Aplicación y utilización de la

Espectrofotometría y
Colorimetría. Usos y aplicación.

Por: Josué Nima Salvador.

Gerardo Mogollón Ramos.
Ramírez Granja Cesar Alexander.
ESPECTROFOTOMETRÍA
 DEFINICION :
• Es un método científico utilizado para medir cuánta luz absorbe
una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando
un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose
en la Ley de Beer-Lambert.
• Es el método de análisis óptico más usado en las
investigaciones químicas y bioquímicas.
• Es la técnica espectroscópica utilizada para determinar la
concentración de una sustancia. Es la CUANTIFICACIÓN
de la cantidad de energía radiante absorbida por las
moléculas de una muestra en función de las longitudes de
onda específicas.
 MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS
 SEGÚN LA NATURALEZA DE LA EXCITACIÓN MEDIDA:
El tipo de espectrometría depende de la cantidad física medida.
Normalmente, la cantidad que se mide es una intensidad de energía
absorbida o producida.

 Electromagnética. Interacciones de la materia con radiación

electromagnética como la luz.

 De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia

Auger implica inducir el efecto Auger con un haz de electrones. En este
caso la medida implica la energía cinética del electrón como variable
• Acústica. Frecuencia de sonido

• Dieléctrica. Frecuencia de un campo eléctrico externo.

• Mecánica. Frecuencia de un estrés mecánico externo, por

ejemplo, una torsión aplicada a un trozo de material.

• De masa. Interacción de especies cargadas con campos

magnéticos y/o eléctricos, dando lugar a un espectro de
masas. El término "espectroscopia de masas" está anticuado,
ya que la técnica es principalmente una forma de medida,
aunque produzca realmente un espectro para la observación.
Este espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida
es esencialmente de la energía cinética de la partícula.
SEGÚN EL PROCESO DE MEDIDA:

La mayoría de los métodos espectroscópicos se diferencian en atómicos o moleculares

según si se aplican a átomos o moléculas. Junto con esta diferencia, se pueden
distinguir los siguientes tipos de espectrometría según la naturaleza de su interacción:

• De absorción. Usa el rango de los espectros electromagnéticos en los cuales una

sustancia absorbe. Incluye la espectrometría de absorción atómica y varias técnicas
moleculares, como la espectrometría infrarroja y la resonancia magnética nuclear
(rmn).
• De emisión. Usa el rango de espectros electromagnéticos en los cuales una
sustancia irradia (emite). La sustancia primero debe absorber la energía. Esta
energía puede ser de una variedad de fuentes, que determina el nombre de la
emisión subsiguiente, como la luminiscencia. Las técnicas de luminiscencia
moleculares incluyen la espectrofluorimetría.
• De dispersión. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas
longitudes de onda, ángulos de incidencia y ángulos de polarización. El proceso de
dispersión es mucho más rápido que el proceso de absorción/emisión. Una de las
aplicaciones más útiles es la espectroscopia raman.
 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION:

 Se refiere a una variedad de técnicas que emplean la interacción de la

radiación electromagnética con la materia
 Aquí, se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y después de
la interacción con una muestra.
 Las descripciones experimentales por lo general asumen que hay una única
dirección de incidencia de la luz sobre la muestra, y que un plano
perpendicular a esta dirección pasa por la muestra.
 Las palabras transmisión y remisión se refieren a la dirección de viaje de
los haces de luz medidos antes y después de la absorción.
 En la transmisión, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector
en el lado opuesto de la muestra. En la remisión, la luz es dispersada desde
la muestra hacia un detector en el mismo lado de la muestra.
 La radiación remitida puede estar formada por dos clases de radiación:

oreflexión especular (cuando el ángulo de reflexión es igual al ángulo de

la frecuencia)
o reflexión difusa (en todos los demás ángulos)
 Técnicamente, la espectrometría de absorción se basa en la absorción de
fotones por una o más sustancias presentes en una muestra (que puede
ser un sólido, líquido, o gas), y la promoción subsiguiente del electrón (o
electrones) desde un nivel de energía a otro en esa sustancia. La muestra
puede ser una sustancia pura, homogénea o una mezcla compleja.
 a cualquier longitud de onda dada la absorbancia medida (− log (I / I0))
es proporcional a la concentración molar de las especies que absorben y
el grosor de la muestra por la que la luz pasa. Esto se conoce como ley de
Beer-Lambert. El espectro de absorción normalizado es característico
para cada compuesto particular, no cambia con la concentración y es
como la "huella digital" química del compuesto
ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
 Es el rango de todas las radiaciones electromagnéticas posibles.
El espectro de un objeto es la distribución característica de la
radiación electromagnética de ese objeto.
 Se extiende desde las bajas frecuencias usadas para la radio
moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma
(extremo de la onda corta), que cubren longitudes de onda de
entre miles de kilómetros y la fracción del tamaño de un átomo
 Se piensa que el límite de la longitud de onda corta está en las
cercanías de la longitud Planck, mientras que el límite de la
longitud de onda larga es el tamaño del universo mismo, aunque en
principio el espectro sea infinito y continuo.
 RANGO DEL ESPECTRO

 El espectro cubre la energía de ondas electromagnéticas que

tienen longitudes de onda diferentes. Las frecuencias de 30 Hz y
más bajas pueden ser producidas por ciertas nebulosas estelares
y son importantes para su estudio. Se han descubierto
frecuencias tan altas como 2.9 * 1027 Hz a partir de fuentes
astrofísicas.
 La energía electromagnética en una longitud de onda particular λ
(en el vacío) tiene una frecuencia asociada f y una energía
fotónica E. Así, el espectro electromagnético puede expresarse
en términos de cualquiera de estas tres variables, que están
relacionadas mediante ecuaciones.
 De este modo, las ondas electromagnéticas de alta frecuencia
tienen una longitud de onda corta y energía alta; las ondas de
frecuencia baja tienen una longitud de onda larga y energía baja.
 Siempre que las ondas de luz (y otras ondas electromagnéticas)
se encuentran en un medio (materia), su longitud de onda se
reduce. Las longitudes de onda de la radiación electromagnética,
sin importar el medio por el que viajen, son, por lo general,
citadas en términos de longitud de onda en el vacío, aunque no
siempre se declara explícitamente.
 Generalmente, la radiación electromagnética se clasifica por la
longitud de onda: ondas de radio, microondas, infrarroja y región
visible, que percibimos como luz, rayos ultravioleta, rayos X y
rayos gamma.
TIPOS DE RADIACIONES
• Radiaciones no ionizantes
Las radiaciones no ionizantes son incapaces de producir fenómenos
de ionización, debido a que no cuentan con la energía suficiente para
que esto ocurra. Dentro de las radiaciones de este tipo se
encuentran:

• Radiaciones microondas
Las radiaciones microondas, son llamadas de este modo porque
tienen una longitud de onda muy corta (desde 1mm hasta 30cm
aproximadamente). Se generan con tubos de electrones especiales
como el klistrón o el magnetrón.

• Radiaciones infrarrojas
La radiación infrarroja proviene de cualquier fuente generadora de
calor, incluido el Sol. Está comprendida entre las microondas y la luz
visible.
• Radiaciones ultravioleta
La mayor parte de la radiación UV proviene del sol, pero la capa de ozono se encarga
de que sólo lleguen a la superficie terrestre las radiaciones menos dañinas y en
pequeñas cantidades.
Luz visible: La luz visible, junto con la radiación ultravioleta y la energía radiante
infrarroja constituyen el espectro óptico. Este tipo de radiación, comprende
longitudes de onda entre 400 y 760 nm que provocan una respuesta visual en la retina.

• Láser
El término láser es un acrónimo de light amplification by stimulated emission of
radiation (amplificación de la luz por emisión estimulada de radiación). El láser es un
dispositivo que produce energía radiante electromagnética, se encuentra ubicado
entre la zona final ultravioleta y el infrarrojo lejano.

• Campos de radiofrecuencia
La radiación de radiofrecuencia tiene numerosas aplicaciones, desde la industria,
comercio, medicina, hasta la investigación y en el hogar.
Las aplicaciones más comunes y conocidas de las radiofrecuencias son las
telecomunicaciones, como el teléfono a larga distancia o el teléfono móvil. Las
emisiones de radio y televisión, también son usos muy conocidos de estas ondas
radiantes, así como los radares y monitores de ordenador.
• Radiaciones ionizantes
Las radiaciones ionizantes se presentan en unas pocas variedades y se
pueden clasificar de la siguiente manera:

• Ondulatorias
En una propagación ondulatoria de energía, no existe la presencia de
ninguna masa, solo energía.

 Rayos X: Cuando se inciden electrones sobre un material y son

frenados, se originan fotones de alta energía que son capaces
producir imágenes o impresiones, lo que comúnmente conocemos como
radiografías o placas radiográficas.
 Radiación ϒ (gamma): Son fotones que se producen durante la
desintegración de núcleos inestables, usualmente poseen muy alta
energía, por lo que su poder de penetración es muy elevado, tanto, que
solo pueden ser detenidos por placas bastante gruesas de plomo u
hormigón.
• Corpusculares
Reciben este nombre, ya que son debidas a la propagación de energía asociadas a
masa, por ejemplo partículas subatómicas como protones, neutrones, núcleos de
helio o electrones.

 Radiación α (alfa): Las partículas alfas se originan cuando un radioisótopo

emite un núcleo de helio (dos protones y dos neutrones), de manera que el
núcleo original se transforma en otro. Su poder de penetración es muy escaso,
son detenidas por una hoja de papel.

 Radiación β (beta): Comúnmente, son electrones atómicos expelidos a gran

velocidad con masa prácticamente nula llamados beta menos (β-), sin embargo,
en caso de que un radionúclido emita un positrón se denominarán beta más
(β+). Su poder de penetración es mayor al de la radiación alfa, materiales
como la madera, vidrio o aluminio, frenan por completo las partículas beta.

 Radiación neutrónica: Es la emisión de neutrones en procesos nucleares.

Como es sabido, los neutrones no poseen carga, por lo tanto, no producen
ionización directa, no obstante, cuando interaccionan con los átomos de la
materia pueden dar lugar a las radiaciones vistas previamente, que si producen
ionización. Poseen penetración elevada.
INTERACCION DE LA ENERGIA RADIANTE CON LA MATERIA

 ABSORCIÓN DE RADIACIÓN:
La absorción de radiación electromagnética provoca que las partículas
integrantes de un material (átomos, iones o moléculas) pasen del estado
fundamental a uno o más estados excitados de superior energía. Emisión
de radiación.

 DISPERSIÓN DE RADIACIÓN:
Fenómeno fisicoquímico al incidir una radiación sobre una superficie
sólida, líquida o gaseosa y se dispersa en diferentes direcciones debido a
la difracción y reflexión de la radiación por las distribución y orientación
de las moléculas sobre las cual incide la radiación. ESPECTROSCOPIA: En
física, estudio de los espectros. Espectroscopia de radiofrecuencias o
herciana: conjunto de los estudios que se realizan sobre los fenómenos de
interacción resonante, en especial de resonancia magnética entre átomos,
moléculas y ondas hercianas.
 ESPECTROSCOPIA NUCLEAR:
estudio, según su energía, de la distribución de las radiaciones
electromagnéticas y de las partículas emitidas por un núcleo de átomo
excitado. Es una técnica instrumental ampliamente utilizada por los
físicos y químicos para poder determinar la composición cualitativa y
cuantitativa de una muestra, mediante la utilización de patrones o
espectros conocidos de otras muestras.

 TURBIDIMETRÍA:
La turbidimetría mide la disminución de la luz transmitida a través de
una suspensión de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro
(detector en la misma dirección del haz de luz, se mide A o T). Se
suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena
disminución de la luz transmitida).
 NEFELOMETRÍA:
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida
(generalmente con ángulos que oscilan entre 15 y 90°). Utiliza como
instrumento el nefelómetro en el que el detector se ubica con un ángulo
que oscila entre 15 y 90°.

 FLUORESCENCIA:
Fenómeno por el cual algunas sustancias tienen la capacidad de absorber
luz a una determinada longitud de onda, por lo general en el rango
ultravioleta, y luego emiten luz en una longitud más larga. Dicho de otra
manera, absorben fotones con una determinada energía, y liberan
fotones con menor energía
PRINCIPIOS DE LA ESPECTROFOTOMETRIA
• Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el
vidrio que parece ser completamente transparente absorbe
radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
• La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es
característica para cada sustancia química.
• Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es
absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto
sin ser absorbida
• . El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo
dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbidas.
  LEY DE BEER:
• La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
depende de la concentración en la solución.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en
otro tenemos un vaso con la misma cantidad de agua pero con más azúcar
diluida.
• El detector es una celda fotoeléctrica, y la solución de azúcar es la
que se mide en su concentración.
• Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el
primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor
que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y
moléculas y son absorbidos por estos.
 LEY DE LAMBERT
• Se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende
de la distancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora,
pensemos que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma
concentración de azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro mayor
que el otro.
• Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz
atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro
lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en
el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor
número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos; de la
misma forma que se explicó en la ley de Beer.
 LEY DE BOUGUER-BEER-LAMBERT:

• Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert

(también conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es
solo una combinación de las citadas anteriormente.
INSTRUMENTACION DE LA ESPECTROFOTOMETRIA
 El espectrofotómetro:

• El espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve

para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de
una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones.
• Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o
espectrofotómetro de masa.
• Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida por dicha muestra.
Esto le permite al operador realizar dos funciones:
 Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.
 Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está
presente en la muestra.
COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO:

 Cubetas de espectrofotometría.
En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en
segundo plano, de plástico, para colorimetría (es decir, empleando luz visible).

 Fuente de luz:
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes
condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral
continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio
(también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio
que es utilizada en los laboratorios atómicos.

 Monocromador:
El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden
o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
 Compartimiento de Muestra:
Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe producirse donde no
haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es importante destacar, que
durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión, en base
a sus leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la molécula de fundamental-
excitado.

 Detector:
El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para
posterior estudio. Hay de dos tipos:
a) los que responden a fotones;
b) los que responden al calor

 Registrador:
Convierte el fenómeno físico, en números proporcionales al analito en cuestión.

 Foto detectores:
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 foto detectores para
percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro
visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del equipo.
 APLICACIÓN DE LA ESPECTROFOTOMETRIA
Las aplicaciones principales son:

 Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún

compuesto utilizando las fórmulas ya mencionadas.
 Para la determinación de estructuras moleculares.
 La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas
tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o
isomerías).
 La absorción atómica es una técnica capaz de detectar y
determinar cuantitativamente la mayoría de los elementos químicos,
por lo que sus campos de aplicación son variados. Este método se
puede aplicar para la determinación de ciertos metales tales como:
antimonio, cadmio, calcio, cesio, cromo, cobalto, oro, plomo, níquel,
entre otros. Se emplea en análisis de agua, de suelos, bioquímica,
toxicología, medicina, industria farmacéutica, alimenticia,
petroquímica, etcétera.
 Aplicaciones del espectro electromagnético:
• El conocimiento que se tiene hoy en día del espectro
electromagnético es bastante acabado y sus aplicaciones son
muchas, cada vez que conversamos por el celular, que
sintonizamos una radio, vemos un programa de televisión, o que
sentimos el calor del sol, estamos percibiendo de una u otra
forma radiaciones electromagnéticas.
• La luz visible es solo una pequeña parte de la familia de ondas
electromagnéticas que forman el espectro. Sus aplicaciones
dependen según el tipo de onda electromagnética.
ESPECTROFOTÓMETRO USADO EN EL LABORATORIO
COLORIMETRÍA
Es el estudio de los colores según cómo son percibidos por
el ojo humano. Es por ello que los colorímetros (también
conocidos como medidores de color, medidores croma o
lectores de color), no miden la salida espectral en
longitudes de onda, como los espectrofotómetros, sino que
dan al rojo, azul y verde coordenadas de color o valores
muy similares a cómo los seres humanos perciben el color.
TÉCNICAS COLORIMÉTRICAS
Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción de
radiación en la zona visible por sustancias coloreadas. La absorción de luz
de pende de la intensidad del rayo, ya que en algunas ocasiones la muestra
que deseamos determinar no posee color por sí misma; en tal caso, es
preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den
lugar a sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
Para llevar a cabo las mediciones colorimétricas es necesario tomar como
punto de comparación la llamada “curva espectral codificada” que permite
asignar valores numéricos a la respuesta de estímulos de colores. Una vez
asignados los valores se hace una suma de los mismos y se obtiene la
cuantificación del o los colores.
COLORÍMETRO
El colorímetro tiene tres funciones específicas, que son:

 Determinar el valor numérico de un color.

 Llevar a cabo una comparación entre colores.

 Establecer la intensidad y los matices del color estudiado.

APLICACIONES DEL COLORÍMETRO
Entre las principales aplicaciones del colorímetro se encuentran:

 Clasificación de colores.
 Pruebas de absorbancia.
 Corrección de errores en monitores y pantallas.
 Calibración de colores de impresoras.
 Caracterización de polímeros en base a su color.
 Análisis de concentraciones químicas.
COLORIMETRÍA EN ANÁLISIS QUIMICO
La colorimetría a veces se utiliza para referirse a la espectrofotometría
en el rango de la luz visible como técnica de análisis químico.
En este contexto, la colorimetría es un método de análisis utilizado para
determinar la concentración de una sustancia coloreada (cromóforo) en
una disolución. Primero se mide la absorbancia o transmitancia del
disolvente puro y de una batería de disoluciones con concentraciones
conocidas.
CONCLUSIONES:
 Podemos decir que la espectrofotometría es de suma importancia porque
nos permite ver el efecto de absorción, lo cual es de gran utilidad para
la determinación de concentraciones en muestras que tienen un color
peculiar. De esta manera vamos a lograr determinar las concentraciones
y el rango de absorbancia respectivo a un color indicado.

 Gracias a la espectrofotometría de absorción hemos aprendido a como

comparar la intensidad de un haz de luz medido antes y después de la
interacción con una muestra.

 El espectro electromagnético se caracteriza por brindar radiaciones

magnéticas de cierta frecuencia emitidas por un objeto relativo que ese
encuentra en un rango determinado.

 La volumetría de precipitación es de suma importancia ya que nos ayuda

a determinar el porcentaje de ciertas sustancias presentes en una
muestra.
Gracias por su Atención