PRÁCTICA 4.

CURVAS DE ABSORCIÓN POR

ESPECTROFOTOMETRIA
Integrantes del equipo: García Diaz Cynthia, Gómez Molina Esmeralda, Hernández Flores Jesús Alfredo,
Rivera Ramales Alison, Silverio Domínguez Maritza
Licenciatura: Químico Fármaco Biólogo

RESUMEN
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma. En esta práctica se darán a conocer las
características generales y conceptos relacionados con la espectrofotometría. A
continuación, y tras la explicación del funcionamiento del espectrofotómetro se harán
espectros de absorción con el fin de determinar la longitud de onda donde la muestra
presenta la máxima absorción, y tras realizar las correspondientes rectas de calibrado se
cuantificarán las concentraciones de distintas biomoléculas.

INTRODUCCIÓN
La espectroscopia estudia la cantidad de luz que absorbe, dispersa (refleja) o
despide un objeto. Es decir, descompone la luz y mide las diferentes longitudes de onda de
luz visible y no visible. Por ejemplo, en el campo de la medicina, se utilizan distintos tipos
de espectroscopia para estudiar los tejidos y ayudar en el diagnóstico. No obstante, también
se puede estudiar en astrofísica para determinar la naturaleza y propiedades físicas de los
astros. Y, a su vez, también se puede aplicar en física, química y biología, entre otras
disciplinas científicas.
La espectroscopia estudia concretamente 6 fenómenos ópticos:
Absorción
Fluorescencia
Fosforescencia
Emisión
Dispersión
Quimioluminiscencia

OBJETIVOS
 Conocer a qué longitud de onda el permanganato potásico tiene una mayor
absorbancia.
 Ser capaz de leer e interpretar los resultados de una curva de absorción.
 Familiarizarnos con el uso del espectrofotómetro y sus partes.
MARCO TEÓRICO
La espectrofotometría se compone de espectro y fotometría. En física, el espectro es
la distribución de la intensidad de una radiación por una magnitud determinada. La noción
puede referirse al gráfico que representa la distribución y la fotometría mide la intensidad
lumínica y es una rama de la óptica enfocada en las leyes de la intensidad. Se denomina
espectrofotometría al procedimiento de medición de la cantidad de luz absorbida por una
sustancia a una longitud de onda determinada. La luz es una onda electromagnética. En
concreto, es una onda del espectro visible, parte de la radiación que el ojo humano percibe.
Longitud de onda: 400-700 nm. La espectrofotometría se apoya en la ley de Beer-Lambert
que relaciona la absorción de la luz con las propiedades del material.
Dicho de otro modo, esta ley establece una relación entre la intensidad lumínica
entrante a un medio y la intensidad lumínica saliente una vez que se produjo la absorción.
Para el cálculo apela a distintas ecuaciones según si el material es un líquido o un gas.
El espectrofotómetro
Para realizar una espectrofotometría se recurre a un espectrofotómetro. El inventor
de este aparato fue el estadounidense Arnold Orville Beckman (1900–2004), quien lo
presentó en 1941.
Un espectrofotómetro se encarga de proyectar un haz de luz para que atraviese una
muestra, midiendo la transmitancia (la luz que logra atravesar la muestra) o la absorbancia
(la luz que absorbe). El nivel de luz transmitido o absorbido a una cierta longitud de onda
resulta proporcional a la concentración del material en la muestra.
Cuando el material no puede lograr la absorción de luz, es posible mezclarlo con un
reactivo. Así se genera una solución que, gracias a una reacción química, absorbe la luz.
Por sus propiedades, los espectrofotómetros de la actualidad están preparados para
desarrollar mediciones sobre múltiples materiales.
Una espectrofotometría puede ayudar a descubrir el nivel de contaminación del
agua, detectar impurezas en reactivos o conocer la cantidad de una sustancia en una
solución, por ejemplo.

PROCEDIMIENTO
1. Se realizaron los cálculos pertinentes para preparar una solución madre de azul de
timol de 25ml a 440ppm
2. Respectivamente de la solución anterior realizamos otra solución tomando en cuenta
50ml a 44ppm
3. Realizamos una serie de disoluciones, tomando la de la segunda solución, se
realizaron los cálculos pertinentes para saber que volumen tomaríamos para cada
una de las disoluciones. (En este caso fue para soluciones a: 4ppm, 8.8ppm,
12.2ppm, 17.6ppm y 22ppm)
4. Después de tener todas las disoluciones procedimos a llenar las celdas para
colocarlas en el espectrofotómetro, (se llenaron 2 celdas por cada disolución ya que
se trabajó con 2 espectrofotómetros).
5. Se colocaron las celdas en el espectrofotómetro y se realizó un barrido inicial para
analizar la muestra blanco y la muestra 1, medimos la absorbancia y longitud de
onda para poder determinar a qué longitud trabajaríamos las demás muestras. (se
utilizó una longitud de 430nm).
6. Fijamos en el espectrofotómetro una longitud de onda de 430nm.
 7. Tomemos los datos de absorbancia y concentración de las 5 muestras.
8. Por ultimo colocamos la muestra problema y nuevamente medimos su absorbancia
y concentración para obtener la ecuación de la recta.

Imagen 1. Barrido inicial para obtener la Imagen 2. Barrido de la muestra

longitud de la absorbancia maxima. problema.

RESUTADOS
Después de realizar las disoluciones correspondientes para cada concentracion
obtuvimos que las concentraciones tuvieron la molaridad que se representa en la tabla 1.
Tabla 1. Concentración molar de las 5 disoluciones.
Soluciones Concentración (ppm) Concentración (M)
1 4 8.5x10-5
2 8.8 1.88x10-5
3 12.2 2.5x10-5
4 17.6 3.7x10-5
5 22 4.7x10-5

Al realizar el barrido de la muestra uno obtuvimos una absorbancia máxima de

0.045 a 430 nm en longitud de onda. Para la muestra problema los resultados del barrido
nos arrojó una absorbancia de 0.498 a una concentración de 42.08 ppm. En la imagen 3
observamos los resultados del gráfico con los cuales calculamos la concentración final de la
muestra problema.
 Imagen 3. Resultados del gráfico muestra problema.

Con base a los datos de la ecuación de la recta y=mx+b, donde m=0.0122 y b=-
0.0165 y con la fórmula:
A−b
C=
m

0.498−(−0.0165 )
C= =42.17 ppm
0.0122

Al sustituir los datos nos da una concentración de 42.17 ppm lo cual comprueba la
concentración anterior de 42.08 ppm.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Durante el desarrollo de esta practica que tuvo como objetivo obtener una curva de
absorción en función de la concentración. Sabemos que una curva de calibración es un
método muy utilizado en química analítica para determinar la concentración de una
sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en disoluciones.[3]
Y que este método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica (propiedad), que en este caso es la obsorbancia. Dentro del
marco de discusion hemos concluido que para realizar una curva de absorcion es una
manera facil y rapida de obtener o determinar la concentracion desconocida de determinada
muestra, como fue el caso de esta practica donde se llevaron acabo una serie de pasos que
nos ayudaron a llevar acabo este analisis, empezando con los calculos adquiridos para la
preparacion de una serie patron de soluciones a partir de una solucion estandar, el manejo
del espectofotometro que incluye desde el encendido y apagado de esta maquina, seguido
de la selección de la longitud de onda que se va ocupar , para asi poder continuar y medir la
absorbancia correpondiente de la solucion problema y las demas soluciones, lo cual nos
llevo a obtener resultados de 430 (nm) y al ser el cálculo de la concentración de la muestra
problema coincide con la concentración arrojada por el espectrofotometro.
CONCLUSIONES
Para concluir, sabemos que el espectrofotómetro es un instrumento muy útil, que
ayuda a determinar la concentración de analito de una determinada muestra problema.
Podemos decir que se cumplió con el principal objetivo que es conocer el manejo
del espectrofotómetro y que se llevó a cabo correctamente el uso del espectrofotómetro,
realizando un barrido espectral que nos permitió la elaboración de las correspondientes
curvas de concentración, que fueron utilizadas para calcular concentraciones de nuestra
muestra problema.

REFERENCIAS
[1] comunicación. (2021). ¿Qué es la espectroscopia?: Tipos y técnicas. Instituto
Europeo De Química, Física Y Biología. https://ieqfb.com/que-es-la-espectroscopia-tipos-
y-tecnicas/
[2] Pérez Porto, J. (8 de septiembre de 2021). Espectrofotometría - Qué es,
definición y concepto. Definiciones. Recuperado el 27 de abril de 2023 de
https://definicion.de/espectrofotometria/
[3] Padial, J. (2015, mayo 26). ¿Qué es una curva de calibración? Curiosoando.
https://curiosoando.com/que-es-una-curva-de-calibracion