MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA
ÁREA DE LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA

TM181008
Lic. ELIZABETH PAREJA CUADROS
Profesora Responsable de la Asignatura
VILMA BÉJAR CASTILLO JOSÉ MARÍA GUEVARA GRANADOS
ESTHER VALENCIA BAZALAR ANA HUAMÁN REYES
FREDDY VILLANUEVA COTRINA LUIS SOLANO MENDOZA
MIGUEL CONDEZO ROJAS RAÚL SEVILLA ANDRADE
AUGUSTO ESCALANTE CANDIA GIULIANA ROMERO BARRENECHEA
CECILIA PÉREZ VALLADARES NILVER PISCOCHE BOTELLO

2022
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA – FACULTAD DE MEDICINA – U.N.M.S.M. 1
 Prólogo

El Manual de Microbiología que presentamos tiene como objetivo brindar conocimientos claros y
precisos de la preparación de reactivos, colorantes y medios de cultivo; así como de las diferentes
metodologías utilizadas en la identificación bacteriana y el diagnóstico microbiológico a partir de
muestras clínicas y ambientales también incluye los métodos de susceptibilidad antimicrobiana.

Cabe destacar la contribución de los docentes y colaboradores para que este manual salga a luz,
por compartir sus experiencias en los diferentes temas desarrollados, permitiendo la revisión y
actualización de los temas desarrollados.

Entregamos las herramientas conceptuales para realizar el diagnóstico microbiológico y que

contribuyen a mejorar la salud de nuestra población.

Agradecemos a nuestra familia, colegas y estudiantes por la paciencia, apoyo y ánimo continuo.

Lic. TM. Elizabeth I. Pareja Cuadros

Profesor Asociado T.C.
Responsable de la Asignatura

PRÁCTICA
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
I. MARCO TEÓRICO:
La bioseguridad son un conjunto de medidas
preventivas que nos protegen frente a los
agentes de riesgos biológicos, químicos y
físicos.
La implementación de los programas de
bioseguridad es fundamentalmente importante
sobre todo en los laboratorios de Microbiología
Clínica.
• Agentes biológicos: Son organismos como
bacterias, parásitos, hongos, virus que
pueden ingresar a nuestro organismo a través
de diferentes procedimientos como la
ingestión de muestras etc. (falta de usos de
propipetas), inhalación de aerosoles( falta de
uso de mascarillas etc.) por inoculación con
agujas contaminadas (falta de guates,
descartadores y de conocimiento de
procedimientos), por contacto directo a
través de piel y mucosas (falta de uso de
guantes y de protectores oculares).
• Agentes físicos: son manifestaciones de la
energía que pueden causar daños a las persona
. Ejm. cuando nos exponemos a temperaturas
extremas (llama de mechero bunsen, calor de
Horno, vapor de autoclave), Radiaciones
ionizantes, Contactos eléctricos, Vidrios
resquebrajados.
• Agentes químicos: son compuestos químicos
presentes en los reactivos, colorantes y medios
de cultivo que producen daño al organismo,
algunos tienen actividad carcinogénica otros
poseen alta toxicidad siendo corrosivos e
inflamables.
Las normas de bioseguridad están destinadas a
reducir el riesgo de transmisión de
enfermedades infectocontagiosas de fuentes
reconocidas o no reconocidas, a las que el
personal de salud se encuentra expuesto;
además de señalar los diferentes
procedimientos que eliminen el riego de
transmitir al paciente infecciones causadas por
contacto directo o a través del uso de
instrumental o material contaminado.
Estas medidas preventivas están basadas en
tres principios fundamentales:
1. Precauciones universales.
2. Uso de barreras.
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Lic. Elizabeth Pareja Cuadros
Q.F. Miguel Condezo Rojas
3. Manejo de residuos.
Las medidas universales constituyen un
conjunto de medidas que deben aplicarse
sistemáticamente para disminuir el riesgo
(cuidado del personal exigiendo las
inmunizaciones respectivas, lavado de manos,
uso de procesos de esterilización y
desinfección).
El uso de barreras incluye las medidas de la
vestimenta.
El manejo de residuos es la correcta
eliminación del material para evitar la
contaminación de las personas y el ambiente.
Fuentes de riesgos biológicos:
a) Un cultivo de microorganismos.
b) Lancetas con sangre,
c) Muestras clínicas como líquidos
corporales etc.
Medidas de bioseguridad:
a) Del personal (recibir capacitación,
cumplir con las normas como aplicarse las
vacunas requeridas, lavado de manos entre
otras),
b) Del vestido (indumentaria adecuada de
protección uso de mandil de manga larga,
gorro, tapa boca, respirador, guante.
Protector ocular),
c) Relacionada al ambiente de trabajo
(equipamiento de los laboratorios con equipos
e instrumentos adecuados como cabina de
bioseguridad, contar con mecheros de bunsen,
buena iluminación, mesas de material
impermeable., conexiones eléctricas con buen
cableado, contar con extinguidores etc).
d) De las muestras clínicas o biológicas y de
su procesamiento.
Niveles de Bioseguridad:
Nivel 1: Grupo de riesgo 1: (riesgo individual y
poblacional escaso o nulo)
Microorganismos que tienen pocas
probabilidades de provocar
enfermedades en el ser humano o los
animales.
Nivel de bioseguridad: Básico
Tipo de laboratorio: Enseñanza básica
e investigación.
3
 Ejemplo de Microorganismos:
- Bacterias: Bacillus subtilis,
Xylophilus ampelinus.
- Virus: Virus del mosaico del tabaco,
Bacteriófagos.
- Hongos: Saccharomyces cerevisiae,
Penicillium roqueforti.
- Parásitos: Ditylenchus dipsaci,
Tylenchulus semipenetrans
Nivel 2: Grupo de riesgo 2: (riesgo individual
moderado, riesgo poblacional bajo)
Agentes patógenos que pueden provocar
enfermedades humanas o animales pero
que tienen pocas probabilidades de
entrañar un riesgo grave para el personal
de laboratorio, la población, el ganado o
el medio ambiente. La exposición en el
laboratorio puede provocar una
infección grave, pero existen medidas
preventivas y terapéuticas eficaces y el
riesgo de propagación es limitado.
Nivel de bioseguridad: Básico
Tipo de laboratorio: Servicios de
atención médica, diagnóstico,
investigación.
Ejemplo de Microorganismos:
- Bacterias: Escherichia coli,
Streptococcus suis.
- Virus: Virus de Eptein-Barr,
Coronaviridae.
- Hongos: Aspergillus fumigatus,
Candida albicans.
- Parásitos: Trichinella spiralis,
Toxocara canis.
Nivel 3: Grupo de riesgo 3: (riesgo individual
elevado, riesgo poblacional bajo)
Agentes patógenos que suelen provocar
enfermedades humanas o animales
graves, pero que de ordinario no se
propagan de un individuo a otro. Existen
medidas preventivas y terapéuticas
eficaces.
Nivel de bioseguridad: Contención.
Tipo de laboratorio: Diagnóstico
especial, investigación.
Ejemplo de Microorganismos:
- Bacterias: Mycobacterium
tuberculosis, Yersinia pestis, Brucella,
Bacillus anthracis.
- Virus: Virus de inmunodeficiencia
humana, Virus de la fiebre amarilla.
- Hongos: Histoplasma capsulatum var.
capsulatum, Paracoccidioides
brasiliensis.
- Parásitos: Echinococcus granulosus,
Taenia solium.
Nivel 4: Grupo de riesgo 4: (riesgo individual y
poblacional elevado)
Agentes patógenos que suelen provocar
enfermedades graves en el ser humano o
los animales y que se transmiten
fácilmente de un individuo a otro,
directa o indirectamente. Normalmente
no existen medidas preventivas y
terapéuticas eficaces.
Nivel de bioseguridad: Contención
Máxima.
Tipo de laboratorio: Unidades de
patógenos peligrosos.
Ejemplo de Microorganismos:
- Virus: Virus Ébola, Hanta virus, Virus
de la viruela.
Contar con bioseguridad involucra hablar de
esterilización y descontaminación.
• Esterilización: Es el proceso mediante el cual
se destruye a todo microorganismo patógeno o
saprofitos presente utilizando equipos y
técnicas establecidas.
• Desinfección: Es el mecanismo por el cual,
utilizando una sustancia química, se mata los
microorganismos presentes en las superficie de
mesas, cubículos, objetos, material de vidrio,
metal, etc.
La esterilización se logra utilizando agentes físicos
y químicos.
AGENTES FISICOS
A. Calor
El calor, como forma de transferir energía, es el
método preferido para la esterilización, debido a
los, factores de facilidad de uso, facilidad de
control, costo y eficacia, que puede ser el calor seco
y el calor húmedo.
• Calor Seco Es un procedimiento mediante el
cual se destruye a la bacteria por
deshidratación, alterando la permeabilidad de
la membrana celular Ejemplo: sometiendo el
asa de platino al flameado del mechero de
Bunsen.
- Horno: es un aparato de forma rectangular
que posee paredes dobles revestidas de
amianto o fibras de vidrio para mantener el
calor generado. En el interior y en la parte
exterior superior tiene orificios para la
ventilación y un dispositivo donde se
encuentra fijo el termómetro.
Es utilizado el Horno a 180°C por 1 hora,

este aparato nos permite esterilizar material
quirúrgico (pinzas, tijeras, bisturís), placas
petri, tubos de prueba, baja lenguas, gasa,
algodón, etc. (Su uso es restringido para
material limpio, seco y debidamente
preparado).
Funcionamiento
1. El material que se esteriliza en el horno
debe estar completamente seco.
2. Se coloca en canastillas o recipientes y
se deja durante 1 hora a 170 – 180º C.
3. Transcurrido dicho tiempo, se deja
enfriar el horno por sí solo, ya que la
apertura del aparato caliente produce
rotura o daño del material por el cambio
brusco de temperatura
• Calor Húmedo: El agente más eficaz para la
esterilización es el vapor de agua saturado a
presión, por ejemplo, el autoclave. La
destrucción de las enzimas y membranas
está influida por la disponibilidad de
agua, que trastorna los enlaces de hidrogeno, y
la coagulación de las proteínas presentes en el
citoplasma.
- Autoclave: provee un medio eficaz y
práctico de esterilización, por cuanto
destruye tanto las formas vegetativas como
esporuladas. Como se sabe el agua hierve a
100º C según la presión atmosférica, pero si
se aumenta ésta, la temperatura será más
alta, lo que se logra con el autoclave.
Se utiliza a 121 ºC por 15 lbs de presión x
15 minutos. Se utiliza para material
contaminado (descontaminación), o para
material limpio.
Componentes del autoclave
1. Caldera: Consiste en un cilindro amplio
y profundo de paredes muy gruesas.
2. Canasta: Es un cilindro de paredes
delgadas donde se coloca el material a
esterilizar.
3. Soporte de la canasta: Se encuentra en
el fondo del autoclave y sostiene la
canasta por encima del nivel de agua.
4. Drenaje: llave de paso colocada en la
base de la caldera, por donde sale el
exceso de agua.
5. Tapa: Esta cubre y cierra
herméticamente la caldera, se ajusta
mediante una arandela de jebe.
6. Sujetadores de la tapa: Se encuentran
fijos a la caldera y conjuntamente con la
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arandela de jebe cierran herméticamente
la tapa e impiden el escape de vapor.
7. Válvula de salida de aire: Se encuentra
en la parte superior de la tapa, se emplea
para dejar que salga el aire cuando
empieza el agua a calentarse.
8. Válvula de seguridad: Esta válvula
deja escapar el vapor cuando la presión
se eleva demasiado, evitando que ocurra
una explosión.
9. Manómetro: Se ubica en la parte
superior de la tapa, indica las libras de
presión de vapor de agua.
10. Termómetro: Indica la temperatura en
grados centígrados, se encuentra en la
parte superior de la tapa.
Funcionamiento
1. Llenar con agua el fondo del autoclave
hasta el soporte de la canasta. Estar
seguro que el agua no sobrepase ese
nivel, si hay exceso eliminar a través del
drenaje.
2. Introducir el material a esterilizar al
autoclave, colocándolo sobre la canasta.
3. Cerrar la tapa del autoclave, atornillar
los sujetadores a niveles iguales, con
firmeza pero sin apretar demasiado.
4. Abrir la válvula de salida de aire.
5. Encender el mechero de gas o conectar
la llave de corriente, para alentar el
autoclave.
6. Vigilar la válvula de salida del aire hasta
que aparezca un chorro de vapor. Dejar
salir por 3 – 4 minutos hasta que éste sea
uniforme y continuo. Esto indicará que
todo el aire ha sido reemplazado por
vapor.
7. Cerrar la válvula de salida del aire,
ajustar los sujetadores de la tapa y
reducir la temperatura ligeramente.
8. Observar el manómetro (libras de
presión) y el termómetro hasta ajustar a
la temperatura deseada, regulando el
calor.
9. Una vez alcanzada la temperatura y
presión necesaria, empezar a medir el
tiempo.
10. Apagar la fuente de calor cumplido el
tiempo.
11. Cuando la temperatura descienda a
menos de 100º C, abrir la salida del aire
para igualar las presiones dentro y fuera
del autoclave.
12. Cuando cese el silbido, aflojar los
sujetadores de la tapa. Abrir la tapa y, a
5
 continuación retirar el material estéril
cuidadosamente.
13. Si se han formado gotas de agua sobre o
dentro del material esterilizado, secarlos
en una estufa a 37º C.
- Pasteurización: Esta técnica fue ideada
por Pasteur para prevenir la fermentación
del vino, calentándolo a 50-60 °C. Ahora
se usa para líquidos como la leche, con el
fin de reducir el número de bacterias. El
líquido es mantenido a una temperatura de
62,8-65,6 °C durante 30 minutos, o se
puede emplear la pasteurización a 71,7 °C
durante 15 segundos.
B. Filtración
El pase a través de filtros constituye el único
proceso de esterilización para diversos productos
o medios de cultivo, que sufrirían alteraciones en
sus características por la acción del calor húmedo
(autoclave), se usan filtros (Millipore etc.), en los
cuales quedan adheridos los microorganismos
dejando pasar las sustancias estériles.
Ejemplo de uso para filtrar carbohidratos,
proteínas, suero de conejo, gelatina, suero
sanguíneo, líquido ascítico, enzimas, toxinas y
otros.
Existen varios tipos de filtros bacteriológicos:
- Chamberland-Pasteur, fabricados de
porcelana (caolín – cuarzo)
- Berkefeld, preparado con tierra de diatomeas.
- Seitz, elaborados de asbesto prensado en discos
de reducido espesor con dos porosidades:
clarificante y esterilizante.
- De vidrio poroso, preparado aglutinado vidrio
finamente pulverizado.
- Ultrafiltros, fabricados a base de colodión.
- De éster de celulosa hay dos tipos: Millipore,
en discos de 150 μ de espesor y con 11
diferentes porosidades y el Polipore, con poros
desde 4 mµ hasta 100 mµ.
El frasco de vidrio utilizado para filtrar se
denomina Kitasato, el cual tiene una tubuladura
lateral para ser conectada a la manguera de la
bomba de vacío.
En la boca del Kitasato se coloca el conjunto
tapón-soporte dentro del cual se encuentra la
membrana de filtro.
Todo este conjunto debe esterilizarse al autoclave
(120º C por 15 minutos) antes de su uso.
Procedimiento de filtración
1. Verter la sustancia a filtrar en el cilindro
metálico que tiene en su base la membrana del
filtro.
2. La tubuladura lateral del Kitasato provista de
un tapón de algodón, es conectada a la
manguera de la bomba de vacío.
El vació utilizado no debe ser muy fuerte para
que la filtración no sea tan rápida.
3. El líquido filtra a través del filtro Kitasato, por
acción de la presión de aire originada por
efecto del vacío.
4. Terminada la filtración, apagar primero la
bomba, luego retirar con mucho cuidado la
manguera conectada a la tubuladura del
Kitasato, evitando de quitar el tapón de
algodón.
5. Retirar el conjunto tapón-soporte-filtro dentro
del cubículum, y realizar la transferencia del
material esterilizado dentro del mismo
C. Radiación
La luz ultravioleta es un agente bactericida, siendo
su longitud de onda más efectiva entre 2500 y
3200 a. Las radiaciones determinan cambios
fotoquímicos al ser absorbidos por las proteínas y
los ácidos nucleicos, interfiriendo en la
replicación del DNA de los microorganismos.
La luz ultravioleta tiene escasa capacidad de
penetración, por lo que se aplica sobre superficies.
Su acción sobre los microorganismos depende de
la longitud de onda, de la intensidad y de la
duración de su aplicación.
Tiempo U.
Dosis de Energía U.V
= X V. Sec
radiación
Área irradiada cm
Su aplicación está limitada para la inactivación de
microorganismos en la preparación de vacunas, en
la esterilización de ambientes (quirófanos, salas de
hospitales) y en aire suministrado a los
laboratorios.
Se emplean comúnmente lámparas de arco de
vapor mercurial que emiten luz de una longitud de
onda de 2537 Å.
AGENTES QUIMICOS
Son sustancias químicas que tienen efecto
destructivo sobre los microorganismos los más
usados en la práctica son:
- Alcoholes, sustancias, cuya estructura R-
CHOH, tienen acción toxica para los
microorganismos. Su acción es al nivel de las
proteínas desnaturalizándolas; la
combinación del yodo con el alcohol es un
 MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

buen compuesto antibacteriano. - Mechero bunsen

(antiséptico).
- Fenol, y sus demás derivados fenólicos a
concentraciones de 5 % en soluciones
acuosas, desnaturalizan las proteínas.
(desinfectante).
- Los iones metálicos, de las sales de
mercurio, plata y cobre en altas
concentraciones, también desnaturalizan a las
proteínas, pero son muy dañinas para los
tejidos humanos como para ser utilizados
al nivel de la piel.
- Sustancias oxidantes, como el agua
oxigenada, al yodo, el cloro y sus
compuestos, inactivan a las células
microbianas, mediante el fenómeno de
oxidación de los grupos sulfhidrilos libres. El
agua oxigenada es un buen antiséptico,
mientras que el hipoclorito de sodio al 5% es
un buen desinfectante.
- Detergentes, son sustancias tensio-activas,
que actúan a nivel de la membrana
bacteriana, disolviendo a los
lipopolisacáridos. Pueden ser detergentes
aniónicos, ejemplo; los jabones que son las
sales sódicas de ácidos carbólicos o
detergentes catiónicos.
- Gases, se utiliza el óxido de etileno y el
formaldehido. Ambos son agentes
alquilantes y matan por lesión de las
proteínas y los ácidos nucleicos.
II. COMPETENCIAS:
1. Conocer y aplicar las medidas de
bioseguridad en el laboratorio de
microbiología frente a los agentes de
riesgos físicos (ej. mechero de bunsen),
biológicos (medios con bacterias), y
agentes químicos (ej. Soluciones ácidas).
2. Enumerar las medidas de bioseguridad
que debe respetar el alumno en el aula de
práctica.
3. Identificar los agentes de riesgo en el aula
de práctica.
4. Discutir la importancia del correcto
lavado de manos.
5. Conocer los principales métodos de
esterilización en microbiología, su
aplicación en la prevención de
enfermedades infectocontagiosas.
6. Describir los pasos en la
descontaminación de material en
microbiología.
III. MATERIALES:
- Asas de siembra
- Soluciones desinfectantes
- Jabón y papel toalla
- Mascarilla, guantes, gorro
- Autoclave
- Horno
- Cubículo con rayos U.V.
- Filtro
- Materiales de laboratorio ( tubos, placas,
pipetas, propipetas)
- Otros: Papel kraft, algodón
- Visita a los ambientes de esterilización y
descontaminación.
IV. PROCEDIMIENTO:
I. Leer y aplicar las medidas de bioseguridad
en el laboratorio de microbiología frente a
los agentes de riesgos.
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
a) Del ambiente:
1) Todo laboratorio debe estar
adecuadamente ventilado e iluminado.
2) Los servicios de agua luz y gas deben
funcionar correctamente.
3) El área de trabajo (área contaminada)
debe estar ubicada lejos de la puerta y de
zonas con corriente de aire.
4) Las mesas de trabajo deben ser de material
liso, impermeable y resistente a sustancias
corrosivas.
5) Se deben limpiar mesas, pisos y paredes.
No se debe levantar polvo.
6) Al sistema de desagüe solo se eliminará
material descontaminado o neutralizado.
7) Se debe realizar fumigación periódica.
8) Los animales de laboratorio deben estar
en ambientes separados.
9) Se debe contar con extinguidores.
10) En las puertas de todo laboratorio debe
estar la señal de alto riesgo.
11) Colocar letreros que prohíban el
consume de alimentos.
b) Del personal:
2) Deben estar entrenados en los
procedimientos
3) Deben someterse a un examen médico
completo.
4) Todo personal deberá recibir
inmunizaciones contra (Tétano, Difteria,
Hepatitis B) otras (Antirrábica, Fiebre
amarilla, BCG).

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 5) Evitar el ingreso de personal no
autorizado.
6) Evitar el movimiento de personas durante
el procesamiento.
7) Debe lavarse correctamente las manos.
8) Usar las barreras de protección.
c) Del vestido
1) Mandil de manga larga limpio e íntegro,
cerrado hasta el cuello.
2) Mandil no usarlo fuera del ambiente del
laboratorio
3) Debe ser de color blanco.
4) Gorro que cubre la totalidad del cabello
de color claro..
5) No usar collares o brazaletes, anillos o
relojes.
6) Zapatos no altos y que cubran de
exposición a ácidos.
7) Uso de guantes según sea necesario.
8) Evitar tocarse con las manos enguantadas
los ojos, nariz piel etc.
9) Anteojos de material neutro.
10) Las mascarillas deben adaptarse a la
comodidad de la cara, no filtrar aire por
los lados, si se humedece cambiar de
mascarilla. El uso de respiradores es
indispensables en salas de infectología.
11) Las botas son necesarias en ambientes de
alta esterilidad.
d) De las muestras y su procesamiento
1) Todas las muestras deben ser tratadas como
altamente infecciosas.
2) No obtener muestras de sangre usando solo
agujas.
3) Usar métodos apropiados para la
colocación de la aguja.
4) Nunca pipetear fluidos, usar propipetas o
pipetas automáticas
5) Chequear correctamente las muestras antes
de ser centrifugadas.
6) Verificar la desinfección del área de trabajo
antes y después de trabajar.
7) El material de desecho debe eliminarse al
tacho (rojo) o al recipiente correspondiente,
nunca dejarlo en la mesa.
8) Descarte láminas y laminillas en soluciones
desinfectantes.
II. Demostrar el uso correcto del mechero de
bunsen, dar recomendaciones en el manejo
de material químico y del material
biológico.
a) Del mechero de bunsen
a. Reconocer las llaves de salida de gas.
b. Instalar el mechero.
c. Verificar que no exista corriente de aire
d. Encender el fuego y abrir la llave de gas
lentamente en presencia del docente
e. Regular la llama (azul).
f. Luego de su uso avisar y cerrar el gas.
g. Retirar el mechero.
- AVISAR A SUS COMPAÑEROS ANTES
Y DESPUÉS DE ABRIR LA LLAVE
DEL GAS.
- NO MOVILIZARSE CON PAPEL
ENCENDIDO A OTRAS MESAS.
b) Del material químico
1) Debe preparase dentro de un lavadero y en
presencia del docente
2) Se debe utilizar guantes y mascarillas
especiales.
3) Debe de transportarse con cuidado.
c) Del material biológico
1) Se debe usar guantes para su manipulación
2) Se debe trabajar cerca del mechero
3) Tener cuidado si el recipiente está roto,
informar al docente y no manipularlo
4) Nunca eliminar el material al caño
5) Dejar los tubos en las gradillas
6) Dejar las placas Petri cerradas.
7) Realizar la demostración del correcto
lavado de manos
III: Lavado de manos: VER ANEXO.
EL USO DE GUANTES NO SUSTITUYE EL
LAVADO DE MANOS
III. Visitar los ambientes de esterilizado y
descontaminación
IV. Demostrar los procesos en la eliminación
de material contaminado: placas y tubos
con medio de cultivo, pipetas, guantes y
papeles.
• Eliminación de placas y tubos con cultivo
1) Será retirado por personal calificado en baldes
de metal.
2) Se autoclavarán.
3) Se procederá a su lavado, secado.
• Eliminación de pipetas
1) Se dejaran en los recipientes con
desinfectantes (mezcla sulfocrómica)
2) Serán llevados a autoclavar si fuese
necesario
3) Se lavarán y secarán.
 MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

• Eliminación de guantes 1. Defina Bioseguridad

1) Serán descartados en bolsas rojas. ………………………..……………………
2) Luego autoclavados e incinerados. ……………………………………..………
• Eliminación de papel ………………………..……………………
1) Se descartarán en bolsas negras. …………………………………………..…
2) Serán eliminados a contenedores y luego al …………………………………….……….
camión municipal. 2. ¿Cómo son eliminados los guantes luego de
terminada la práctica?
V. Preparar tubos, pipetas y placas para su …………………………….…………………
esterilización. …………………………………………….….
…………………………………………….…
VI. Demostrar el uso del material de vidrio: 3. Cite dos agentes de riesgo en el aula de
tubos, placas, pipetas (uso de la propipeta) práctica.
a)…………………………….…….………
RESULTADO: b)………………..…………………………
Con respecto a las medidas de bioseguridad: 4. ¿Cuáles fueron los equipos utilizado en los
procesos de esterilización?
• Registrar las medidas de bioseguridad ………………………………………………
practicadas en clase. ………………………………………………
……………………………………………… ……………………………………………..…
……………………………………………… BIBLIOGRAFÍA
………………………………………………
……………………………………………… 1. Instituto Nacional de Salud. Manual
…………………………………………….. Bioseguridad en Laboratorios de ensayo,
Con respecto al uso del mechero de bunsen: biomédicos y clínicos. 3a edición. Lima, Perú:
Centro de Producción Editorial E Imprenta de
• Complete: El cuidado más importante es: la Universidad Nacional Mayor de San
……………………………………………… Marcos. 2005: págs 7,18,42.
……………………………………………… 2. Soto V, Olano E. Conocimientos y
……………………………………………… cumplimientos de medidas de bioseguridad en
Con respecto a la eliminación de material: personal de enfermería. Hospital Nacional
Almanzor Aguinaga. Chiclayo 2002. An Fac
• Complete: Las pipetas se encontraron Med .2004;65(2).
eliminadas en 3. Lara H, Ayala V, Rodríguez C. Bioseguridad
……………………………………………… en el laboratorio: medidas importantes para el
……………………………………………… trabajo seguro. Bioquímica .2008;33(2):59-70.
4. Pareja E, Pilco W, Guevara J, Condezo M,
• Las placas Petri contaminadas con cultivo Béjar V, Piscoche C, et col. Staphylococcus
fueron llevadas al en mandiles de alumnos de enfermería en el
……………………………………………… curso de Anatomía Humana, UNMSM 2007.
……………………………………………… Revista Médica Carriónica-Hospital Dos de
Mayo. Lima. 2010; 1 (1):23.
Con respecto al lavado de manos: 5. Pareja E, Béjar V, Guevara J, Valencia E,
Chumpitaz J, Solano L, et al. Él mandil como
• Registrar la mayor dificultad que se tuvo
Para realizar el lavado de manos vehículo de bacterias patógenas de
…………………..…………………..……… importancia médica en internos de medicina.
Hospital Daniel A. Carrión, 2006. V Jornadas
……………..…………………..……………
………………..……………..……………… Científicas Sanfernandinas y VIII Jornadas
……….…….…………… de Investigación en Salud. An Fac Med. Lima
2006, (67Supl1):72
VI. PREGUNTAS DE APLICACIÓN

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 COMPLETE LAS PARTES DEL AUTOCLAVE:

“Frente a un accidente punzante con aguja contaminada con sangre infectada con
HIV, la probabilidad de contagio es de alrededor del 0,4%, mientras que si lo mismo
ocurre con un elemento contaminado con virus de hepatitis B, es del 30% “.
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Anexo N° 1

TÉCNICA DE LAVADO DE MANOS

LAVADO LARGO
LAVADO CORTO (Clínico) LAVADO MEDIANO
(Quirúrgico)
Jabón líquido antiséptico
Jabón neutro líquido (clorhexidina al 4%, Jabón líquido antiséptico
yodopovidona, etc.)
1. Retirar los accesorios de las 1. Igual 1. Igual
manos: reloj, anillos cintas,
pulseras
2. Abrir los grifos (en el caso que 2. Igual 2. Igual
no sean automáticos)

3. Mojar las manos y las muñecas 3. Mojar las manos, 3. Mojar manos, muñecas y
con agua corriente muñecas y antebrazos con antebrazos con agua corriente.
agua corriente.
4. Colocar jabón y frotar en 4. Igual 4. Igual
espacios interdigitales

5. Friccionar las manos y 5. Friccionar las manos hasta 5. Friccionar las manos hasta los
muñecas o realizar un los codos o realizar un codos, en forma sistemática
frotamiento mecánico vigoroso frotamiento mecánico durante 5 minutos cepillar las
durante 15 a 20 segundos vigoroso durante 2 minutos uñas y friccionar con esponja
(contar hasta 20). Jabonar bien (contar hasta 12O) descartable la piel. Este paso
toda la superficie, sobre todo puede dividirse en 2 etapas de 2
alrededor de las uñas. minutos y medio c/u,
repitiéndola e intercalando en el
medio el enjuague de las manos
hasta los codos.
6. Enjuagar las manos con 6. Igual 6. Escurrir sin juntar las manos.
abundante agua corriente No sacudirlas
7. Secar con toallas descartables 7. Igual 7. Secar con toallas estériles,
desde los dedos. individual y un solo uso,
descartar toallas
8. Cerrar los grifos con la última 8. Igual 8. Mantener las manos hacia
toalla del secado, en caso de que arriba
estos no fueran automáticos.
9. De no usar jabón 9. Lavado y enjuagado con
antiséptico, efectuar los alcohol yodado o alcohol de 70º
pasos del 1 al 7 con jabón
neutro y finalizar con
alcohol yodado o alcohol de
70º

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ARTÍCULO DE REVISIÓN
 MANUAL DE MICROBIOLOGIA

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 MANUAL DE MICROBIOLOGIA

ARTICULO DE REVISIÓN - BIOSEGURIDAD

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 HACER ESQUEMAS DE SUS OBSERVACIONES.

Autoclave Horno Rayos U.V.

Propipeta Mechero de Bunsen Descartador de material

punzocortante

Guantes Respirador Mascarilla

FECHA DE REVISIÓN FIRMA DEL DOCENTE

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 LIMPIEZA, DESINFECCION, MANEJO DE RESIDUOS BIOLÓGICOS Y PREPARACION
DEL MATERIAL PARA SU ESTERILIZACION,
INTRODUCCION
El material de laboratorio (cristalería) ya sean
limpios o usados, deben de limpiarse de cal
forma se elimine toda huella de suciedad, para
evitar la precipitación o depósito de los agentes
limpiadores,
Las muestras utilizadas en el laboratorio (heces.
esputo, orina, pus, etc.) frecuentemente son
infectadas por lo que se recomienda utilizar
recipientes desechables o en todo caso los
recipientes deben descontaminarse
adecuadamente antes de su limpieza.
Todo material limpio antes de ser utilizado debe
esterilizarse para conservar la pureza de la
muestra y de los cultivos.
I. PROCEDIMIENTOS PARA LA
LIMPIEZA, DECONTAMINACION Y limpia durante 30 minutos, volver a
ESTERILIZACION DEL MATERIAL
A. Recipientes de vidrio nuevos (matraces.
Tubos, placas, frascos, etc.).
Los utensilios de vidrio que nunca se utilizaron
son ligeramente alcalinos, para neutralizarlos se
debe seguir el siguiente procedimiento:
1. Colocar en una cubeta grande una solución de
HCl al 2%
2. Sumergir el material y dejar por 24 horas.
3. Enjuagar 2 veces -con agua corriente y luego
con agua desmineralizada.
4. Dejar secar.
Para la esterilización del material:
1. Si se trata de tubos o frascos de boca angosta
preparar rapones de algodón. Cubrir con
papel Kraft o periódico y asegurar con una
pita.
2. Si se trata de placas Petri, tijeras, hisopos,
bajalenguas cubrirlas completamente con
papel Kraft para protegerlas del medio
ambiente.
Dra. Vilma Béjar Castillo
Lic. Elizabeth Pareja Cuadros
B. Recipientes sucios de vidrio
Como los frascos, placas, tubos. etc. contienen
cultivos bacterianos deben colocarse en el
autoclave.
1. Descontaminación por medio del autoclave
1. Colocar el material en el autoclave por 15
minutos a 121°C x 15 lbs/pulg 2.
2. Una vez que se haya enfriado el material,
vaciar el contenido en el caño si es líquido
y en bolsas aparte para los agares de esa
manera evitaremos estancamientos en la
cañería.
3. Lavar con agua y detergente, previo
remojo de 2 - 3 horas. “Lavado grueso”
4. Enjuagar con agua corriente a chorro
continuo, luego dejar en remojo con agua
enjuagar con agua limpia y finalmente con
agua desmineralizada. “Lavado fino”.
5. Dejar secar los materiales.
C. Materiales con residuos biológicos y
punzocortantes:
Serán llevados a autoclavados y luego serán
incinerados.
D. Pipetas
1. Después de usar una pipeta, debe colocarse en
una sustancia desinfectante para evitar que los
residuos orgánicos dañen el material.
2. Autoclavar
3. Para la limpieza seguir los procedimientos
señalados.
4. Secar las pipetas a 60°C o al medio ambiente.
5. Para la esterilización de las pipetas éstas
deben ser envueltas con tiras de papel Kraft
previamente se debe colocar un pequeño trozo
de algodón en el extremo distal, para evitar
accidentes al momento de pipetear.
D. Laminas portaobjetos

Portaobjetos nuevos
1. En un recipiente con agua añadir
detergente, colocar las láminas y dejar toda
la noche.
2. Enjuagar cada portaobjeto con agua
corriente a chorro continuo hacia eliminar
completamente el detergente.
3. Secar las láminas una por una con un trapo
suave que no desprenda pelusa.
4. Posteriormente examinarlos, si se observa
trazos de grasa, limpiar con alcohol corriente.
5. Juntar los portaobjetos en grupos de 10, 20
y envolverlos en hojas de papel o guardarlos
en recipientes de vidrio con tapa.
Portaobjetos sucios
1. Si las láminas tienen residuos de aceite de
inmersión, dejar en remojo en agua fría o
tibia con detergentes durante 24 horas.
2. Para el enjuague y limpieza seguir los
procedimientos señalados anteriormente.
Portaobjetos cubiertos con laminillas
1. Con ayuda de una aguja y pinza separar la
laminilla o cubreobjetos y proceder como en
el caso anterior.
VI. PREGUNTAS DE APLICACIÓN
1. Mencione las condiciones de uso del autoclave
………………………..…………………………
………………………………..…………….……
2. Cite un desinfectante y sus principales
componentes.
ARTICULO DE REVISIÓN
Medwave 2009 Mar;9(3):e3837 doi:
10.5867/medwave.2009.03.3837
Manejo de desechos biológicos peligrosos en
atención primaria de salud
Biohazardous waste management in primary
health care
Julia Verdera Hernández, Ileana Selene Izquierdo
Terán, Viana Barceló Pérez, Pedro Prieto Sosa, Niurka
Pedraza Ávalos
Introducción
La eliminación de los desechos peligrosos que se
generan en las instituciones de salud tiene
riesgos y dificultades especiales, debido a
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MANUAL DE MICROBIOLOGIA
…………………………….…….…..……
………………..…………….……………
……………………………………………
…………………………………………….
3. Si no contamos con un incinerador en el
trabajo debemos :
……………………………………..……………
……………...……………………………………
……………………………………………...……
……...………………………...….………………
Bibliografía
1. Quiceno Villegas, Leonor y cols: Prevención y
Control de factores de riesgo biológico.
VIH/SIDA Y Hepatitis. Primera Edición.
1996. Instituto de Seguros Sociales.
Administradora de Riesgos Profesionales.
Universidad de Antioquia.
2. Junco Díaz, R y cols: Seguridad ocupacional en
el manejo de los desechos peligrosos en
instituciones de salud. Rev Cubana Hig
Epidemiol v.41 n.1 Ciudad de la Habana ene.-
abr. 2003.
3. Cuba. Decreto - Ley No. 190 de la Seguridad
Biológica. La Habana: Gaceta Oficial de la
República de Cuba. Consejo de Estado
(Febrero 15, 1999).
4. Junco Díaz, R. y cols: Desechos hospitalarios:
aspectos educativos en la implementación de
su manejo. Rev Cubana Hig Epidemiol
2000;38(3):195-200.
5. Martí Solé, María del C: NTP 372: Tratamiento
de residuos sanitarios. Disponible en
www.mtas.es/insht/principal/mapa.htm. 2008
algunas de las fracciones que los componen.
Estos riesgos involucran en primer término al
personal que debe manejar los desechos tanto
dentro como fuera del establecimiento, que si no
dispone de capacitación suficiente ni medios de
protección personal, equipos y herramientas de
trabajo apropiados se expone al contacto directo
con gérmenes patógenos o a la acción de objetos
cortopunzantes como agujas, jeringuillas, trozos
de vidrio, bisturíes y otros. El manejo deficiente
de desechos peligrosos en centros de salud
involucra tanto a los trabajadores y pacientes
expuestos como a la comunidad y al medio
ambiente circundante
21
Es importante convertir en una práctica común la
separación de las diferentes fracciones que
componen los desechos sólidos, tanto para
disminuir los costos como para minimizar los
riesgos para el personal que manipula estos
materiales y para la salud de la comunidad. Para
esto lo primero es adoptar una clasificación de
dichos desechos; en este artículo se propone
utilizar la que propone la OMS para países en vías
de desarrollo, que los agrupa en:
• Desechos generales no peligrosos.
• Objetos cortopunzantes, infectados o no.
• Desechos infecciosos, excepto objetos
cortopunzantes infectados, como: materiales
provenientes de salas de aislamiento de
pacientes; materiales biológicos; sangre
humana y productos derivados; y desechos
anatómicos.
• Desechos químicos y farmacéuticos.
Para un manejo seguro de los desechos biológicos
peligrosos en el área de Atención Primaria de
Salud, que es la más cercana a la comunidad y por
tanto la que más pudiera afectar al medio
ambiente si no se realizan prácticas adecuadas, se
deben tener en cuenta estas etapas:
1. Identificación y envasado de los desechos
generados (generación, segregación,
acondicionamiento primario).
2. Recolección y transporte interno.
3. Almacenamiento temporal.
4. Recolección y transporte externo.
5. Tratamiento.
6. Disposición final.
Plan de contingencia.
Los departamentos de la Atención Primaria de
Salud que generan mayor volumen de
desechos biológicos peligrosos infecciosos
son: laboratorios, central de esterilización,
regulación menstrual, cuerpo de guardia,
estomatología, lavandería, quirófanos, áreas
de estomatología y salones de endoscopías.
Los mismos deben trazar un programa para la
clasificación y manejo de los desechos sólidos
que colabore con la salud del personal
expuesto, la comunidad y el medio ambiente
en general.
Personal en riesgo
Es esencial que cada persona realice sus
propias acciones en lo relativo al manejo de
los desechos peligrosos.
Personal asistencial
En este grupo se incluyen enfermeras,
médicos de asistencia, técnicos de laboratorio
y otras personas que generan desechos
peligrosos y tienen riesgo por exposición antes
de que estos desechos sean depositados en los
contenedores. Por esta razón, es esencial que
los desechos sean descartados rápida y
directamente en los contenedores habilitados
para ese efecto en cada fuente de generación.
Personal de limpieza
Este grupo está en riesgo por exposición
ocupacional, ya que ellos son quienes manejan
los contenedores de desechos, los recolectan
desde el lugar donde se generan y los trasladan
a las áreas de almacenamiento y tratamiento.
Personal de mantenimiento
Este grupo se encuentra en riesgo por
exposición ocupacional cuando repara o da
mantenimiento a equipos que fueron
contaminados por derrames o salpicaduras de
desechos líquidos peligrosos.
Operadores de equipos de tratamiento
Para este grupo existe riesgo en la
manipulación de los desechos que no se
envasaron en contenedores apropiados.
Trabajadores en los sitios de disposición final
Están en riesgo por exposición a agentes
infecciosos, especialmente polvos y aerosoles,
cuando los desechos no son tratados
previamente.
Las medidas generales:
Para prevenir los accidentes en el manejo de los
desechos incluyen:
• Uso de contenedores apropiados para cada
tipo de desecho.
• Carros recolectores adecuados para los tipos
de contenedores empleados.
• Carros recolectores que sean fáciles de cargar,
mover, descargar y limpiar.
• Áreas adecuadas para el almacenamiento de
los desechos.
• Disponibilidad de los materiales necesarios en
caso de derrame.
Normas de bioseguridad para el manejo de
desechos biológicos peligrosos
• Utilizar en forma permanente los elementos de
protección personal: guantes, protectores
oculares, mascarilla, delantal plástico y botas,
que se deben adaptar a la tarea que se va a
realizar y mantener en buenas condiciones de
higiene.
• Evacuar los desechos anudando las bolsas que
los contienen. No introducir las manos dentro
del recipiente, pues ello puede ocasionar
accidentes del trabajo por cortaduras,
pinchazos o contacto con material
contaminado.
• Evitar vaciar desechos de un recipiente a otro.
 MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

• Considerar todo material que esté envasado

como contaminado. No mezclar el material en
su recolección, transporte y almacenamiento.
• Asegurarse de que todos los desechos
cortopunzantes y de riesgo biológico hayan
sido sometidos a proceso de desinfección.
• Mantener en óptimas condiciones de higiene
los recipientes, carros de transporte, áreas de
almacenamiento y áreas de disposición final
de desechos.

Conclusión
Las áreas de Atención Primaria de Salud son
fuentes generadoras de desechos biológicos
peligrosos; por lo tanto deben contar con
programas específicos para el manejo de los
mismos, teniendo en cuenta las normas de
bioseguridad que se deben observar en cada etapa
del manejo.

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23
 Métodos de esterilización recomendados de preferencia para distintos materiales

Material Método de Parámetros de Consideraciones

Esterilización esterilización
Líquidos Autoclave 134oC ó 135oC Equipo con ciclo de
líquidos
Algodones Autoclave 134o C ó 135oC
Artículos de goma o látex Autoclave 121oC
Algodón y gasas Autoclave 134 C ó 135oC
o

Siliconas Autoclave 121oC

Plásticos Óxido de etileno 37oc-55oC
Plásma 50oC
Formaldehído 50oC-60oC
Acero inoxidable Autoclave 134oC ó 135oC
Estufa por calor seco 180oC
Aluminio Autoclave 134 C ó 135oC
o

Estufa por calor seco 180oC

Maderas Autoclave 134 C ó 135oC
o

Vidrios Autoclave 134oC

Estufa por calor seco 134 C ó 180oC
o

Aceites y petrolatos Estufa a calor seco 180oC De preferencia utilizar

soluciones estériles de
fábrica

Placas petri Tubos Pipeta

Tacho para eliminación de Tacho para eliminación de Logo de bioseguridad

material común material punzocortante

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