Enzimas: CINETICA ENZIMATICA

• Determinan la pauta de las reacciones quimicas

• Intervienen en mecanismos de transduccion de Energia
• Estabilizan un estado de transicion
• Poseen alta especificidad de sustrato.

Formacion del complejo enzima-sustrato

Modelo de llave-cerradura (Fisher 1890)

Modelo de ajuste inducido (Koshlad 1958)

Espectro de piridoxal fosfato (grupo prostético de la
Triptofano sintetasa)
Efecto de la unión de los sustratros.
 Similitudes y Diferencias entre los catalizadores
inorgánico y las enzimas

SIMILITUDES
•La enzima es un catalizador
•No se consume durante la reacción, se recupera intacto al final de la misma.
•Modifica el mecanismo de la reacción llevando a la reacción por un camino cuyo estado de
transición es de menor energía que el que se alcanza en ausencia de enzima y como
consecuencia la Energía de activación de la reacción catalizada es menor que la de la misma
reacción global en ausencia de catalizador.
•No afecta el estado de equilibrio sino la velocidad con que se alcanza el equilibrio

DIFERENCIAS
• Estructura química: ENZIMAS= proteínas o RNA (ribozimas) Inorgánico: x.ej.metales (Ag, Pt,)
• Especificidad
• Estabilidad
 La enzima acelera la velocidad de la reacción.
No afecta el equilibrio de la reacción sino la velocidad con la que éste se alcanza

E no modifica el estado de equilibrio

E permite que el equilibrio se alcance más rápidamente

k k k ⋅ 10
A B K eq = K eq =
k− k − ⋅ 10
k-
Reacción catalizada transcurre en varias etapas
k1 Velocidad de reacción global= velocidad de etapa más lenta
k2 1º etapa: formación de complejo EA
E + A EA E+B
2º etapa: formación y liberación del producto == + lenta
k-1 k-2 En consecuencia V=k2[EA] k =k
2 cat
 CLASES DE ENZIMAS
CLASE TIPO DE REACCIÓN EJEMPLO

1- Oxidoreductasas Redox Lactato deshidrogenasa

2. Transferasas Transferencia de grupo Nucleósido
monofosfato quinasa
(NMP kinasa)
3. Hidrolasas Reacciones de hidrólisis Quimotripsina
(Transferencias de grupos al agua)
4. Liasas Adición o remoción de grupos para Fumarasa
formar dobles enlaces
5. Isomerasas Isomerización (tranferencia Triosa fosfato
intramoleculara de grupos) isomerasa
6. Ligasas Ligado de dos sustratos a expensas Aminoacil-tRNA
de la hidrólisis de ATP sintetasa

IUPAB (International Uniion of Pure and Applied Biochemistry) EC (Enzyme Commission)

EC. 2.4.4.7
COFACTORES ENZIMÁTICOS:
Orgánicos: Grupo prostético (unión fuerte) y Coenzimas (unión debil)
Inorgánicos: iones
 Vitaminashidrosolubles

Forman coenzimas
Vitaminas liposolubles
EVOLUCIÓN TEMPORAL DE LA REACCIÓN CATALIZADA POR ENZIMA

Estado pre-estacionario E+S ES E+P

Estado estacionario en la [ES] E+S ES E+P

Estado equilibrio E+S ES E+P

Estado pre-estacionario

tiempo
 k k k ⋅ 10
A B K eq = K eq =
k− k − ⋅ 10
k-
Reacción catalizada transcurre en varias etapas
Velocidad de reacción global= velocidad de etapa más lenta
1º etapa: formación de complejo EA
2º etapa: formación y liberación del producto == + lenta
En consecuencia V=k2[EA] k =k
2 cat
 k1 k2
E + S ES E+P
k-1 k-2
Reacción catalizada transcurre en varias etapas
Velocidad de reacción global= velocidad de etapa más lenta
1º etapa: formación de complejo ES
2º etapa: formación y liberación del producto == + lenta
En consecuencia V=k2[ES]
dP
pediente V=
dt

Si ↑ [S] --Æ ↑ [ES]

Dado que V=k2[ES] ∴ ↑ [S] ↑V
↑ pendiente y
el equilibrio se alcanza más rápido

Velocidad Inicial, medida a tiempo suficientemente corto

V0 como para que la cantidad de S consumido sea <5%
 Parámetros cinéticos: KM y Vmáx

• Cómo se calculan
• Qué significan
• Qué ocurre cuando [S] >> KM → V≅ Vmax
kcat
• Qué ocurre cuando [S] << KM → V = [ S ][ ET ]
KM
 Ecuación de Michaelis-Menten V0
dP Trabajar en condiciones de corto tiempo de reacción y
V= dP estado estacionario en [ES]
dt = k 2 .[ ES ]
dt V1=V-1+V2
V=k2[ES]
k1[E][S]=k-1[ES]+k2[ES]
k1[E][S] =(k-1+k2 )[ES] k−1 + k2
k2=kcat KM =
[ E ].[ S ] k1
[ ES ] =
KM
[ET]=[ES] + [E] [E]=[ET] - [ES]
[ ES ].[S ] [ ET ].[S ]
([ ET ] − [ ES ]).[S ] [ ES ] + =
[ ES ] = KM KM
KM
[S ] [ E ].[S ]
[ ES ](1 + )= T
KM KM

[ E ].[ S ] k2 .[ ET ].[S ] Vmax .[ S ]

[ ES ] = T k2 .[ ES ] = V=
K M + [S ] K M + [S ]
K M + [S ]
Ecuación de Michaelis-Menten
KM y Vmax

Vmax cuando [S]>>KM

cuando V =
2
Vmax .[ S ]
Vmax Vmax .[ S ] V=
= [S ]
V=
V max .[ S ] 2 K M + [S ]
K M + [S ]
Vmax [S ] V=Vmax
=
2.Vmax K M + [ S ]

[ K M ] + [S ]
= [S ]
2

K M = [S ]
 Ecuación de las dobles recíprocas o de Lineweaver-Burk

Vmax .[ S ]
V=
K M + [S ]

1 K M + [S ]
=
V Vmax .[ S ]
1 KM [S ]
= +
V Vmax .[ S ] Vmax .[ S ]

1 KM 1 1
= . +
V Vmax [ S ] Vmax
 KM Vmax: a) se alcanza cuando E está saturada con sustrato
k1 k2 b) Permite calcular nº de recambio
E + S ES E+P
k-1 k-2 Vmax
Número de recambio k2 = (s-1)
[ ET ]
molesP
[ E ][ S ] k −1
K ES = = molesE × .tiempo
ES k1

KES: Constante de disociación del

complejo ES

k −1 + k 2
KM =
k1
k −1
Si k2 << k-1 KM ≅
k1
KM es una medida de la estabilidad Actividad específica: si la enzima está pura es k2
del complejo ES y si no esta pura??? moles P/(min.mg prot)
 Eficiencia catalitica

k cat
cuando [S] << KM → V= [ S ][ ET ]
KM

k2 k2 k .k Si 2o etapa es muy rapida…. k2>>k1

= = 2 1
K M k 2 + k −1 k 2 + k −1 k cat
k1 ≅ k1 k1 es el limite maximo de la eficiencia
KM catalitica
INHIBICION REVERSIBLE
Inhibidores competitivos y no competitivos
 INHIBICION REVERSIBLE
I) Reactivos especificos de grupos

Union a Ser en el sitio activo de

la quimotripsina

Union a Cys en el sitio activo de

la acetilcolinesterasa

II) Marcadores de afinidad:

son similares al sustrato; se unen covalentemente

III) Inhibicion basada en el mecanismo (suicida): por ej.N,N-dimetilpropalgilamida inhibe a la Monoaminooxidasa

mediante la modificacion covalente del grupo postetico (FAD) después de la oxidacion del inhibidor.
Análogos del estado de transicion pueden ser inhibidores

Ej.: Anticuerpos cataliticos

Ferroquelatasa cataliza union de Fe2+ en Protoporfirina IX.
En el estado de transición de esta reacción el tetrapirrol se curva

Metilmesoporfirina es curva.
Se usó como antígeno para producir Anticuerpo anti metilprotoporfirina
Este Ac fue capaz de catalizar la reacción de incorporación de Fe2+ a Protoporfirina IX

Metilmesoporfirina
Reacciones bi-sustrato a) Secuencial
b) Doble desplazamiento: b1) ordenado
b2) al azar

a) Secuencial

Notación de Cleland
b1) Doble desplazamiento al azar
b1) Doble desplazamiento ordenado