbados

• Modelo diprótico, explicación y derivación por equilibrio rápido

• Buffers y pH (ejemplo Henderson Hasselbach)

• Recomendaciones de buffers en los ensayos enzimáticos
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Quiz
• https://create.kahoot.it/share/bt2005-efecto-ph/ed6f43e3-63fc-4e14-
a789-0a17590c0f8d
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pH y estabilidad de la enzima
• De forma análoga a los microorganismos, las enzimas también cierto
intervalo de pH en el cual se mantienen estables.
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Sitio activo y residuos catalíticos

• A pesar de existir 21 aminoácidos, solo unos cuantos suelen estar
implicados en la conversión de sustratos a productos en el sitio
activo.

Jimenez-Morales, D., Liang, J., & Eisenberg, B. (2012)

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Efecto del pH sobre la actividad enzimática

• El pH del medio tiene un efecto directo en el desempeño de las enzimas y en su
estabilidad.

• La catálisis es posible gracias a que los grupos ionizables de los aminoácidos del sitio
activo tienen la carga correcta para realizar la reacción.
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Efecto del pH sobre la actividad enzimática

• pH del medio por encima del pKa de Asp y

cerca del pKa de Glu

• pH del medio por debajo del pKa de Asp y Glu

• pH del medio por encima del pKa de Asp y Glu

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El pKa de los grupos ionizables

no es el mismo estando libre que en una proteína
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Tarea
• Por equipos (5 personas máximo), investigar acerca de:

1. Los aminoácidos catalíticos de una enzima

2. El mecanismo de reacción
3. El intervalo de pH en el que se encuentra activa la enzima y
4. ¿Cómo se relaciona ese intervalo de pH con los grupos ionizables de los
aminoácidos del punto 1?
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Modelo diprótico

⇌
𝐾

𝐾 𝑘

⇌
𝐾

Obtenga la ecuación de velocidad por

equilibrio rápido!
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Recomendaciones para ensayos enzimáticos

• De forma similar a la temperatura, el pH del ensayo debe mantenerse
constante para obtener datos significativos y reproducibles.

• Si se desea estudiar el efecto del pH sobre la actividad, es necesario

utilizar diferentes buffers.

• La capacidad amortiguadora de cada buffer es limitada!

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Ecuación de Henderson-Hasselbach
• Una vez elegido el tipo de buffer y su pH es necesario realizar algunos
cálculos para determinar la cantidad de reactivos a adicionar.

• Para ello se puede utilizar la siguiente expresión

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Ejercicio
Se quiere realizar una solución de buffer de acetatos 150 mM (pKa=4.75)
empleando acido acético al 99% (CH3COOH) y acetato de sodio (CH3COONa).
Si se quiere hacer 1L de la solución a pH de 5, determine la cantidad teórica de
ácido acético y acetato de sodio que debe adicionar.

( ) ( ) ( )

( ) ( ) ( )

( ) ( ) ( )
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Referencias
1. Copeland, R. A. (2000) Enzymes: A practical introduction to structure,
mechanism and data analysis (2nd Edition). Wiley
2. Segel, Irwin H. (1993) Enzyme kinetics: Behavior and analysis of rapid
equilibrium and steady-state enzyme systems (2nd Edition). Wiley
3. Jimenez-Morales, D., Liang, J., & Eisenberg, B. (2012). Ionizable Side
Chains at Catalytic Active Sites of Enzymes David. Eur Biophys J.,
41(5), 449–460. https://doi.org/10.1016/j.pmrj.2014.02.014.Lumbar