Método de Bradford: Determinación de proteína

El método de Bradford se basa en la unión de colorantes; debido a que, en condiciones adecuadas, los grupos ác
proteínas pueden interaccionar con grupos orgánicos de determinados colorantes para dar lugar a precipitados
característico. Este método es muy rápido y sensible y se puede trabajar en un rango de 20 a 140 microgramos d
estándar y de 1 a 50 microgramos para el microensayo. Se trabajó con un ensayo estándar, y se prepararon 11 d
albúmina de huevo, las cuales se procedió a pasar al espectrofotómetro a una longitud de onda de 595nm, por d
a) Determinar la ecuación de la recta
b) Trazar el grafico de los datos experimentales
c) Una muestra problema de proteína dio una absorbancia de 0.543. Calcular el número de µg de proteína en el

Concentración Y1
µg/mL (x) ABS (y-ycal) (y-ycal)2
0 0 -0.0397 0.00157609
25 0.112 0.0223 0.00049729
50 0.148 0.0083 0.00006889
75 0.18 -0.0097 9.409E-05
100 0.248 0.0083 6.889E-05
125 0.294 0.0043 1.849E-05
150 0.344 0.0043 1.849E-05
175 0.353 -0.0367 0.00134689
200 0.463 0.0233 0.00054289
225 0.465 -0.0247 0.00061009
250 0.514 -0.0257 0.00066049
Srecta 0.02480943

Concentración y2 Mprob Y1
µg/mL (x) ABS (y-ycal) (y-ycal)2 ABS Cµg/mL
0 0 -0.025 0.000625 0.543 251.65
25 0.035 -0.0325 0.00105625 0.25 105.15
50 0.114 0.004 1.6E-05 0.125 42.65
75 0.167 0.0145 0.00021025
100 0.177 -0.018 0.000324
125 0.242 0.0045 0.00002025
150 0.433 0.153 0.023409
175 0.342 0.0195 0.00038025
200 0.344 -0.021 0.000441
225 0.385 -0.0225 0.00050625
250 0.411 -0.039 0.001521
Srecta 0.05628227
 s adecuadas, los grupos ácidos o básicos de las
a dar lugar a precipitados con un color
de 20 a 140 microgramos de proteína para el ensayo
ndar, y se prepararon 11 diluciones distintas de
d de onda de 595nm, por duplicado.

ro de µg de proteína en el problema.

Y1
0.6

0.5 f(x) = 0.00195236363636364 x + 0.0396818181818181

R² = 0.981445753515698
0.4 f(x) = 0.00172763636363636 x + 0.0249545454545455
R² = 0.878692106642043 y1
Linear (y1)
0.3
ABS

Linear (y1)
y2
0.2
Linear (y2)
0.1

0
0 50 100 150 200 250 300
Concentración (µg/mL )
El Ácido 3,5-dinitrosalisílico (DNS), es un agente oxidante para un azúcar reductor. Éste compuesto es utilizado p
problema. La reacción que se genera entre el DNS y el azúcar reductor es de tipo redox, ya que el DNS se reduce
formando un grupo carboxilo oxidado. Provocando un cambio de color en la muestra donde la concentración y e
a) Determinar la ecuación de la recta
b) Trazar el grafico de los datos experimentales
c) Una muestra problema de proteína dio una absorbancia de 0.540. Calcular el número de µg/mL de azúcar en

Concentración
µg/mL ABS ABS
ste compuesto es utilizado para la cuantificación de azúcares reductores en una muestra
dox, ya que el DNS se reduce en presencia del grupo reductor de la glucosa (aldehído)
a donde la concentración y el color de la muestra son proporcionales.

mero de µg/mL de azúcar en el problema.

 0 0.002
2 0.15
4 0.294
6 0.434
8 0.57
10 0.704