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ESPECTROFOTOMETRI
A
Dr. BENJAMIN ANGARITA
OBJETIVOS DE LA PRACTICA
Definir Espectrofotometría
Definir Fotocolorimetría
Explicar la Naturaleza de la LUZ
Explicar la Teoría Corpuscular de la LUZ
Explicar la Teoría Ondulatoria de la LUZ
Explicar la Ley de Lambert
Explicar la Ley de Beer
Explicar la LEY de Lambert-Beer.
Como funciona un Espectrofotómetro.
Estandarización de un Método Espectrofotométrico
Obtener la curva espectral de una muestra coloreada.
Construir la curva de calibración.
De acuerdo con la curva de calibración encontrar la concentración de una muestra desconocida.
ESPECTROFOTOMETRIA
1. Fuente de luz
2. Rendija de entrada
3. Monocromadores
4. Rendija de salida
5. Cubeta
6. Detector
7. Medidor
Fotones: partículas responsable de las manifestaciones
cuánticas del fenómeno electromagnético
Cuidados
Coloque el instrumento en un lugar en donde no esté sujeto a
vibraciones, calor excesivo, humedad o luz directa.
Proteja el instrumento del polvo. Nunca toque las superficies
ópticas tales como lentes y filtros. Siga las instrucciones que da el
fabricante para la limpieza de tales componentes.
Permita que el instrumento se caliente antes de hacer algún
procedimiento.
Verifique el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas
y cuando varíe la longitud de onda.
Asegúrese de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras
y huellas digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse.
APLICACIONES DE LA
ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE Y
ULTRAVIOLETA
La espectrofotometría es de gran utilidad en el análisis de sustancias químicas sobre todo
para el químico analítico.
Teoría corpuscular
V= c / λ
En razón a su naturaleza corpuscular la luz se considera formada por cuantos o
paquetes de energía que se desplazan con movimiento ondulatorio.
Al incidir un rayo luminoso de determinada frecuencia sobre un cuerpo se pueden
producir cambios en el que solo se lograría con la aplicación de energía lo que
produce un desprendimiento de electrones; este fenómeno es conocido como
EFECTO FOTOELECTRICO y sirve para medir la intensidad de las radiaciones
electromagnéticas, ultravioletas, visibles o infrarrojas.
En conclusión:
MONOCROMATIC POLICROMATICO
O
¿QUÉ ES UN ESPECTRO VISIBLE?
COLORES DEL ESPECTRO
Los colores del ARCO IRIS en el espectro visible incluye todos esos colores
que pueden ser producidos por la luz visible de una simple longitud de onda, los
colores del espectro puro o monocromáticos.
Por esta razón, los éxitos reproductivos de las especies de plantas cuyos
ciclos de vida están vinculados con la polinización de los insectos,
dependen de que produzcan emisión ultravioleta, más bien que del
colorido aparente a los ojos humanos.
Un rayo luminoso puede estar formado por radiaciones de una
sola longitud de onda ( luz monocromatica) o por un conjunto de
radiaciones de diferentes lonjitudes (luz policromatica)
MILIMICRAS COLOR OBSERVADO
440 Azul
470
590 Amarillo
700 Rojo
LEY DE LAMBERT BEER
Johann Lambert
Por consiguiente la :
A = εCL
Donde:
o A = Absorbencia
o ε = Coeficiente molar de extinción
o d = Distancia en cm
o c = Concentración molar
As= e CL
•E= absortividad molar. Cuando
la concentración está en mol/L
Es una propiedad de la materia
relacionada únicamente con la
naturaleza de la misma
As = E x l x C
As = E x l x C
MATERIALES
No. INSUMO Tubo de Ensayo No, 1 Tubo de Ensayo No, 2 Tubo de Ensayo No, 3 Tubo Blanco
-
1 ROJO DE FENOL 2.5% 5ml 2.5 ml 1ml
5 ml
2 AGUA DESTILADA .- 2.5 ml 4 ml
0.1 ml
3 ACIDO CLORIDRICO 0.1 N 0.1 ml 0.1 N 0.1 ml
4
CURVA ESPECTRAL
Para determinar si la solución cumple con la ley de Beer se debe averiguar la longitud de onda de máxima absorción.
En este procedimiento se hacen lecturas de As o %T a diferentes longitudes de onda, a concentración constante.
La longitud a la cual se presenta máxima absorbancia o mínima transmitancia se determina por la observación de datos o por una curva de As vs λ
que se denomina curva espectral.
Para tal fin se trabajan con el Tubo 1 y el Tubo B
El Tubo B es para Calibrar el Espectrofotometro
Al Tubo 1 le medimos con el Espectrofotómetro la ABSORBANCIA a:
400-420-440-460-480-500-520-540-560-580-600-620-640 nm
Calibrando el aparato con el Tubo B en cada medida
ESPECTROFOTOMETRO
Que es la curva de calibración?
A=mc+n
Elaboración de una curva de calibración