Informe de Laboratorio N°4

Reconocimiento de Proteínas

Fecha: 01/10/2021
Carrera: Ingeniería Ambiental Asignatura: Bioquímica Ambiental Grupo: 1654012-B
Hora: 4 a 6 p.m.

Integrantes Código Correo

Sayda Paola Suarez Prada 1651565 saydapaolasupr@ufps.edu.co
Mónica Tatiana Estupiñán Castro 1651570 monicatatianaesca@ufps.edu.co
Wilson Stiward Rojas Maya 1651602 wilsonstiwardroma@ufps.edu.co
César Darío Peñaranda Medina 1651623 cesardariopmed@ufps.edu.co

Objetivos:

1. Identificar proteínas a partir de la clara de huevo y gelatina.

2. Realizar pruebas cualitativas en la identificación y reconocimiento de las proteínas.

3. Escribir las diferentes reacciones químicas que suceden en cada uno de los ensayos.
 Introducción

Las proteínas son macromoléculas de gran tamaño; son biopolímeros, es decir, están constituidas
por gran número de unidades estructurales simples repetitivas (monómeros). Debido a su gran
tamaño, cuando estas moléculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre
dispersiones coloidales, con características que las distinguen de las soluciones de moléculas más
pequeñas.

Por hidrólisis, las moléculas proteínicas son escindidas en numerosos compuestos relativamente
simples, de pequeño peso, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolécula.
Estas unidades son los aminoácidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen
entre sí mediante enlaces peptídicos. Cientos y miles de estos aminoácidos pueden participar en la
formación de la gran molécula polimérica de una proteína.

Las proteínas son largas cadenas de aminoácidos unidas por enlaces peptídicos entre el grupo
carboxilo (-COOH) y los grupos amino (NH2) de residuos de aminoácido adyacentes. La secuencia
de aminoácidos en una proteína es definida por un gen y codificada en el código genético. Aunque
este código genético especifique 21 aminoácidos "estándar" más selenocisteína y pirrolisina, los
residuos en una proteína a veces químicamente son cambiados en la modificación por traducción:
antes de que la proteína puede funcionar en la célula, o como la parte de mecanismos de control.
Las proteínas también pueden trabajar juntos para alcanzar una función particular, y ellos a menudo
se asocian para formar complejos estables.

Funciones:

Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas constituyentes de los
seres vivos (biomoléculas). Prácticamente todos los procesos biológicos dependen de la presencia
y/o actividad de este tipo de sustancias. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y
trascendencia de funciones a ellas asignadas. Son proteínas casi todas las enzimas, catalizadores
de reacciones químicas en organismos vivientes; muchas hormonas, reguladores de actividades
celulares; la hemoglobina y otras moléculas con funciones de transporte en la sangre; los
anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones o agentes extraños; los
receptores de las células, a los cuales se fijan moléculas capaces de desencadenar una respuesta
determinada; la actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del músculo durante la
contracción; el colágeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostén.

Clasificación

Según su forma

Fibrosas: presentan cadenas polipéptidos largas y una atípica estructura secundaria. Son insolubles
en agua y en soluciones acuosas. Algunos ejemplos de estas son la queratina, colágeno y fibrina

Globulares: se caracterizan por doblar sus cadenas en una forma esférica apretada o compacta
dejando grupos hidrófobos hacia adentro de la proteínas y grupos hidrófilos hacia afuera, lo que
produce que sean solubles en solventes polares como el agua. La mayoría de las enzimas,
anticuerpos, algunas hormonas, proteínas de transporte, son ejemplo de proteínas globulares

Mixtas: posee una parte fibrilar (en el centro de la proteína) y otra parte globular (en los extremos).
Como, por ejemplo, albúmina, queratina.

Según su composición química

Simples: su hidrólisis sólo produce aminoácidos. Ejemplos de estas son la insulina y el colágeno
(fibrosas y globulares).

Conjugada: su hidrólisis produce aminoácidos y otras sustancias no proteicas llamado grupo

prostético (sólo globulares).
 Reacciones De Reconocimiento

• Reacción de Biuret: El reactivo de Biuret está formado por una solución de sulfato de

cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la

formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones

no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, lo que produce

una coloración rojo-violeta.

• Reacción de Millo: Reconoce residuos fenólicos, o sea aquellas proteínas que contengan

tirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos inorgánicos fuertes del

reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.

 Procedimiento

Debido a las dificultades proporcionadas por el covid-19 para realizar la práctica de manera

presencial en el laboratorio, nos basamos en varios videos tutoriales suministrados por el docente

para llevar a cabo la práctica lo más idéntica posible a la presencialidad.

Se dio inicio a esta primera parte de la practica donde nos basamos por medio de un video tutorial

llamado “Qualitative Analysis of proteins – MeitY Olabs”

En esta primera parte se inició con las Reacciones de Coloración.

1. Prueba de Biuret: Es una prueba diseñada para detectar la presencia de proteínas.

Materiales requeridos:

✓ Dispersión de albumina de huevo

✓ Dispersión de gelatina

✓ Solución de Hidróxido de Sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) 10%

✓ Solución de Sulfato de Cobre (𝐶𝑢𝑆𝑂4 ) 1%

✓ Tubos de ensayo (2)

✓ Pinzas para tubos de ensayo

✓ Goteros

✓ Mechero de bunsen
Al tubo de ensayo A se le adiciona 2𝑚𝑙 de albumina de huevo y al tubo B 2𝑚𝑙 de dispersión de

gelatina, posteriormente al tubo A se procede a añadir con la ayuda de un gotero gotas de Hidróxido

de Sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) y al tubo B, seguidamente se le adicionara gotas de sulfato de cobre (𝐶𝑢𝑆𝑂4 )

para de esta manera llevar a calentamiento y observar los resultados.

2. Reacción Xantoproteica: Coloración específica para los aminoácidos aromáticos

presentes en las proteínas como fenilalanina, triptófano y tirosina.

Materiales requeridos:

✓ Dispersión de albumina de huevo

✓ Dispersión de gelatina

✓ Ácido Nítrico Concentrado (𝐻𝑁𝑂3 )

✓ Solución de Sulfato de Cobre (𝐶𝑢𝑆𝑂4 ) 1%

✓ Tubos de ensayo (2)

✓ Pinzas para tubos de ensayo

✓ Goteros

✓ Mechero de bunsen
Al tubo de ensayo A se le adiciona 2𝑚𝑙 de albumina de huevo y al tubo B 2𝑚𝑙 de dispersión de

gelatina, posteriormente al tubo A se procede a añadir con la ayuda de un gotero gotas de Ácido

Nítrico Concentrado (𝐻𝑁𝑂3 ) y al tubo B, seguidamente se le adicionara gotas de sulfato de cobre

(𝐶𝑢𝑆𝑂4 ) para de esta manera llevar a calentamiento y observar los resultados.

3. Prueba de Millon: Este es un ensayo que nos sirve para saber si existe Tirosina en la

solución, si esto es así se genera un coagulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne.

Materiales requeridos:

✓ Dispersión de albumina de huevo

✓ Dispersión de gelatina

✓ Reactivo de Millon

✓ Tubos de ensayo

✓ Pinzas para tubos de ensayo

✓ Goteros

✓ Mechero de bunsen
Al tubo de ensayo A se le adiciona 2𝑚𝑙 de albumina de huevo y al tubo B 2𝑚𝑙 de dispersión de

gelatina, posteriormente al tubo A se procede a añadir con la ayuda de un gotero gotas Reactivo de

Millon y al tubo B, se lleva a calentamiento y se observan los resultados.

Posteriormente seguimos con el siguiente video tutorial llamado “precipitation Reactions of

Proteins: Biochemistry” que daremos paso a las reacciones por precipitación.

• Sales neutras: Este procedimiento se hará en dos partes, la primera adicionando solución

de sulfato de amonio y la otra parte adicionando sulfato de amonio en polvo sólido.

En primera parte se procede a colocar en un tubo de ensayo A se coloca la proteína albumina

de huevo, posteriormente se le adiciona 3 mL de una solución saturada de sulfato de

amonio.

Para la siguiente parte se coloca en un tubo de ensayo B limpio 3 mL de suspensión de

albumina de huevo, seguidamente se le adiciona sulfato de amonio sólido.

Para el tubo de ensayo A al momento de filtrarlo paso sin problema, pero este no precipito

la reacción, se procedió a adicionarle 40 % de hidróxido de sodio con la intención de

basificar la solución y seguidamente se le adiciona sulfato de cobre dando una coloración

azul intenso indicando esta vez la presencia de proteínas, ya que inicialmente no había

precipitado.

Seguimos con el tubo B que al momento de filtrarlo observando que este si precipitó no se

filtró por completo, se le añadirá igualmente 40% de hidróxido de sodio de igual manera

con la intensión de basificar la solución y seguidamente se le agregará sulfato de cobre

generando también un color azul claro.

• Precipitación isoeléctrica: En un tubo de ensayo se le adiciona albumina de huevo, se le

adiciona el indicador de pH el cual este tiene un rango entre 3.8 – 5.4 y el pinto isoeléctrico

de la proteína que tenemos en el tubo de ensayo es te 4.7, al adicionarle el indicador este se

puso azul indicando que la albumina tiene un pH por encima de 7, seguidamente se le añade

lentamente 1% de ácido acético hasta que esta tome un color verde

• Coagulación por calor: Para este procedimiento nos basamos en un video tutorial llamado

“Denaturation of Proteins”

Se toma la clara o albumina de huevo, posteriormente adicionó la clara de huevo en agua

caliente que se tenía en un vaso, considerando que el agua no estaba lo suficientemente

caliente coloco agua a hervir en un sartén y estando en su punto de ebullición se le adiciona

la clara de huevo.

• Coagulación alcohólica: En un tubo de ensayo se coloca la proteína albumina de huevo,

se le adiciona gotas del alcohol el cual se utilizó etanol, se observa los cambios de

precipitación que se produce.

• Precipitación por iones de metales pesados: En un tubo de ensayo adicionamos la

proteína seguidamente se le adiciona 10% de nitrato de mercurio ocasionando una

precipitación rápida.
 Resultados

1. Prueba de Biuret:

Muestra con gotas de 𝑁𝑎𝑂𝐻 10% Muestra con gotas de 𝐶𝑢𝑆𝑂4 1%

Al adicionar 𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑎𝑙 10% la proteína va a Vemos que al adicionar 𝐶𝑢𝑆𝑂4 𝑎𝑙 1% da un

tener un 𝑝𝐻12 y su grupo amino se color azul, lo cual indica la presencia de

desprotona completamente. proteínas.

Se lleva a calentamiento Reacción esperada

Resultado después del calentamiento

 2. Reacción Xantoproteica:

Al haber agregado el Ácido Nítrico (𝐻𝑁𝑂3 ) vemos que la solución indica un color amarillo, lo

cual quiere decir que existe presencia de aminoácidos con anillos bencénicos.

Se puede observar la reacción esperada los aminoácidos con grupo aromático y vemos la causa de

su color amarillo.
 3. Test de Millon

Este reactivo esta conformado por una solución de Nitrato Mercurioso y Nitrato Mercúrico en ácido

nítrico, importante mencionar ese punto para de esta manar conocer qué reactivo se está trabajando.

Como apreciamos en la imagen el resultado arroja una coloración roja lo cual indica que la prueba

salió positiva y que el huevo como se aprecia tuvo mayor tonalidad de color respecto a la gelatina.

• Precipitación por Sales Neutras

Prueba con Sulfato de Amonio Diluido Prueba con Sulfato de Amonio Concentrado

Se visualiza el líquido obtenido de ambas pruebas y se observa que el Sulfato de Amonio Diluido

no se precipitó completamente, distinto al Sulfato de Amonio Concentrado que este se logra

precipitar completamente y filtra poco.

Proteína con Sulfato de Amonio Diluido Proteína con Sulfato de Amonio Concentrado

La ultima muestra de eficacia nos da como resultado que mediante la prueba de Biuret realizada a

ambas soluciones, la del Sulfato de Amonio Diluido presenta aun enlaces peptídicos y por ende no

hay presencia de proteínas, mientras que la del Sulfato de Amonio Concentrado ya no presenta

proteínas.

Positivo para presencia de proteínas Negativo para presencia de proteínas

 • Coagulación Alcohólica

Esta reacción tiende a precipitar debido a la ausencia de capas de agua por consecuencia del etanol,

teniendo una disminución dieléctrica.

• Metales Pesados

Gracias a que la proteína encuentra un medio básico esta precipitación ocurre de manera rápida y

gana la predominansa del grupo carboxilo.

• Prueba de Heller

Al agregar el Ácido Nítrico Concentrado provoca que la proteína se

precipite velozmente.
 Conclusiones

• Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo ya que

cumplen muchas funciones.

• Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los métodos se basan en el

reconocimiento de los aminoácidos.

• En esta práctica pudimos observar la presencia de proteínas al adicionar el CuSO4 en

cambio cuando adicionamos el NaOH esta proteína desprotona su grupo amino.

 Bibliografía

• https://www.quimica.es/enciclopedia/Prote%C3%ADna.html

• https://youtu.be/OsdhNtNNNds

• https://youtu.be/CyndI0rK1zE

• https://youtu.be/vZ_XK_htz5U