CINÉTICA ENZIMÁTICA

DR. ADOLFO EDUARDO OBAYA VALDIVIA

I.Q. CARLOS MONTAÑO OSORIO
DRA. YOLANDA MARINA VARGAS RODRÍGUEZ
M.D. GUADALUPE IVETH VARGAS RODRÍGUEZ

PIAPIME 2.11.12.20
• La cinética enzimática es un tipo específico de catálisis
• El catalizador es una enzima, la cual es una proteína de alto peso molecular que posee sitios activos en
donde se realiza la catálisis
• El mecanismo propuesto por Michaelis y Menten consta de dos etapas
1. Formación reversible del complejo enzima sustrato
2. Reacción irreversible del sustrato transformándose a un producto y regeneración de la enzima
 𝒌𝟏 𝒌𝟐 𝒌𝟏 𝑬𝒔 𝒍𝒂 𝒄𝒐𝒏𝒔𝒕𝒂𝒏𝒕𝒆 𝒄𝒊𝒏é𝒕𝒄𝒂
𝑺+𝑬 ⇌ 𝑬∗𝑺 𝑷+𝑬 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒓𝒆𝒂𝒄𝒄𝒊ó𝒏 𝒅𝒊𝒓𝒆𝒄𝒕𝒂
𝒌−𝟏
𝒌−𝟏 𝑬𝒔 𝒍𝒂 𝒄𝒐𝒏𝒔𝒕𝒂𝒏𝒕𝒆 𝒄𝒊𝒏é𝒕𝒊𝒄𝒂 𝒅𝒆𝒍
𝒑𝒓𝒐𝒄𝒆𝒔𝒐 𝒊𝒏𝒗𝒆𝒓𝒔𝒐

Unión del sustrato a Reacción del sustrato 𝒌𝟐 𝑬𝒔 𝒍𝒂 𝒄𝒐𝒏𝒔𝒕𝒂𝒏𝒕𝒆 𝒄𝒊𝒏é𝒕𝒊𝒄𝒂 𝒅𝒆 𝒍𝒂

la enzima (Equilibrio catalizada por la 𝒓𝒆𝒂𝒄𝒄𝒊ó𝒏 𝒊𝒓𝒓𝒆𝒗𝒔𝒆𝒓𝒔𝒊𝒃𝒍𝒆
rápido) enzima (Etapa lenta)

La formación del producto a partir del complejo enzima sustrato es la etapa lenta, la rapidez se plantea en esta etapa

𝑹𝑨 = 𝒌𝟐 [𝑬 ∗ 𝑺 [ECUACIÓN 1]

Sin embargo en la ley de rapidez no pueden aparecer especies intermediarias, dado que complejo enzima-sustrato es una de ellas,
hay que analizar todos los procesos en donde éste se involucre, con base en el mecanismo de Michaelis Menten este aparece en los
siguientes procesos:
𝒌𝟏
Formación del complejo enzima sustrato
𝑺+𝑬 𝑬∗𝑺
𝒌−𝟏
𝑬∗𝑺 𝑺+𝑬 Disociación del complejo a sustrato más enzima
𝒌𝟐
𝑬∗𝑺 𝑷+𝑬 Reacción del complejo enzima-sustrato para dar productos, se regenera la
enzima
Se platea la ley de rapidez del complejo enzima sustrato de cada proceso
𝒌𝟏
𝑺+𝑬 𝑬∗𝑺 𝒅[𝑬 ∗ 𝑺
= 𝒌𝟏 𝑺 𝑬
𝒅𝒕
𝒌−𝟏 𝒅[𝑬 ∗ 𝑺
𝑬∗𝑺 𝑺+𝑬 − = 𝒌−𝟏 𝑬 ∗ 𝑺
𝒅𝒕

𝒌𝟐 𝒅[𝑬 ∗ 𝑺
𝑬∗𝑺 𝑷+𝑬 − = 𝒌𝟐 𝑬 ∗ 𝑺
𝒅𝒕

Por lo tanto la ley de rapidez total es la que considera todos los procesos, así resultando:
𝒅[𝑬 ∗ 𝑺
= 𝒌𝟏 𝑺 𝑬 − 𝒌−𝟏 𝑬 ∗ 𝑺 − 𝒌𝟐 𝑬 ∗ 𝑺
𝒅𝒕
La teoría del estado estacionario establece que cuando un sitio activo de enzima se
desocupa, inmediatamente se vuelve a ocupar por el sustrato, y así suscesivante, por lo que
la concentración del complejo enzima sustrato es constante, por lo tanto su derivada es cero

𝟎 = 𝒌𝟏 𝑺 𝑬 − 𝒌−𝟏 𝑬 ∗ 𝑺 − 𝒌𝟐 𝑬 ∗ 𝑺 [ECUACIÓN 2]
La concentración inicial de sustrato 𝑆 𝑜 = 𝑆 + 𝐸 ∗ 𝑆 Es igual a la concentración de sustrato
libre más el complejo enzima sustrato

La concentración inicial de enzima 𝐸 𝑜 = 𝐸 + 𝐸∗𝑆 Es igual a la concentración de enzima

libre más el complejo enzima sustrato

Se puede despreciar la concentración del complejo enzima sustrato frente a la concentración de

sustrato libre, ya que ésta es mucho mayor. Despejando la concentración libre de enzima y de
sustrato:
S = 𝑆 𝑜

𝐸 = 𝐸 𝑜 − 𝐸∗𝑆
Sustituyendo estas expresiones en la ecuación [2]:

𝟎 = 𝒌𝟏 𝑺 𝒐 𝐸 𝑜 − 𝐸∗𝑆 − 𝒌−𝟏 𝑬 ∗ 𝑺 − 𝒌𝟐 𝑬 ∗ 𝑺
Aplicando ley distributiva a los paréntesis:

𝟎 = 𝒌𝟏 𝐸 𝑜 𝑺 𝒐
− 𝒌𝟏 𝑺 𝒐 𝐸 ∗ 𝑆 − 𝒌−𝟏 𝑬 ∗ 𝑺 − 𝒌𝟐 𝑬 ∗ 𝑺

Factorizando y despejando [E*S]

𝟎 = 𝒌𝟏 𝐸 𝑜 𝑺 𝒐
− 𝐸∗𝑆 𝒌𝟏 𝑺 𝒐 + 𝒌−𝟏 + 𝒌𝟐

𝑘1 𝐸 𝑜 𝑆 𝑜
[𝐸 ∗ 𝑆 =
𝑘1 𝑆 𝑜 + 𝑘−1 + 𝑘2
Dividiendo el numerador y denominador por 𝑘1

𝐸 𝑜 𝑆 𝑜
𝐸∗𝑆 =
𝑘−1 + 𝑘2
𝑆 𝑜+
𝑘1
𝑘−1 +𝑘2
Es una relación de constantes y se le denomina constante de Michaelis Km
𝑘1
 𝐸𝑜 𝑆𝑜
𝐸∗𝑆 =
𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀
Sustituyendo esta expresión en la ecuación 1:

𝑘2 𝐸 𝑜 𝑆 𝑜
𝑹𝑨 =
𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀

El producto de las constantes 𝑘2 𝐸 𝑜 se denomina rapidez máxima

𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜
𝑹𝑨 = [ECUACIÓN 3]
𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀

La ecuación [3] describe la cinética enzimática y recibe en nombre de ecuación de

Michaelis Menten
La ecuación de Michaelis Menten tienen forma de una hipérbola rectangular, por lo que al graficar
la rapidez como función de la concentración de sustrato:
𝑀
𝑅𝐴 [
𝑚𝑖𝑛

[S]o [𝑀

Hay tres casos límite de la ecuación de Michaelis Menten:

1. Cuando [S]o>>Km
Entonces se puede despreciar Km frente a [S]o en el denominador:
𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜
𝑹𝑨 =
𝑆𝑜
Por lo tanto:

𝑹𝑨 = 𝑹𝒎á𝒙
En este primer caso límite la rapidez se vuelve independiente de la concentración del sustrato
(orden cero con respecto al sustrato), esto se debe a que al existir una gran concentración de
sustrato éste satura los sitios activos de la enzima, es decir hay más sustrato que sitios activos de
la enzima
2. Cuando [S]<<Km
En este segundo caso límite se puede despreciar a la concentración de sustrato frente a Km
𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜 𝑅𝑚á𝑥
𝑹𝑨 = = 𝑆 𝑜
𝐾𝑀 𝐾𝑀
Como se observa en este caso la rapidez es directamente proporcional a la concentración de
sustrato (orden uno con respecto al sustrato), esto se debe a que los sitios activos de enzima no
se encuentran saturados, ya hay más sitios activos acticos de enzima que sustrato. Este caso se
da a bajas concentraciones de sustrato
3. Cuando [S]=Km 𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜 𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜
𝑹𝑨 = =
𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀 𝑆 𝑜+ 𝑆 𝑜
𝑅𝑚á𝑥 𝑆 𝑜
𝑹𝑨 =
2𝑆𝑜
𝑅𝑚á𝑥
𝑹𝑨 =
2
Este último caso límite se interpreta: el valor de la constante de Michaelis se encuentra a la mitad
de la rapidez máxima en el gráfico de Ra vs [S]
𝑀
𝑅𝐴 [
𝑚𝑖𝑛
𝑅𝑚á𝑥

𝑅𝑚á𝑥
𝑚=
𝑅𝑚á𝑥 𝐾𝑀
2

[S]o [𝑀
𝐾𝑀
LINEALIZACIONES DE LA ECUACIÓN DE MICHAELIS MENTEN
Los parámetros cinéticos Rmáx y Km se pueden obtener a partir de datos experimentales de Ra y
[S], para ello es necesario linealizar la ecuación de Michaelis-Menten. Existen tres modelos
lineales 𝑅 𝑆
𝑚á𝑥 𝑜 ECUACIÓN DE
𝑹𝑨 = MICHAELIS MENTEN
1. Linealización de Lineweaber-Burk 𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀
Se toman los recíprocos a cada miembro de la ecuación de Michaelis Menten
1 𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀
=
𝑅𝐴 𝑅𝑚á𝑠 𝑆 𝑜
1
Aplicando la propiedad distributiva: 𝑅𝐴 𝐾𝑀
𝑚=𝑅
𝑚á𝑥
𝟏 𝟏 𝑲𝑴 𝟏 1
= + ∗ Ecuación
𝑹𝑨 𝑹𝒎á𝒙 𝑹𝒎á𝒙 𝑺 𝒐 de la línea 𝑅𝑚á𝑥 1
recta 𝑆𝑜
𝑦=𝑏 +𝑚 𝑥
2. Linealización de Eadie-Hofstee
Se dividen ambos miembros de la ecuación de Michaelis Menten por Ra*Rmáx
𝟏 𝑆𝑜
=
𝑹𝒎á𝒙 𝑅𝐴 𝑆 𝑜 + 𝑅𝐴 𝐾𝑀
Se obtiene el recíproco de la ecuación
𝑹𝑨 𝑺 + 𝑹𝑨 𝑲𝑴
𝒐
𝑹𝒎á𝒙 =
𝑺𝒐
𝑹𝑨
Aplicando ley distributiva al numerador y reordenando: 𝑅𝑚á𝑥

𝑹𝑨 Ecuación 𝑚 = −𝐾𝑀
𝑹𝑨 = 𝑹𝒎á𝒙 − 𝑲𝑴 ∗ de la línea
𝑺𝒐 𝑅𝐴
recta
𝑦=𝑏 +𝑚 𝑥 𝑆𝑜
3. Linealización de Hanes—Woolf
Se dividen ambos miembros de la ecuación de Michaelis Menten por [S]o
𝑹𝑨 𝑅𝑚á𝑥
=
𝑺𝟎 𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀
Obteniendo el inverso:
𝑺𝒐 𝑆 𝑜 + 𝐾𝑀
=
𝑹𝑨 𝑅𝑚á𝑥

Aplicando ley distributiva al numerador y reordenando:

𝑺𝒐 𝑲𝑴 𝟏 Ecuación
= + 𝑺 𝒐 de la línea 𝑆𝑜
𝑹𝑨 𝑹𝒎á𝒔 𝑹𝒎á𝒙 recta 1
𝑅𝐴 𝑚=𝑅
𝑚á𝑥
𝑦= 𝑏 +𝑚 𝑥 𝐾𝑀
𝑅𝑚á𝑥
𝑆 𝑜
EJEMPLO: DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS CINÉTICOS A
PARTIR DE DATOS EXPERIMENTALES
Los siguientes datos experimentales fueron obtenidos durante un estudio de la actividad catalítica de la conversión de la
glicilglicina a glicina mediante una enzima peptidasa
𝑝𝑒𝑝𝑡𝑖𝑑𝑎𝑠𝑎
𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑙𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎 + 𝐻2 𝑂 2𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎
Es necesario probar los tres modelos de linealización, los datos registran en la siguiente tabla
[s] (M) Ra (M/min]
0.0016 0.00000021
eje
0.003 0.00000028 Datos experimentales x y x y x y
0.004 0.00000033 Lineweaver-Burk Eadie-Hofstee Hanes-Woolf
0.008 0.0000004 [s] (M) Ra (M/min] 1/[s] (1/M) 1/Ra (min/M) Ra/[S] (1/min) Ra (M/min) [S] (M) [S]/Ra (min)
0.016 0.00000045 0.0016 0.00000021 625 4761904.762 0.00013125 2.1E-07 0.002 7619.0476
0.003 0.00000028 333.33333 3571428.571 9.33333E-05 2.8E-07 0.003 10714.286
0.004 0.00000033 250 3030303.03 0.0000825 3.3E-07 0.004 12121.212
0.008 0.0000004 125 2500000 0.00005 0.0000004 0.008 20000
0.016 0.00000045 62.5 2222222.222 0.000028125 4.5E-07 0.016 35555.556
 Gráfico de Lineweaver-Burk Gráfico de Eadie-Hosftee
6000000 0.0000005
4.5E-07
5000000 0.0000004
3.5E-07
1/Ra (min/M)

4000000

Ra (M/min)
y = 4559.5x + 2E+06 0.0000003
3000000 R² = 0.9961 2.5E-07
y = -0.0024x + 5E-07
0.0000002
2000000 R² = 0.9906
1.5E-07
1000000 0.0000001
5E-08
0 0
0 100 200 300 400 500 600 700 0 0.00002 0.00004 0.00006 0.00008 0.0001 0.00012 0.00014
1/[s] (1/M) Ra/[S] (1/min)

Gráfico de Hanes-Woolf
40000
35000 y = 2E+06x + 4601.2
R² = 0.9997
30000
[S]/Ra (min)

25000
20000
15000
10000
5000
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02
[S] (M)
Como se observa en los gráficos de la diapositiva anterior, el modelo al que mejor se ajustan los datos es al
de Hanes-Woolf
𝑺𝒐 𝑲𝑴 𝟏
= + 𝑺 𝒐
𝑹𝑨 𝑹𝒎á𝒙 𝑹𝒎á𝒙
Con base en los parámetros de regresión lineal para el modelo de Hanes-Woolf
1 1 1
= 𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑴
𝑅𝑚á𝑥 𝑅𝑚á𝑥 = = −𝟕
𝑹𝒎á𝒙 = 𝟓𝒙𝟏𝟎
pendiente 2x106 𝑚𝑖𝑛 𝒎𝒊𝒏
𝑀

𝐾𝑀 5𝑥10−7 𝑀
= 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜 𝐾𝑀 = 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜 ∗ 𝑅𝑚á𝑥 = 4601.2𝑚𝑖𝑛 ∗ 𝑲𝑴 =0.0023006 M
𝑅𝑚á𝑥 𝑚𝑖𝑛