Unidad # 2: Fundamentos de Espectros

ANALISIS INSTRUMENTAL INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing.
Armando Salinas Sánchez 12
UNIDAD # 2
FUNDAMENTOS DE ESPECTROSCOPIA
METODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANALISIS
Los métodos espectrométricos, opticométricos, o espectroscópicos, son un amplio grupo de métodos analíticos que se
basan en la espectroscopia atómica y molecular. La espectroscopia es un término general para la ciencia que trata de
las distintas interacciones de la radiación con la materia., las interacciones de interés o de mayor importancia se
producían entre la radiación electromagnética y la materia, sin embargo, ahora el término espectroscopia se ha
ampliado para incluir las interacciones entre la materia y otras formas de energía, por ejemplo, las ondas acústicas y
los haces de partículas como iones o electrones.
Los métodos espectrométricos más ampliamente utilizados son los relacionados con la radiación electromagnética,
que es un tipo de energía que toma varias formas, de las cuales las más fácilmente reconocibles son la luz y el calor
radiante. Sus manifestaciones más difícilmente reconocibles incluyen los rayos gamma y los rayos X, así como las
radiaciones ultravioletas, de microondas y de radiofrecuencia.
Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medición de la radiación electromagnética emitida o
absorbida por los analitos. Los métodos de emisión utilizan la radiación emitida cuando un analito es excitado por
energía térmica, eléctrica o energía radiante. Los métodos de absorción se basan en la disminución de la potencia (o
atenuación) de un haz de radiación electromagnética como consecuencia de su interacción con el analito.
CLASIFICACION
Los métodos espectroscópicos de análisis se clasifican de la siguiente manera:
1. Métodos basados en la Absorción de radiación
- Colorimetría
- Espectrofotometría (visible, ultravioleta, absorción atómica)
- Resonancia magnética nuclear
2. Métodos basados en la Emisión de radiación
- Fotometría de flama
- Fluorescencia
- Métodos radioquímicos
- Rayos X
3. Métodos basados en la dispersión de la radiación
- Turbidimetría
- Espectroscopia Raman
- Nefelometría
4. Métodos basados en la refracción de radiación
- Refractometría
- Interferometría
5. Métodos basados en la Rotación de radiación
- Polarimetría
- Dispersión óptica rotatoria
IMPORTANCIA
Uno de los métodos fisicoquímicos más empleados en el análisis es el de la medida de la absorción o emisión de la
energía radiante por la materia, llamados métodos opticométricos. La gran difusión y aplicación de esta técnica es
consecuencia de los factores siguientes:
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1) El amplio intervalo de longitudes de onda o de frecuencia de energía radiante y sus diferentes modos de interacción
con la materia.
2) La existencia en el mercado de instrumentos de medida cada vez más sofisticados y precisos.
3) Las ventajas inherentes que presenta el método.
• Generalmente el análisis es muy rápido, una vez que se ha establecido el método para eliminar
interferencias, el resto del análisis es rápido. Requiere menor tiempo
• El método es muy cómodo para medidas repetidas de un mismo constituyente, como sucede en la rutina
del análisis de control, permitiendo un análisis en serie. Se realizan gran cantidad de mediciones-
• Aplicable a la determinación exacta de cantidades de constituyentes mucho menores que con los métodos
gravimétricos o volumétricos.
• Métodos que permiten determinaciones de trazas o microcantidades de componentes de interés en
muestras diversas.
• Estos métodos suelen emplearse para determinar cuantitativamente pequeñas cantidades de una
sustancia.
• Con frecuencia es un método no destructivo de la muestra, lo que puede ser importante cuando el
constituyente o analito es muy valioso, como sucede en los programas de investigación con ciertas sustancias
bioquímicas o elementos transuránicos.
• Presentan exactitud y precisión aceptable
Los métodos espectrofotométricos tienen tal importancia que son los más utilizados en casi todos los laboratorios
industriales como elementos de investigación, control de calidad o de enseñanza. Estos métodos presentan como se
observa varias y preponderantes ventajas en la solución de muchos problemas. Estas ventajas incluyen rapidez,
sencillez, especificidad y sensibilidad.
ENERGIA RADIANTE
La energía radiante se define como la energía transmitida en forma de radiación electromagnética y se propaga en
forma de ondas transversales, su vibración es perpendicular a la dirección de su propagación. Puede ser emitida por
sustancias bajo condiciones de gran excitación, tales como las producidas por altas temperaturas o por descargas
eléctricas. Esta energía al entrar en contacto con la materia puede ser absorbida, transmitida, reflejada y refractada
por muchas sustancias en diferentes estados de agregación (sólido, líquido, disolución y gas) a la radiación incidente a
una longitud de onda apropiada.
La radiación electromagnética es un tipo de campo electromagnético que se propaga a través del espacio
transportando energía de un lugar a otro. Desde el punto de vista clásico, la radiación electromagnética son las ondas
electromagnéticas generadas por las fuentes del campo electromagnético y que se propagan a la velocidad de la luz.
ENERGIA RADIANTE COMO MOVIMIENTO ONDULATORIO

La teoría Ondulatoria es necesaria para explicar la difracción, la refracción y otros efectos ópticos, pero en la
actualidad se sabe que tanto la emisión como absorción de energía radiante se efectúa mediante partículas discretas
llamadas fotones o quantos, que son partículas muy pequeñas con una masa de reposo nula; se desplazan en forma
rectilínea, hasta ser absorbidos por la materia.
Se considera que las ondas por las cuales es transportada la energía radiante consisten en desplazamientos eléctricos
y magnéticos que ocurren en ángulo recto con la línea de propagación de la radiación, en este tipo de ondas siempre
están en fase a 90 o uno respecto al otro. A esto se debe el hecho de usar el término ELECTROMAGNETICO al referirse
a este tipo de radiación.
Con estos criterios se considera a la radiación electromagnética como un campo de fuerza eléctrico oscilatorio en el
espacio, que está acompañado de un campo de fuerza magnético dispuesto perpendicularmente a la línea en que se
propaga la radiación. Los campos eléctrico y magnético asociados con la radiación son magnitudes vectoriales y se
representa mediante una flecha cuya longitud es proporcional a la magnitud de la fuerza del campo y cuya dirección es
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paralela a la de dicha fuerza. Por lo general sólo se emplea el vector eléctrico debido a que la fuerza eléctrica es la
causante de fenómenos ópticos como la transmisión, la reflexión, la refracción y la absorción de la radiación.
Para caracterizar a muchas de las propiedades de la radiación electromagnética, es conveniente adjudicar una
naturaleza ondulatoria a su propagación y describir estas ondas con parámetros como velocidad, frecuencia, longitud
de onda y amplitud. No obstante, en contraste con otros fenómenos ondulatorios no requiere medio de apoyo para su
transmisión y pasa fácilmente por el vacío. Esto nos indica que la radiación presenta una propiedad ondulatoria.
RADIACIÓN ELECTROMAGNETICA COMO ENERGÍA

La radiación presenta una teoría corpuscular o energética y señala que la radiación es netamente energética porque
puede ser transformada en otra forma de energía; calor, electricidad, luz, magnetismo, etc. en vista que la naturaleza
ondulatoria de la radiación electromagnética no explica los fenómenos de la absorción y emisión. La energía radiante
como pequeños paquetes de energía que toman el nombre de fotones de propagación ondulatoria y puede
caracterizarse por longitud de onda (), frecuencia (), y energía, lo que demuestra que la energía radiante no es
continua, sino que es compuesta por "cuantos o fotones", elementos de energía. La cantidad de energía que tiene cada
fotón depende de la frecuencia de la radiación. Esta energía varía ampliamente de un valor de frecuencia a otro; para
fotones de una misma frecuencia tienen la misma cantidad de energía.
La radiación electromagnética, cuyas ondas son todas de una longitud, se denomina monocromática (un solo color)
que significa que la radiación tiene una sola frecuencia, la radiación monocromática polarizada en un plano, que es el
tipo más simple de radiación; polarizada en un plano significa que la oscilación tiene lugar en un plano del espacio, y
sólo en uno y la radiación constituida por ondas de diferentes longitudes de onda se llaman policromáticas, es decir de
varios colores. Las ondas electromagnéticas se diferencian entre sí por su longitud de onda y se clasifican en largas,
cortas, ultracortas. La cantidad de energía por fotón varía ampliamente de un tipo de radiación a otro, pero todo fotón
de una longitud de onda dada posee exactamente la misma cantidad de energía que cualquier otro fotón de la misma
longitud de onda. La radiación monocromática es también radiación monoenergética y la radiación policromática es
también polienergética.
Movimiento ondulatorio de la Luz
LA MATERIA
La materia está integrada por moléculas o átomos, y puede presentarse en distintos estados físicos. Así, por ejemplo,
las moléculas pueden estar muy separadas entre sí, como en los gases, o bien formando aglomerados como en líquidos
y sólidos. Las moléculas de un sólido pueden ordenarse como cristales, tal como sucede con las sales inorgánicas, o
distribuirse desordenadamente, como en la madera. Cualquiera que sea su disposición, las moléculas están en
constante movimiento, no sólo de vibración, sino de rotación y traslación.
En el caso de átomos individuales, los electrones que giran pueden pasar de un orbital a otro, proceso que requiere un
cambio de energía. Tanto la estructura química de las moléculas como su ordenación influyen en la forma en que dicha
sustancia interacciona con la energía.
PARAMETROS ONDULATORIOS
Cualquier región del espectro podrá ser identificada por su frecuencia, longitud de onda o por su unidad de frecuencia.
FRECUENCIA ()
Se le define como el número de ondas u oscilaciones que pasan por un punto fijo en la unidad de tiempo y se le suele
indicar con la letra griega nu (v).
La unidad de frecuencia es el hertz (Hz). Una oscilación o ciclo por segundo es igual a un HERTZ, por lo tanto, se dice
que una frecuencia de 10 6 es igual a 10 6 Hz, o sea un megahertz (MHz).
LONGITUD DE ONDA ()

La letra griega lambda () minúscula representa la longitud de onda. Se le define como la distancia entre dos crestas
adyacentes (o dos valles) de una onda. O también se la define como la distancia en línea recta medida a lo largo de la
línea de propagación entre dos puntos que están en dos ondas adyacentes. A causa de lo cortas que son las longitudes
de onda, se expresan en unidades de dimensiones muy pequeñas, normalmente la micra (µ), la milimicra (mµ) o el
angstrom (Å). Así como otros tipos de unidades usuales que se presentan a continuación:
1 Å ángstrom = 0,1 mµ = 10-4 µ = 10-7 mm = 10-8 cm = 10-10 m

10 4 Å = 103mµ = 1 µ = 10-3 mm = 10-4 cm = 10-6 m.

µm = micrómetro = 10-6 metros = 10-4 cm = 1 micrón (µ)
nm = nanómetro = 10-9 metros = 10-6 cm = 1 milimicrón (mµ) = 10 Ao
El nanómetro ha sustituido a la antigua unidad milimicrón (mµ) y el micrómetro ha sustituido la antigua unidad micra
(µ).
UNIDADES DE LONGITUD DE ONDA PARA ALGUNAS REGIONES

ESPECTRALES
REGIÓN UNIDAD DEFINICIÓN
Rayos X Ángstrom Ao 10 -10 m
Ultravioleta / visible Nanómetro nm 10 -9 m
Infrarrojo Micrómetro m 10 -6 m
UNIDAD DE FRECUENCIA ().

Se define como el número de ondas por centímetro Es el inverso de la longitud de onda, se expresa en cm -1
(centímetros recíprocos) esta nomenclatura es muy usada en la región del infrarrojo. Cuando la longitud de onda en el
vacío se expresa en centímetros. El número de onda es importante porqué contrario a la longitud de onda, es
directamente proporcional a la frecuencia y a la energía de la radiación.
El número de onda es igual a la siguiente expresión:
1 1
 = ----- = --------
-
 cm
La Potencia radiante P de un haz de radiación es la energía del haz que llega a un área dada por segundo y que está en
toda su magnitud cuando incide sobre la materia y disminuye cuando la atraviesa, constituyéndose en el haz saliente o
transmitido con una potencia de radiación menor.
ENERGIA DE LA RADIACION ELECTROMAGNETICA

De acuerdo a la teoría Corpuscular la radiación se considera que está constituida por paquetes de energía llamados
fotones o cuantos. La energía de un fotón es variable y está en función de los parámetros frecuencia y de la longitud de
onda de la radiación, según Planck, cada fotón lleva incorporada una determinada cantidad de energía y su relación que
existe entre la energía de un fotón y su frecuencia de la luz viene dada por la siguiente ecuación:
E=.h (1)
Donde:
E = Energía del fotón
= Frecuencia
27 34
h = Constante de Planck (6,626 x 10- erg.seg) o 6,626 x 10- J.s 4.13566743 x 10 -5 eV.s
El físico Louis Víctor de Broglie (1892-1987) relacionó la longitud de onda, la velocidad de la luz (C), y la frecuencia ()
de la siguiente manera:
La velocidad de la luz (C ) es:
C=.
C
la frecuencia es:  = -----
Reemplazando la frecuencia en: E = h. 

Se tiene
C
E = ----- h (2 )

Donde:
10
C= 3 x 10 cm. /seg o 3 x 10 8 m /s
 = longitud de onda
H = Constante de Planck
De estas relaciones matemáticas se puede llegar a las siguientes conclusiones:

“La energía es inversamente proporcional a la longitud de onda (), y directamente proporcional a la frecuencia () “
En el vacío, la velocidad de la luz a la cual se propaga la radiación es independiente de la longitud de onda y alcanza su
valor máximo. Esta velocidad, representada por el símbolo C, se ha determinado que vale tanto en el vacío o en el aire 3
x 10 10 cm / seg. Es importante señalar que la velocidad de la radiación en el aire varía muy poco por lo tanto la
velocidad para el aire o para el vacío, es la misma en función de ello, “C” toma el valor de 3.00 x 10 8 m/seg o 3.00 x 10
10
cm /seg
Se demuestra claramente por los cálculos que las radiaciones de menor longitud poseen mayor energía de ahí su poder
de penetración y su capacidad de interacción con la materia. Por ejemplo, calcular la energía de una radiación cuya
longitud de onda es de 425 NM.
E = 3 x 1010 cm / seg x 6.625 x 10 -27 erg-seg/ fotón = 4.676 x 10 -12 erg /fotón
425 NM x 10 -7 cm
1 NM
Para una radiación con longitud de onda de 500 nm, se tiene:

E = 3 x 10 10 cm / seg x 6.625 x 10 -27 erg-seg/ fotón = 3.975 x 10 -12 erg / fotón
500 NM x 10 -7 cm
1 NM
Donde E es la energía en ergios/ fotón. La relación entre las diversas formas de expresar la energía para una longitud
de onda es la siguiente: 1 electrón voltio (e.v.) =1,602 x 10-12 ergios = 23,066 calorías = 8,0 x 103 cm-1 = 1,25 x 10-4 cm
= 1,25 x 104 Å = 1,25 µ
REGIONES ESPECTRALES
El espectro de energía radiante o espectro electromagnético es único y continuo y abarca aproximadamente 20
órdenes o tipos de longitudes de onda (o energía). Las ondas electromagnéticas suelen clasificarse en diferentes
grupos, según sea su frecuencia, aunque esta clasificación no permite establecer unos límites precisos para cada
grupo. Se denomina espectro electromagnético al conjunto de todos los tipos de ondas electromagnéticas, y
comprende una inmensa gama de longitudes de onda o energías. Las divisiones se basan en los métodos que se
precisan para generar y detectar las diversas clases de radiación, en la tabla se puede apreciar que la región visible
del espectro y que es percibido por el ojo humano.
ESPECTRO DE RADIACION ELECTROMAGNETICA

Para el caso de la identificación de las diferentes regiones del espectro se ha utilizado unidades de longitud apropiadas,
cuya magnitud está acorde con el tamaño de la longitud de onda, así por ejemplo para el visible usualmente se emplea
el nanómetro (nm), eso no impide el uso de unidades angstrom (Å). Para el caso de la región del infrarrojo es más
frecuente el uso de unidades de frecuencia (cm-1).
Este espectro electromagnético se divide en varias regiones que son:
1.- Ondas de radio, son las ondas electromagnéticas que se utilizan en telecomunicaciones, incluye las ondas de radio y
de televisión. Su rango de frecuencia comprende desde unos pocos hercios hasta 1 x 10 9 Hz, distinguiéndose en esta
zona diferentes bandas.
2.- Microondas, se utilizan en sistemas de comunicaciones como el radar o la banda UHF de televisión y también en los
hornos de microondas. Su rango de frecuencias comprende desde 1 x 10 10 Hz hasta 1 x 10 11 Hz.
3.- Infrarrojos, son las ondas electromagnéticas que emiten los cuerpos calientes. Tienen diferentes aplicaciones en
industria, medicina, etc. Comprenden la zona incluida entre 1 x 10 11 Hz y 4 x 10 14 Hz.
4.- Luz visible, incluye una estrecha franja entre 4 x 10 14 y 8 x 10 14 Hz. Corresponde a esta banda las frecuencias que
corresponden a cada color.
5.- Ultravioleta, esta banda comprende el rango de frecuencias que va de 8 x 10 14 Hz hasta 1 x 10 17 Hz.
6.- Rayos X, comprende un gama de frecuencias que incluye desde 1.1 x 10 17 hasta 1.1 x 10 19 Hz, se usan en medicina.
19
7.- Rayos gamma, comprenden las frecuencias incluidas a partir de 1 x 10 Hz, son producidos por numerosas
sustancias radioactivas.
INTERACCION DE LA ENERGIA RADIANTE CON LA MATERIA

Cuando la radiación pasa desde el vacío a la superficie de un material determinado, el vector eléctrico de la radiación
interacciona con los átomos y moléculas. La naturaleza de esta interacción depende de las propiedades de la materia y
da lugar a los llamados fenómenos ópticos.
Hay varios mecanismos de interacción entre la materia y la energía radiante. Algunos de estos fenómenos surgen de la
naturaleza ondulatoria de la energía radiante, entre ellos que tienen particular importancia en análisis son.
La difracción es la modificación que experimentan todas las ondas en movimiento al pasar por los bordes de cuerpos
opacos, al atravesar estrechas hendiduras o agujeros o al ser reflejadas desde superficies rayadas.
La refracción es el encorvamiento o cambio de dirección de un haz de energía radiante al pasar oblicuamente de un
medio a otro medio de diferente densidad. Este encorvamiento es resultado de la ligera diferencia en la velocidad de la
radiación electromagnética en los medios y de la longitud de onda de la radiación.
La rotación óptica es el fenómeno por el cual el plano de polarización de la luz polarizada gira durante el paso de la luz
por un medio material. La composición cualitativa y cuantitativa del medio determina la ocurrencia o no de esta
rotación.
Los átomos, iones o moléculas pueden absorber radiaciones si la energía de los fotones es la de las frecuencias
naturales de valoración de los electrones y/o de los átomos en la molécula. Se dice entonces que la materia que ha
absorbido la energía ha pasado a un estado excitado. La relación de la energía dada anteriormente muestra que la
energía de los fotones aumenta con la frecuencia (o decrece con la longitud de onda). Los fotones de energía diferente,
es decir, de energía radiante de distinta longitud de onda producen efectos diferentes en el material absorbente.
1. Longitudes de onda muy cortas (rayos gamma y cósmicos) pueden dar lugar a transformaciones nucleares.
Las energías son del orden de millones de electrón voltios (mev).
2. Los rayos X producen transiciones de los electrones en las capas internas del átomo, la absorción de rayos X
es, por tanto, independiente del estado de combinación de los átomos. Se requieren energías de varios cientos
o varios miles de electrón voltios.
3. La absorción de radiaciones de las zonas ultravioletas y visible del espectro afecta a los electrones de la
capa externa (de valencia) de los átomos; de aquí que dependa del estado de la combinación de átomos. Por
ejemplo, el ión bicromato es anaranjado, el ión cromato es amarillo, el cromo (III) verde solvatado en agua y
violeta en algunos complejos. Las energías son del orden de 1 a 25 ev (electrón voltio).
4. La absorción en el infrarrojo próximo altera las vibraciones de las moléculas. Las energías son del orden de
0,01 a 1 ev.
5. Cuando se absorbe energía en el infrarrojo lejano y en la región de las microondas se producen alteraciones
en la rotación de las moléculas, necesitándose energías bajas del orden de 10 a 10 ev. (electrón voltio)
El PROCESO DE ABSORCIÓN
El paso de un haz de radiación a través de un medio transparente de un sólido, líquido, o gas va acompañado de la
absorción parcial de aquélla, y que también la absorción de radiación es equivalente a una absorción de energía.
Entonces cuando una molécula absorbe un fotón, la energía de la molécula se incrementa y se dice que la molécula
pasa a un estado de transición o llamado estado de excitación, si una molécula emite un fotón, su energía disminuye. El
estado de menor energía de una molécula se llama estado basal o fundamental. Cuando un átomo, ión o molécula
absorbe radiación y también un fotón, la energía que recibe da como resultado una alteración de su estado, se dice que
entonces la especie está excitada (estado de excitación), la excitación es un proceso en el cual una especie química
absorbe energía térmica, eléctrica o radiante y es promovida a un estado de energía superior. La excitación puede
consistir en alguno de los siguientes procesos:
CAMBIOS ELECTRÓNICOS
Los electrones en las moléculas se encuentran girando en niveles de energía bien definidos. En condiciones normales,
la molécula no está excitada y los electrones se encuentran en el orbital más bajo; se dice entonces que la molécula se
encuentra en su estado fundamental.
Si una molécula absorbe suficiente energía radiante, los electrones pasan del orbital más bajo a otro de energía más
elevada; en el nuevo estado tanto la molécula como el electrón se encuentran excitados.
Cuando los electrones pertenecen a un átomo, la longitud de onda de la radiación está muy bien definida en una banda
de frecuencias muy estrecha, pero cuando los electrones pertenecen a una molécula, la energía necesaria para
promover el electrón a un estado excitado varía con el tipo de enlace molecular en que se encuentre implicado. Así por
ejemplo, los electrones de enlaces parafínicos exigen más energía que los enlaces no saturados, tales como los
aromáticos. Por otra parte, a las energías electrónicas se añaden las de rotación y vibración.
Estos cambios consisten en el cambio de energía de los electrones distribuidos alrededor de los átomos de la
molécula, es la transición de un electrón a un nivel energético superior provocado por la absorción de
radiación.
Los electrones en un átomo ocupan normalmente las orbitales electrónicas de menor energía. En un átomo de litio, por
ejemplo, dos electrones están normalmente en la orbital 1s y uno en la orbital 2 s. este estado electrónico normal de un
átomo se designa como su estado fundamental.
Si se suministra a ese átomo exactamente la cantidad de energía apropiada, el electrón 2 s puede trasladarse a una
orbital 3 s. De igual manera, un electrón 1 s puede ser trasladado a una orbital de energía más alta. Un átomo que tiene
uno más electrones en una orbital de energía más alta se dice está en un estado excitado.
CAMBIO VIBRACIONAL
Los átomos enlazados que constituyen una molécula vibran de la misma forma que lo harían dos objetos más grandes.
Una molécula puede imaginarse como un conjunto de átomos unidos por muelles o enlaces químicos. Los átomos
pueden vibrar aproximándose o alejándose, o bien, flexionarse en ángulo recto, la energía asociada con estos
movimientos es la energía vibratoria.
Los cambios electrónicos examinados hasta ahora en conexión con átomos y iones se producen cuando entra en
interacción energía radiante con moléculas. Pero, además, las moléculas exhiben movimientos de vibración, cada
uno de los cuales está asociado con una cantidad definida de energía. Exactamente lo mismo que hay niveles de
energía discretos asociados con el movimiento de vibración dentro de la molécula, una molécula puede ser excitada de
un nivel de energía vibracional a otro más alto, por la absorción de un fotón de la cantidad justa requerida de energía.
Por ello, las moléculas absorben preferencialmente fotones cuyas energías corresponden a las diferencias en niveles
de energía vibracionales dentro de ellas. Una molécula excitada vibracionalmente, al igual que un átomo excitado
electrónicamente, vuelve de ordinario rápida y espontáneamente a su estado normal fundamental, con pérdidas de
energía.
La vibración molecular suele ir acompañada de un aumento en la rotación y por ello, en la práctica, la energía
absorbida corresponde a una combinación de energía vibratoria y rotatoria.
CAMBIO DE ROTACIÓN
Un tercer mecanismo por el cual puede ser absorbida energía radiante por la materia implica los niveles de energía
rotacional de una molécula absorbente. Por ejemplo, en una molécula de metanol no sólo hay niveles de energía
electrónica asociados con todos los átomos, y movimientos y niveles de energía vibracionales entre cada par de
átomos adyacentes, sino que hay también rotaciones de las moléculas como un todo. Las energías asociadas con estos
movimientos están también cuantizadas, esto es, sólo son posibles niveles de energía específicos para una molécula
dada.
Una molécula absorbente puede ser excitada de un nivel de energía rotacional a otro más alto, por absorción de un
fotón que proporcione precisamente la cantidad de energía necesaria para ello y una molécula puede volver a su
estado normal fundamental, o a uno menos excitado, por emisión de un fotón de radiación electromagnética.
No todas las clases de moléculas experimentan cambios rotacionales por la absorción de fotones. Estas absorciones se
encuentran con la mayor frecuencia en moléculas que tienen dipolos eléctricos permanentes o momentos magnéticos
permanentes.
Las cantidades de energía asociadas con cambios de niveles de energía rotacional son en general muy pequeñas
comparadas con las transiciones electrónicas y vibracionales. Se encuentran los espectros de absorción rotacional
pura en las regiones infrarrojas lejana y de microondas del espectro electromagnético.
Cada una de estas transiciones o excitación requiere una cantidad definida de energía; la probabilidad de que ocurra
una transición particular es máxima cuando el fotón absorbido proporciona exactamente la cantidad de energía
necesaria para la misma. En estas circunstancias, la energía del fotón es transferida a la molécula promoviéndola a un
estado de energía más elevada o estado de excitación. La excitación de una especie M a su estado excitado M.
M + hv ------------>M 
Después de un tiempo muy breve, la especie excitada se relaja a su estado basal, cediendo su energía a otros átomos o
moléculas del medio, este proceso produce un ligero aumento de temperatura en el sistema, y puede describirse con la
ecuación
M  -----------→ M + calor (hv)

La cantidad de energía necesaria para cada uno de los tipos de transiciones varía considerablemente entre ellos. En
general, las transiciones electrónicas promueven a los electrones a niveles superiores consumen cantidades
de energía mayores que las que precisan para provocar cambios vibracionales, y éstos a su vez, mayores que
las que producen alteraciones en los modos de rotación. Así, las absorciones que se observan en las regiones de
las microondas y del infrarrojo lejano son debidas a desplazamientos en los niveles rotacionales, puesto que la energía
de la radiación es insuficiente para dar lugar a otros tipos de transición. En cambio, las variaciones de los niveles
vibracionales son responsables de las absorciones en las regiones infrarrojas y visible. Como que para cada nivel
vibracional existen una serie de estados rotacionales, en dichas regiones del espectro se observa la absorción de
grupos de longitudes de onda cuyas energías sólo difieren ligeramente entre sí. La absorción debida a la promoción de
un electrón a algún nivel de energía superior tiene lugar en las regiones del espectro correspondientes al visible, al
ultravioleta y a los rayos X.Un ejemplo, de la interacción con la materia en lo que se refiere a la absorción de radiación;
es cuando pasa radiación de luz policromática (blanca) a través de un cuerpo transparente que podría ser amarilla. El
cuerpo dejará pasar la luz amarilla, absorbiendo las demás radiaciones. En otros términos el cuerpo transparente o no
rechaza el color amarillo, razón por lo que el ojo humano percibe esa radiación cuya longitud de onda corresponde el
color amarillo. Para demostrar este hecho, si al cuerpo supuestamente amarillo se hace incidir radiaciones
policromáticas ausentes de la radiación amarilla, el cuerpo absorbe estas radiaciones y aparece negro. Las
frecuencias a colores que han sido absorbidas o eliminadas por absorción o emisión son en realidad energía
electromagnética que se ha transferido a átomos o moléculas han pasado de un estado de mínima energía
(fundamental) a un estado de excitación o más alta energía.
Este proceso de excitación tiene un periodo de vida muy corto, más o menos de 10-8 seg. Al volver el átomo o
moléculas a su estado basal, llamado proceso de Relajación, que es un proceso en el que una especie excitada pierde
su exceso de energía y regresa a un estado de menor energía. (Estado de relajación), indudablemente tendrá que
desprender algún tipo de energía, en su defecto sería imposible el retorno de estado excitado al estado basal. La
energía absorbida por los átomos, iones o moléculas se disipa rápidamente dentro del material absorbente,
normalmente en forma de calor; pero a veces puede ser emitida como energía radiante como luz, fluorescencia o
fosforescencia, etc.
ESPECTROS DE ABSORCION
Espectro viene a ser una especie de imagen de la energía radiante absorbida o emitida por un cuerpo, cuando
interacciona con la materia. El espectro de absorción es una gráfica de porcentaje de transmitancia, absorbancia,
logaritmo de absorbancia o absortividad molar de un analito en función de la longitud de onda o del número de onda y
ocasionalmente de la frecuencia. El espectro de absorción es una gráfica que indica en que forma la absorbancia
depende de la longitud de onda.
Las curvas espectrales son características de la sustancia absorbente y, por tanto, estas curvas pueden utilizarse
para el análisis cualitativo del soluto. Algunas sustancias dan espectros con muchos picos como los compuestos
orgánicos y son mucho más complicados que las inorgánicas.
Espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación electromagnética incidente que un
material absorbe dentro de un rango de frecuencias Cada elemento químico posee líneas de absorción en
algunas longitudes de onda, hecho que está asociado a las diferencias de energía de sus distintos orbitales atómicos.
De hecho, se emplea el espectro de absorción para identificar los elementos componentes de algunas muestras,
como líquidos y gases; más allá, se puede emplear para determinar la estructura de compuestos orgánicos. Un ejemplo
de las implicaciones de un espectro de absorción es que aquel objeto que lo haga con los colores azul, verde y amarillo aparecerá de
color rojo cuando incida sobre la luz blanca. Cuando incide una luz a un metal al superar su energía umbral saca un electrón, si la
energía es superior la energía que sobra se convierte en energía cinética.
El gráfico de la cantidad de radiación absorbida respecto a la longitud de onda para un compuesto particular se conoce
como espectro de absorción. El espectro de absorción normalizado es característico para cada compuesto particular,
no cambia con la concentración y es como la "huella digital" química del compuesto. En las longitudes de onda
correspondientes a los niveles de energía resonantes de la muestra, se absorben algunos de los fotones incidentes, lo
que provoca una caída en la intensidad de transmisión medida y una pendiente en el espectro. El espectro de absorción
puede medirse usando un espectrofotómetro. Conociendo la forma del espectro, la longitud de ruta óptica y la cantidad
de radiación absorbida, se puede determinar la estructura y la concentración del compuesto.
Como se sabe, los átomos son capaces de emitir radiación electromagnética o absorberla al ser estimulados mediante
calentamiento o radiación, respectivamente, pero solo en algunas frecuencias. Estas frecuencias de emisión o
absorción determinan una serie de líneas que recogidas en un diagrama reciben el nombre de espectro de emisión o de
absorción del átomo correspondiente. Se trata en todos los casos de espectros discontinuos.
Los espectros continuos son los que abarca toda la frecuencia de las radiaciones que tienen pasando de una a otra
gradualmente, sin saltos.
La luz blanca tiene un espectro continuo, formado por siete colores (rojo, anaranjado, amarillo, verde, azul, añil y el
violeta) y cada uno de ellos corresponde a radiaciones de una frecuencia determinada; cuando termina un color
empieza otro, sin que, entre ellos, haya ninguna zona oscura. En cambio, los elementos gaseosos de un tubo de
descarga emiten una luz que posee un espectro discontinuo, es decir, sólo contiene determinadas radiaciones, que
aparecen en forma de rayas entre las cuales hay una zona oscura.
ABSORCIÓN ATÓMICA
Al incidir radiación policromática visible y ultravioleta sobre una sustancia constituida por partículas monoatómicas;
únicamente son absorbidas algunas frecuencias de esa gama. La relativa simplicidad de los espectros se debe al
pequeño número de posibles estados de energía de las partículas absorbentes. La excitación solo puede producirse
mediante un proceso electrónico en el que uno o más de los electrones del átomo se promocionan a un nivel de
energía superior. Por ejemplo; para el caso particular del Sodio, al estado monoatómico, absorbe radiación
correspondiente a 589,00, a 589,59 nm los electrones del átomo de sodio pasa de un nivel 3s a 3p. Se reduce en un
espectro con un pico fuerte de absorción a esa longitud de onda. La radiación visible y ultravioleta tiene la energía
necesaria para producir transiciones únicamente de los electrones más externos o llamados de valencia o electrones
enlazantes. Por otra parte, las frecuencias de los rayos X son varios órdenes de magnitud más energética y son
capaces de interaccionar con los electrones más próximos al núcleo de los átomos. Los picos de absorción
correspondientes a las transiciones electrónicas de estos electrones más internos se observan, por tanto, en la región
de los rayos X.
ABSORCIÓN MOLECULAR
Los espectros de absorción de las moléculas poliatómicas, especialmente en estado condensado, son
considerablemente más complejos que los espectros atómicos, ya que el número de estados de energía de las
moléculas es generalmente enorme si se compara con el de los átomos aislados. La energía interna de una molécula en
su forma total corresponde a:
E total = E electrónica + E vibratoria + E rotatoria
La energía total de un material en estudio es la suma de estos tres tipos de energía, de ellos los más importantes en el
análisis químico, son la energía electrónica, energía vibracional, y energía rotacional.
La energía electrónica corresponde a los electrones de átomos que forman una molécula que proviene de los estados
energéticos de sus distintos electrones enlazantes.
La energía vibratoria corresponde típicamente a la molécula, esto es debido a la energía total asociada al elevado
número de vibraciones interatómicas presente en las especies moleculares. En general, una molécula tiene muchos
más niveles cuantizados de energía vibracional que niveles electrónicos.
La energía rotatoria corresponde al giro de la molécula alrededor de su centro de gravedad, para cada estado de
energía electrónica normalmente corresponde al giro de la molécula, alrededor de su centro de gravedad. Para cada
estado de energía electrónica normalmente corresponde varios estados vibracionales de la molécula a su vez para una
de estas corresponde numerosos estados rotatorios, el número de estados rotacionales es mucho mayor que el
número de estados vibracionales, as´, para cada estado de energía electrónica de una molécula, generalmente existen
varios estados vibracionales posibles y, a su vez, para cada uno de estos estados vibracionales, son posibles
numerosos estados rotacionales. En consecuencia, el número de posibles niveles de energía para una molécula es
normalmente de unos órdenes de magnitud mayor que para una partícula atómica.
La mecánica cuántica establece que la energía toma valores definidos que solo pueden ser múltiplos enteros de una
porción más pequeña o "paquete" de energía llamado cuanto. Los cuantos de energía electrónica son de mayor
magnitud que los de energía vibratoria, los de energía rotatoria son menor que los de energía vibratoria.
ESPECTRO DE ABSORCION DE LA SOLUCION DE PERMANGANATO DE POTASIO

Eelectrónica > E Vibratoria > E rotatoria
La transición electrónica en un átomo es provocada por radiaciones que corresponden al visible, ultravioleta o
radiación X. Las transiciones vibratorias son provocadas por radiaciones que corresponden a la infrarroja 1 a 15 m.
Las transiciones rotatorias son provocadas por radiaciones que corresponden al infrarrojo lejano a 100 m. Los
espectros moleculares se particularizan por bandas de absorción que abarca un gran intervalo de longitudes de onda
porque tiene un buen número de estados vibratorios o rotatorios por cada estado electrónico.
La radiación visible o ultravioleta puede provocar formación de espectro constituidos por niveles electrónicos,
vibracionales o rotacionales. Es posible conseguir espectros únicamente rotacionales mediante radiaciones cuya
energía no supere 0,1 Kcal. /mol. Asimismo, puede conseguirse espectros vibratorios pero también rotacionales con
radiaciones cuya energía no supere 5 Kcal. /mol. Los espectros electrónicos atómicos que implícitamente son
vibracionales y rotacionales, se producen con energías superiores a 5Kcal/mol.
CARATERISTICAS DE LOS ESPECTROS

Los espectros atómicos constan de una serie de líneas de resonancia, correspondiente cada línea a una frecuencia o
longitud de onda características. Los espectros moleculares en el visible abarcan una amplia gama de frecuencias
contenidas en una banda de absorción. Esa gama de frecuencias que se encuentran casi juntas son difícilmente
detectadas por el instrumento apareciendo los espectros como curvas suavizadas. Naturalmente que se hace
referencia a la absorción electrónica que implica absorción vibracional y rotacional. Los espectros moleculares
vibracionales exentos de absorción electrónica sólo muestran radiaciones cuyas longitudes de onda corresponden al
infrarrojo, cuya energía es incapaz de provocar excitación electrónica. El espectro que corresponde a este tipo
muestra un aspecto de dientes o picos de absorción de distancia estrecha una de otra, cada una corresponde a niveles
cuánticos vibratorios. Cuando se ha obtenido un espectro vibracional con sus respectivos niveles vibracionales junto a
cada uno puede aparecer una serie de picos más pequeños cuando se trata de muestras en estado gaseoso donde es
posible conseguir que la molécula rote, caso contrario con muestras líquidas o sólidas donde para la molécula.
METODOS DE ABSORCION
Estos métodos que tiene como base la interacción de la materia con la energía radiante se basan en la medición de las
longitudes de onda o la intensidad o cantidad de la radiación electromagnética que absorbe la muestra en estudio. Las
longitudes de onda que absorbe la muestra y la cantidad de radiación que absorbe la misma, permiten el análisis
cualitativo y cuantitativo respectivamente.
La espectrofotometría de absorción se basa en la absorción de fotones por una o más sustancias presentes en una
muestra (que puede ser un sólido, líquido, o gas), y la promoción subsiguiente del electrón (o electrones) desde un nivel
de energía a otro en esa sustancia. La muestra puede ser una sustancia pura, homogénea o una mezcla compleja. La
longitud de onda en la cual el fotón incidente se absorbe es determinada por la diferencia en los niveles de energía
disponibles de las diferentes sustancias presentes en la muestra, llamada longitud de onda de trabajo. Esta es la
selectividad de la espectroscopia de absorbancia, la capacidad de generar fuentes de fotones (luz) que son absorbidas
sólo por algunos componentes en una muestra. Típicamente, los rayos X se usan para revelar la composición química,
mientras que las longitudes de onda cercanas al ultravioleta y el infrarrojo se usa para distinguir las configuraciones
de diversos isómeros detalladamente. En la espectroscopia de absorción, los fotones absorbidos no son emitidos de
nuevo (como en la fluorescencia) sino que la energía que se transfiere al compuesto químico en la absorbancia de un
fotón se pierde por medios no radiantes, como la transferencia de energía por calor a otras moléculas.
DETERMINACIÓN DEL ORDEN CUALITATIVO

Cuando se pasa a través de una sustancia radiación de una gamma de frecuencias que son capaces de provocar
excitación electrónica, vibración molecular o rotación molecular, ocurre absorción en forma de bandas de longitudes
de onda determinada. En cada tipo de sustancias los átomos, iones o moléculas absorben con cierta preferencia
longitudes de onda de una determinada gama de frecuencia o de longitud de onda, esto hace que los átomos, iones,
moléculas puedan identificarse mediante la longitud a que se da lugar la absorción.
DETERMINACIÓN DE ORDEN CUANTITATIVO

Cuando se hace pasar una radiación monocromática, el número de fotones absorbidos por la muestra, es proporcional
a la concentración sea de átomos, iones o moléculas. Esta propiedad importante de interacción permite
determinaciones cuantitativas de sustancias en una muestra determinada con muy buena precisión y gran exactitud. La
espectroscopia, en general, ofrece grandes posibilidades analíticas. Todos los métodos se basan en la interacción de la
radiación con todos los componentes de los átomos y moléculas, así como en las ordenaciones moleculares de la
materia. En la figura se resumen los distintos campos analíticos, y sus respectivos rangos de concentración óptimos
para la aplicación de cada uno de ellos, el límite de sensibilidad de todos los métodos puede ampliarse llevando la
concentración al rango adecuado, o bien, utilizando técnicas conjuntas.
INTRODUCCION A LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION

Los principales métodos de absorción serán tratados en esta parte del análisis espectroscópico.
TERMINOLOGIA UTILIZADA EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION

La ASTM (American Society for Testing Materials) ha creado una nomenclatura uniforme para el empleo de términos y
símbolos en espectroscopia de absorción. En tabla siguiente se enumeran en las dos primeras columnas las
recomendaciones de la ASTM, la columna tres contiene símbolos que se consideran en la bibliografía antigua.
SIMBOLOS Y TECNICAS UTILIZADAS EN LAS MEDIDAS DE

ABSORCIÓN
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
TECNICAS Y SIMB. DEFINICION OTROS NOMBRES Y SIMBOLOS
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
▪ Poder de radiación P, Po Energía de la Intensidad de la radiación saliente e
incidente.
▪ Absorbancia, A Log Po/P Densidad óptica (D.O), Extinción (E)
▪ Transmitancia T P / Po Transmisión (T)
▪ Trayecto óptico L, d. b, en cm.

▪ Absortividad (a) A /bx c Coeficiente de extinción, Extinción
específica
Absorción específica K
▪ Absortividad molar () A/bxc Coeficiente de extinción molar.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------
CONCEPTOS BASICOS
La nomenclatura de conceptos establecidos por la ASTM (American Society for Testing Materials) son la absorbancia y
la transmitancia son dos magnitudes físicas que resultan del estudio de la interacción de la luz con la materia, estas
dos propiedades son la base de la mayoría de los métodos ópticos instrumentales empleados en el laboratorio de
análisis químico.
a) ABSORBANCIA (A)
Es la cantidad de energía absorbida por una disolución en unas condiciones determinadas. Es la inversa logarítmica de
la transmitancia. Es el logaritmo de base 10 del recíproco de la transmitancia expresado por:
A = Log 101 = - Log 10 T = Log (Po)

T P
Cuando no se absorbe luz, P = Po y entonces A =0, cuando se absorbe 90% de la luz, 10 % de ella se transmite y P = Po
/ 10, con esto se tiene A = 1. Cuando solo se transmite el 1% de la luz, A = 2. A diferencia de la transmitancia, es
directamente proporcional a la concentración, es decir, la absorbancia de un medio aumenta cuando la atenuación del
haz se hace mayor.
La luz es
absorbida por
LUZ las moléculas
contenidas en
la muestra
b) TRANSMITANCIA (T)
Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partículas absorbentes, la potencia del haz disminuye
de Po a P. La transmitancia T de la solución, es la relación que existe entre el poder de radiación transmitida (P) por
una sustancia absorbente y el poder de radiación que incide (Po) sobre la muestra.
La expresión utilizada para definir la transmitancia e la siguiente:
T= P x
Po
La transmitancia, es adimensional, por lo que se expresa con frecuencia como porcentaje
%T= P x 100 %
Po
Donde:
P es la potencia o intensidad de la luz, con una longitud de onda específica, tras haber atravesado una muestra
(potencia de la luz transmitida)
Po es la potencia o intensidad de la luz antes de entrar en la muestra (potencia de la luz incidente)
También se le define como la fracción de la luz incidente que sale de la muestra, por lo tanto, T varía de cero a uno. La
transmitancia porcentual es simplemente 100T y varía entre cero y 100 %
c) TRAYECTO OPTICO (B)

Se le representa por (b) se le llama también camino óptico y es la distancia que la luz atraviesa por la solución
contenida en una celda, es la distancia interior del recipiente que contiene la solución, los lados de la celda deben ser
paralelos y pulidos ópticamente. Se producirá refracción si no es paralela.
d) PODER DE RADIACIÓN
Es la cantidad de energía transportada por un haz de energía radiante que alcanza un área dada de un detector. Se
tiene un haz incidente (Po) y otro saliente o emergente (P)..
e) ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR

Es la relación entre la absorbancia que presenta la sustancia absorbente y el producto de la longitud de paso óptico
por la concentración. Puesto que la absorbancia es una cantidad adimensional, la absortividad debe tener unidades que
señalan las unidades de b (trayecto óptico) y C (concentración). Como se verá a continuación, la absorbancia es
directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la solución y a la concentración de la especie
que produce la absorción.
De acuerdo a la ley de Lambert Beer se tiene que:
A= a b c
A=  b c
Despejando de esta ecuación la absortividad se tiene lo siguiente:
A
a= ---------- = L g -1 cm -1 absortividad específica
bxC
A
 = ---------- = L mol -1 cm -1 absortividad molar
bxC
Donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Resulta que el valor de a depende de las unidades
utilizadas para b y c. Puede tomar las denominaciones de absortividad específica representada por "a" minúscula
cuando la concentración de la sustancia absorbente esta dada en gramos/litro, miligramos/ mililitro, o miligramos/
litro. Se denomina absortividad molar (  ) cuando la concentración está dada en términos de molaridad (moles/ litro).
LEYES FUNDAMENTALES DE LA FOTOMETRIA

El análisis espectroscópico cuantitativo se basa en la relación entre la cantidad de luz absorbida y la cantidad de
sustancia absorbente. Esta relación, susceptible de demostrarse teóricamente, se observa de manera experimental en
la mayoría de las situaciones analíticas prácticas. La potencia radiante de un haz o rayo de radiación es proporcional al
número de fotones por unidad de tiempo; la absorción ocurre cuando un fotón choca con una molécula y la lleva a un
estado de excitación.
Cuando un haz de luz monocromática pasa a través de una solución que absorbe radiación, parte del haz
fundamentalmente se absorbe. La cantidad de luz absorbida se encuentra bien definida y se ajusta a ciertas leyes
físicas. Así, por ejemplo, si Po es el poder de radiación de un haz monocromática que incide sobre una solución, y P es el
poder de radiación emergente se tiene el siguiente fenómeno que se representa mediante el siguiente esquema:
La intensidad del haz saliente es significativamente menor que la cantidad del haz que incide sobre la solución en
estudio debido a los siguientes factores:
❑ POR PÉRDIDAS, desplazándonos de izquierda a derecha, se produce la primera
pérdida por reflexión en las interfaces aire – vidrio. Como muestra la figura en las dos
interfases aire/pared de la cubeta, así como en las dos interfases pared/disolución
tienen lugar reflexiones. Esta pérdida se calcula en función de la siguiente relación:
G-A 2
Pérdida % = [---------]
G-A
G = Indice de refracción vidrio 1,5

A = Indice de refracción del aire 1
Aproximadamente se pierde el 8.5% de un haz por fenómenos de reflexión en su

paso a través de una cubeta en cada uno de las dos interfaces aire - vidrio.
❑ Se produce pérdidas de algunos fotones de haz a la presencia de pequeñas partículas
de polvo llamadas pérdidas por difracción. Además, la atenuación del haz puede
ocurrir como consecuencia de la dispersión causada por moléculas grandes y, a veces,
de la absorción por las paredes del recipiente.
Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por la disolución del
analito se compara, generalmente, con la potencia del haz transmitido por una cubeta
idéntica que sólo contiene disolvente.
❑ Desde el punto de vista analítico se produce pérdidas de potencia o intensidad, debido a
la absorción selectiva de fotones por la especie absorbente.
Las leyes que gobiernan este proceso de absorción de radiación son denominadas leyes fotométricas o
también se llaman leyes cuantitativas de la absorción..
LEY LAMBERT – BOUGUER

Pierre Bouguer (1729) y Johann Heinrich Lambert (1760) señalaron que si en lugar de examinar el
fenómeno en términos de la cantidad de luz transmitida, se estudia la cantidad de luz absorbida, se
obtiene una relación en forma distinta. Supongamos que una solución de concentración unidad y de 1
cm. de trayecto óptico absorbe el 50 % de la radiación de longitud de onda, que incide sobre ella.
Entonces
P = 50 unidades
Po 100
Si se coloca detrás de la primera una segunda solución similar, de 1 cm. de espesor y que absorbe
también el 50 %, sólo 50 unidades de luz inciden sobre ella y, por tanto, emergen 25 unidades. Esta
relación indica que a mayor trayecto óptico disminuye la potencia de radiación transmitida.
Po = 100 50% absorción P1 = 50 50% absorción P2= 25
Haz incidente 1 cm 1 cm haz transmitido
Esta ley señala la relación que existe entre la absorción de radiación y la longitud de la trayectoria a
través del medio absorbente, establece el efecto “espesor” de la cubeta de la muestra llamado también
trayecto o recorrido óptico. Presenta dos enunciados:
• Lambert-Bouguer indican que: “La relación entre la energía radiante incidente (Po) y la
saliente o transmitida (P), es una constante llamada transmitancia”. Que multiplicada por
100 se representa como porcentaje de transmitancia
T=P= %T = P x 100 =
Po Po
• El otro enunciado señala que: “La cantidad de luz absorbida depende de la absortividad
del líquido y de la longitud del trayecto óptico (b) a través de la solución, en el supuesto
de que la longitud de onda y la concentración de la muestra permanezcan constantes.”
• Otra forma de enunciar la ley es: “Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de
un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida que la
longitud del medio aumenta”
Donde:
A = a. b = - log T = log Po A = absorbancia
P a = absortividad
b = trayecto óptico
DIAGRAMA DE LA LEY LAMBERT - BOUGUER

Supongamos que T = P/Po = 0,50 por unidad de trayecto óptico
Trayecto óptico 0 1 2 3.... n
Transmitancia 1,0 0,50 0,25 0,125 (0,5)
Se considera que: b= 1 cm
LEY DE BEER
• Consideremos un dispositivo óptico donde la radiación incidente, Po, es 100 unidades, la

emergente o transmitido, P1, es 50 y la concentración de la solución 0.1 g por 100 ml. Si se
coloca un segundo recipiente similar en el trayecto de la luz que emerge, la potencia de la
radiación, P1, que sale de este último, es 25 unidades.
Po = 100 0.1 g por 100ml P1 = 50 0.1g por 100 ml P2= 25
Haz incidente b b haz transmitido
Si se cambian ahora las condiciones, de tal modo que el primer recipiente contenga todo el material
absorbente, es decir, que su concentración sea 0.2 g por 100 ml, al medir la potencia de la radiación
que emerge se obtiene un valor de 25 unidades. En consecuencia, para un trayecto óptico dado, la
absorción vendrá dada por la concentración del material absorbente, la absorbancia y la absortividad.
Po = 100 0.2 g por 100ml P1 = 25
Haz incidente b haz transmitido
En 1859, Beer formuló la relación entre la concentración de la especie absorbente y el grado de

absorción. Esta ley relaciona la concentración de la especie absorbente con la radiación transmitida y la
radiación incidente. Su enunciado es el siguiente: “la transmitancia disminuye en progresión
geométrica cuando aumenta la concentración en progresión aritmética”.
Representación:
A = Log Po = Log 1 = - Log T
P T
A=axc c = concentración
La potencia de radiación disminuye conforme aumenta la concentración, la cantidad de energía

disminuye cuando aumenta la concentración.
LEY LAMBERT - BEER

Las leyes de Bouguer - Lambert y de Beer se pueden combinar fácilmente para obtener un expresión
conveniente, al estudiar el efecto del cambio de concentración en la absorción, podemos notar que la
longitud de la trayectoria a través de la solución se mantendrá constante. Se representa por:
A = a b c = Log Po = = Log 1 = -Log T

P T
Donde: A: Absorbancia
a: Absortividad del medio o líquido
b: trayecto óptico
c: concentración
Po = potencia de radiación incidente
P = potencia de radiación transmitida
De acuerdo con la ley combinada Lambert - Beer llamada simplemente Ley Beer, se expresa que: La
absorbancia de una solución está relacionada linealmente con la concentración de la especie
absorbente (c) y con la longitud del trayecto óptico (b) de la radiación en el medio absorbente.
Esta Ley de Beer es fundamental en los métodos ópticos de análisis, ya que nos permite calcular la
concentración de una sustancia a partir de la medición de la radiación absorbida por una disolución de
la misma y establece que la absorbancia es proporcional a la concentración de las especies
absorbentes. Estas expresiones muestran que existe una relación lineal entre la absorbancia y la
concentración, de una solución dada, supuestas constantes la longitud del trayecto óptico y la longitud
de onda.
COMPROBACIÓN DE LA LEY BEER
No todas las sustancias absorbentes se ajustan a la Ley de Beer, debido a una serie de factores, para
ellos es necesario previamente realizar un estudio de comportamiento de las sustancias frente a la
radiación. Este consiste en preparar una serie de soluciones de concentraciones conocida u
determinado de ellas su absorbancia. Si la curva obtenida presenta linealidad, la sustancia obedece a
la ley de Beer en cualquier concentración.
Para verificar la conformidad con la ley de Beer se confecciona una gráfica de absorbancia o Logaritmo
de la transmitancia frente a la concentración o de porcentaje de la transmitancia frente a la
concentración. Una curva estándar de acuerdo con la ley combinada Lambert – Beer, una gráfica de
absorbancia contra concentración será una línea recta de pendiente igual a b. La ley Beer sólo
describe adecuadamente el comportamiento de la absorción en soluciones diluidas, en este sentido es
una ley límite. Si bien la ley de Beer se mantiene a bajas concentraciones, es frecuente observar
desviaciones a concentraciones más elevadas. No obstante, esta ley es la piedra angular de algunos
campos de espectroscopia de absorción.
Las premisas de la Ley Beer son:
❑ El único mecanismo de interacción entre la radiación incidente y la sustancia problema es el de

absorción
❑ Se Utiliza radiación monocromática
❑ Las especies problemas ( moléculas o iones) actúen independientemente unos de otros
❑ La absorción estudiada corresponde a un volumen de sección transversal uniforme

APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER A MEZCLAS

La ley de Beer se aplica también a las soluciones que contienen más de un tipo de sustancia
absorbente. Siempre que existe interacción entre las diferentes especies, la absorbancia total para un
sistema de varios componentes está dada por:
A total = A1 + A2 + A3…. + An
=  1 b c1 2 b c2 3 b c3  n b cn
Donde los subíndices se refieren a los componentes absorbentes 1, 2,…. N
DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

La relación lineal entre absorbancia y longitud de trayectoria para una concentración fija de sustancias
absorbentes es una generalización para lo cual no se conocen excepciones. Por el contrario, se
encuentran frecuentemente desviaciones con relación a la proporcionalidad directa entre absorbancia y
concentración medidas cuando “b” es constante.
Algunas de estas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones reales de esta ley; estas
ocurren como consecuencia de la manera en que se mide la absorbancia (desviaciones instrumentales)
o como resultado de los cambios químicos asociados con las variaciones de concentración
(desviaciones químicas) o incompetencia del operario para manejar los estándares en forma correcta
(desviaciones personales).
Los errores al aplicar la Ley de Beer son:
Errores Químicos
❑Efectos debido a sistemas en equilibrio, debe remarcarse que el valor de la concentración C que
interviene en la Ley de Beer corresponde a la concentración de la especie absorbente, como por
ejemplo, equilibrios de dimerización, complejación, y ácido base.
❑Efectos debido al disolvente, se elige un disolvente de modo que no absorba apreciablemente en
la longitud de onda de trabajo
❑Efecto debido a impurezas absorbentes presentes en los reactivos, los reactivos químicos
contienen sustancias a nivel de trazas que pueden causar absorbancia debido a lo sensibles que
son los métodos espectrofotométricos. Para ello se emplea la determinación de un “ Blanco”
❑Efectos debido a interferentes en la muestra, la muestra puede presentar sustancias que
absorben radiación a la longitud de onda elegida, entones de deben eliminar o disminuir estos tipos
de errores.
❑Cuando un analito se disocia, se asocia, o reacciona con un disolvente para dar lugar a un
producto con un espectro de absorción diferente al del analito.
Por ejemplo: En el siguiente equilibrio:
2 CrO4 -2 + 2 H+ <-------→ 2 HCrO4 - <______-→ Cr2O7 -2 + H2O
El ion dicromato absorbe en la región visible a 450 nm. Al diluir una solución de dicromato, el
equilibrio se desplaza hacia la izquierda. El equilibrio puede ser desplazado totalmente,
distribuyendo prácticamente todo el cromo en el CrO4 -2.
ERRORES INSTRUMENTALES
❑ El cumplimiento estricto de la ley de Beer se observa sólo cuando la radiación utilizada es
verdaderamente monocromática, esta observación constituye otra manifestación del carácter
límite de esta ley. Rara vez se puede utilizar en forma práctica una radiación limitada a una
sola longitud de onda.
❑ Son aquellos errores que provienen de la lectura y de la radiación parásita, otros tipos son las
reflexiones en la cubeta o la calibración inadecuada de la longitud de onda. Se considera también
la radiación no monocromática. La radiación parásita es la radiación extraña que llega al detector
y que no provienen de la muestra se da a valores elevados de absorbancia o bajas
transmitancias. Otro error es el control de la temperatura a temperatura ambiente de la muestra y
de los patrones
❑ La radiación que emerge del monocromador suele estar contaminada con pequeñas cantidades
de radiación dispersa o parásita, la cual alcanza la rendija de salida como resultado de
dispersiones y reflexiones en varias superficies internas. La radiación parásita, con frecuencia
difiere sustancialmente en su longitud de onda de la radiación principal y, además, puede no
haber atravesado la muestra.
ERRORES PERSONALES
❑ Utilización y cuidado de las cubetas de absorción, las cubetas deben estar siempre extremadamente
limpias, sin presentar ralladuras, huellas ni adherencias.
❑ Competencia personal del operador en el preparado de soluciones, ajustes de pH, tiempo de espera en
el desarrollo del color, temperatura etc.
Pero, es muy frecuente encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre absorbancia y concentración
(cuando b es constante). Algunas de estas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones reales de
esta ley, estas ocurren como se ha mencionado como consecuencia de la manera en que se mide la
absorbancia (desviaciones instrumentales) o como resultado de cambios químicos asociados con las variaciones
de concentración (desviaciones químicas).
Algunas gráficas de la Ley de Beer que no son lineales en todo el rango de concentración pueden ser de los
siguientes tipos:
1. La curva no parte del origen (curva A),
Parte del eje de las absorbancia, significa que la curva no pasa por el origen a una concentración cero,
ya que se produce una absorbancia, esto se debe a lo siguiente factores:
* Existen impurezas que absorben radiación a la longitud de onda de trabajo.
* El reactivo colorante absorbe radiación
* Otros reactivos presentan color propio lo que implica una absorción de radiación.
2. La curva no es recta (curva B)

Esta curva se debe a:
• El instrumento no da respuestas lineales
• El sistema químico se altera con la concentración
• El monocromador no opera adecuadamente, puede haber mucha luz dispersada en el
instrumento
Una variedad de curva que corresponde a este tipo es aquella que significa que la ley se cumple
hasta un determinado rango de concentración, puede presentarse una desviación a partir de otra
concentración que puede ser negativo o positivo.
Desviación negativa
Se debe a:
* La luz incidente no es monocromática
* La cantidad de reactivo cromoforo agregado para formar la especie
coloreada no es suficiente para que reaccione con el componente activo.
* A cambios químicos que se produce en el sistema.
Desviación positiva
Es una desviación rara, se da pocas veces y se presenta cuando la sustancia presenta turbidez que
absorbe la radiación; la solución problema debe ser transparente, limpia y homogénea. Estas
desviaciones son positivas o negativas según la curva que se obtiene se desvié por encima o por
debajo de la línea recta.
Otra curva irregular se puede presentar de la forma C y en este caso se debe a :
• El instrumento opera en malas condiciones

• Que es el sistema químico de las sustancias no se encuentra bajo control (variables de pH,
temperatura, tiempo de espera, etc.)
• Incompetencia personal.
ERROR FOTOMETRICO
Las lecturas que se obtienen con un espectrofotómetro son los valores de las intensidades o potencial
de radiación Po y P. La relación de ambas es la transmitancia, T, y a partir de ella se determina la
concentración de la muestra. Existen varias fuentes de error en la medida de la radiación de potencial o
intensidad transmitida y, por lo tanto, en la determinación del porcentaje de transmitancia. Una de las
principales causas de error es la absorción de radiación por parte de otros componentes de la muestra.
Otra de las causas de error son las mediciones de porcentajes de transmitancia obtenidas con la
mayoría de los fotómetros y espectrofotómetros, estas mediciones están sujetas a incertidumbre a
causa de errores al azar (fluctuaciones) en el funcionamiento normal de estos instrumentos. La
reproductividad de los ajustes de control del instrumento, la constancia de la respuesta del detector y
de la intensidad de la energía radiante, la duplicabilidad en el llenado de la celda espectrofotométrica y
en su colocación en la cámara de la muestra, la estabilidad de todo circuito eléctrico auxiliar y la
facilidad para leer el medidor o la escala del porcentaje de método analítico espectrofotométrico, por
ello, una variación o incertidumbre entre cualquiera de estos factores puede afectar al porcentaje de
Transmitancia observado al igual que a la concentración calculada de la especie absorbente.
En la mayoría de los instrumentos comerciales, la incertidumbre absoluta en el porcentaje de
transmitancia queda entre los límites aproximados de 0.2 a 1 por 100. Este intervalo de serie de
mediciones con una solución estándar en que cada medición extrañe un reajuste completo de todos los
controles del instrumento y una nueva porción de la solución estándar, en que cada medición entrañe
un reajuste completo de todos los controles del instrumento y una nueva porción de la solución
estándar.
En la curva se puede apreciar la influencia que tiene el error cometido en la medida de transmitancia
sobre el error de concentración. Cuando la transmitancia es grande un error del 1 % en su medida se
refleja poco en la concentración, pero si la transmitancia es pequeña, el error en la concentración será
considerable. El error relativo en la concentración viene dado por la relación:
Error relativo = Error en la medida de la concentración

Valor real de la concentración
La relación entre el porcentaje de error relativo y el error en la medida de la transmitancia, puede

obtenerse de la ley de Beer. El error en la medida de la transmitancia se llama error fotométrico.
Numéricamente se puede escribir que:
Error relativo (%) = dc /c

Error fotométrico (%) dT
Siendo " c " la concentración y " T " la transmitancia; teniendo en cuenta que:
A=abc
Absorbancia = A = log Po
P
Transmitancía T = P
Po
Si se recuerda por la Ley de Lambert - Beer que la concentración de la especie absorbente está en
relación directa y lineal con la absorbancia podemos concluir que estos porcentajes de error en
absorbancia son iguales al porcentaje de error en la concentración del componente desconocido y que
todo ello es resultado de la incertidumbre constante de 1 por 100 en la transmitancia.
Podemos llegar a las mismas conclusiones de manera más rigurosa por combinación de las
definiciones básicas de absorbancia y transmitancia con el siguiente resultado:
A = Log 1
T
Ó
1 1 1
A =- --------- In --- = 0,434 ln ---
2,303 T T
La diferenciación de esta ecuación con referencia a T, da:
dA = _ 0,434
dt T
0,434
dA = - ------ dT
T
Para valorar el error relativo en la absorbancia o de la concentración, es necesario dividir cada miembro
de la expresión anterior por la absorbancia (A) así:
dA = _ 0,434 dt= 0,434 dt

A TA t Log t
Esta ecuación muestra que el error relativo en la absorbancia (dA/ A) está gobernado por la
incertidumbre absoluta en la transmitancia observada (dT) al igual que por la recíproca de un producto
de términos (t y Log t) en que interviene la propia transmitancia. En esta exposición seguiremos bajo el
supuesto de que error absoluto en la Transmitancia es 0,01 de modo que el porcentaje de
incertidumbre es el 1 por 100. Por consiguiente, el error relativo en la absorbancia en porcentaje, puede
calcularse a partir de la simple ecuación.
Error relativo en la absorbancia o concentración por 100= dA x 100 = 0,434 dT

A t log t
Donde:
DA/ A = Error relativo de la absorbancia o concentración (dC/C)
t = Transmitancia
T = Error fotométrico 1% (0.01)
Por ejemplo, para una serie de mediciones en transmitancias se tiene lo siguiente: Ahora valoraremos
el error relativo en la absorbancia en porcentaje que surge de un error de 1 por 100 en las lecturas de
Transmitancia, de 1, 5, 10, 15 20, 30, 40, 50 60, 70, 80, 90, y 95 por 100.
• Al nivel de 1 % de transmitancia
dA/A x 100 = 0.434 (0.01) = - 21.7 %

0.01 Log 0.01
dA x 100 = ________0,434_(0.01)_______ = -6,7 %
A (0,05) Log (0,05)
dA x 100 = ________0,434_(0.01)_______ = -2,9 %
A (0,50) Log (0,05)
• Al nivel de 95 % de Transmitancia
dA x 100 = ________0,434 (0.01)________ = -20,5 %

A (0,95) Log (0,05)
Tabulando estos valores calculados se tiene los siguientes resultados:
% dA/A
% transmitancia t
95
20.51
90
10.54
80
5.63
70
4.00
60
3.26
50
2.88
40
2.73
30
2.77
20
3.10
15
3.51
10
4.34
5
6.70
1
21.70
El hecho de que los signos de los errores estén invertidos no tiene importancia, pues solo nos interesa
la magnitud de estas incertidumbres. Es evidente que un error de 1 % en la Transmitancía puede ser
positivo o negativo y por ende, la incertidumbre de la observancia o la concentración tiene la misma
probabilidad de llevar signo más o signo menos. En la figura se presentan gráficamente los resultados
de una serie de cálculos basados en la ecuación rigurosa, del error relativo por 100 en la absorbancia o
en la concentración en función del porcentaje de Transmitancia. De estos resultados se obtienen tres
importantes conclusiones.
1. El error relativo en la absorbancia o la concentración es mínimo con 36.8 % o sea con una
absorbancia de 0.434. En el caso de una muestra se trata de ajustar los valores de medición de las
sustancias por analizar en términos de absorbancia o transmitancia.
2. El error es constante dentro de los límites razonables entre 20 y 60 % de Transmitancia,
aproximadamente, esto es el equivalente con 0,7 a 0,2 unidades de absorbancia. Si la muestra es
demasiado diluida (es decir, t demasiado elevada) es necesario concentrar la muestra por extracción,
evaporación u otro método.
3. El error se vuelve extremadamente grande a cada extremo de la escala de porcentaje de
Transmitancia. Por consiguiente, para efectuar determinaciones cuantitativas de máxima exactitud
habrán de limitarse las lecturas de instrumento al intervalo de absorbancia de 0,7 a 0,2 de unidad. Esta
restricción puede satisfacerse fácilmente por variaciones adecuadas en la longitud del trayecto óptico
de la muestra y el tamaño o volumen de la muestra tomada para el análisis. La manera inusual de
variación de este error surge del hecho de que los instrumentos miden transmitancia, siendo así que las
concentraciones son proporcionales a la absorbancia.
Porcentaje de error relativo en la absorbancia o en la

concentración calculada de la especie absorbente en
función del porcentaje de Transmitancia a causa de 1 por
100 del valor absoluto en el porcentaje de Transmitancia
observado.

Unidad # 2: Fundamentos de Espectros

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ANALISIS INSTRUMENTAL INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing.

Armando Salinas Sánchez 12

ENERGIA RADIANTE COMO MOVIMIENTO ONDULATORIO

RADIACIÓN ELECTROMAGNETICA COMO ENERGÍA

Movimiento ondulatorio de la Luz

LONGITUD DE ONDA ()

1 Å ángstrom = 0,1 mµ = 10-4 µ = 10-7 mm = 10-8 cm = 10-10 m

10 4 Å = 103mµ = 1 µ = 10-3 mm = 10-4 cm = 10-6 m.

UNIDADES DE LONGITUD DE ONDA PARA ALGUNAS REGIONES

REGIÓN UNIDAD DEFINICIÓN

Rayos X Ángstrom Ao 10 -10 m

Ultravioleta / visible Nanómetro nm 10 -9 m

UNIDAD DE FRECUENCIA ().

ENERGIA DE LA RADIACION ELECTROMAGNETICA

Reemplazando la frecuencia en: E = h. 

De estas relaciones matemáticas se puede llegar a las siguientes conclusiones:

Para una radiación con longitud de onda de 500 nm, se tiene:

ESPECTRO DE RADIACION ELECTROMAGNETICA

Este espectro electromagnético se divide en varias regiones que son:

INTERACCION DE LA ENERGIA RADIANTE CON LA MATERIA

M  -----------→ M + calor (hv)

ESPECTRO DE ABSORCION DE LA SOLUCION DE PERMANGANATO DE POTASIO

Eelectrónica > E Vibratoria > E rotatoria

CARATERISTICAS DE LOS ESPECTROS

DETERMINACIÓN DEL ORDEN CUALITATIVO

DETERMINACIÓN DE ORDEN CUANTITATIVO

INTRODUCCION A LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION

TERMINOLOGIA UTILIZADA EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION

SIMBOLOS Y TECNICAS UTILIZADAS EN LAS MEDIDAS DE

▪ Absorbancia, A Log Po/P Densidad óptica (D.O), Extinción (E)

▪ Transmitancia T P / Po Transmisión (T)

▪ Trayecto óptico L, d. b, en cm.

A = Log 101 = - Log 10 T = Log (Po)

c) TRAYECTO OPTICO (B)

e) ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR

LEYES FUNDAMENTALES DE LA FOTOMETRIA

G = Indice de refracción vidrio 1,5

Aproximadamente se pierde el 8.5% de un haz por fenómenos de reflexión en su

LEY LAMBERT – BOUGUER

Po = 100 50% absorción P1 = 50 50% absorción P2= 25

Haz incidente 1 cm 1 cm haz transmitido

DIAGRAMA DE LA LEY LAMBERT - BOUGUER

Supongamos que T = P/Po = 0,50 por unidad de trayecto óptico

Trayecto óptico 0 1 2 3.... n

Transmitancia 1,0 0,50 0,25 0,125 (0,5)

• Consideremos un dispositivo óptico donde la radiación incidente, Po, es 100 unidades, la

Po = 100 0.1 g por 100ml P1 = 50 0.1g por 100 ml P2= 25

Haz incidente b b haz transmitido

Po = 100 0.2 g por 100ml P1 = 25

Haz incidente b haz transmitido

En 1859, Beer formuló la relación entre la concentración de la especie absorbente y el grado de

La potencia de radiación disminuye conforme aumenta la concentración, la cantidad de energía

LEY LAMBERT - BEER

A = a b c = Log Po = = Log 1 = -Log T

P = potencia de radiación transmitida

COMPROBACIÓN DE LA LEY BEER

Las premisas de la Ley Beer son:

❑ El único mecanismo de interacción entre la radiación incidente y la sustancia problema es el de

❑ Se Utiliza radiación monocromática

❑ Las especies problemas ( moléculas o iones) actúen independientemente unos de otros

❑ La absorción estudiada corresponde a un volumen de sección transversal uniforme

APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER A MEZCLAS

Donde los subíndices se refieren a los componentes absorbentes 1, 2,…. N

dA x 100 = 0,434 (0.01) = -20,5 %