Microscopia electrónico (ME)

Microscopio electrónico de transmisión (MET):

Aplicable a la observación y análisis de la ultraestructura
(estructura fina) de tejido, células, organismos unicelulares
Pasos para la preparación de una muestra: y grandes moléculas. Se obtiene una imagen
 Toma de Muestra: Uno de los pasos más críticos de la técnica histológica: bidimensional.
• Evitar Aplastar la muestra Microscopio electrónico de barrido (MEB):
• Evitar desgarros (movimientos de sierra) Aplicable a la observación y análisis de superficies
tisulares y celulares, membranas celulares y sus
• No usar pinzas de dientecillos especializaciones. Se obtiene una imagen tridimensional.
• Buena selección del material a tomar Microscopio electrónico de Alto Voltaje: Estudio de
Tinción com hematoxilina y eosina (HE) de muestras fijadas en formalina. Pasos cortes gruesos , observaciones de células vivas en cámaras
para la preparación de una muestra: especiales. Provee mayor sobre ultraestructuras
 La fijación (formalina): método histológico de preservación, destinado a tridimensionales, aunque produce imágenes
obtener preparaciones duraderas que mantengan con la menor alteración posible las bidimensionales.
estructuras (morfológicas-químicas) que presenta células y tejido vivo. Se puede
realizar por métodos físicos (frío) o métodos químicos (mezcla y soluciones Los microscopio óptico consta de:
fijadoras). Parte Mecánica: sostiene la parte óptica.
 Deshidratación: Luego de la fijación la muestra se lava y se deshidrata en • Pie
forma progresiva de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta • Columna ▫ Platina
alcanzar un alcohol al 100%. • Tubo ▫ Subplatina (diafragma)
 Aclaración: El xilon, benceno y tolueno, son solventes orgánicos que se Parte Óptica: sistema de lentes, cuya función es
utilizan para la aclaración. Su uso permite controlar el proceso de deshidratación.. canalizar los rayos luminosos hacia la formación de una
imagen aumentada del especimen en estudio.
 Inclusión en Parafina: hay que infiltrar la muestra en un medio de • Fuente de Luz
inclusión que permita realizar cortes muy delgados. Se empareja para luego ser ▫ Objetivos
cortada por el ¨micrótomo¨ y los cortes obtenidos montados sobre un portaobjetos al • Condensador ▫ Ocular
que se le añade una pequeña cantidad de albúmina para que sirva de adhesivo.
 Cálculo del Aumento del MOC: Se calcula
 Confección del Taco: Se retira de la estufa, y con ayuda de las barras de reaccionar con anticuerpos específicos.
Leuckart se confecciona un bloque que es una especie de "cubito de parafina" en  Poder de Resolución: la capacidad de un sistema
cuyo interior se encuentra la pieza a cortar. óptico para mostrar como separados a dos puntos
 Corte: La obtención de rebanadas finas del tejido se hace posible mediante situados a muy pequeña distancia entre sí. Es la
instrumentos de precisión denominados micrótomos. capacidad para discriminar detalles.
 Secado: la adherencia de los cortes a los portas se completa mediante el secado  Límite de Resolución: mínima distancia que debe
en la estufa a 37-40˚. . existir entre 2 puntos para que aparezcan como
 Coloración: la muestra se tiñe para poner en evidencia distintas estructuras individualizados. LR: límite de resolución
citológicas que de otra manera serían muy difíciles de identificar. La afinidad 𝐿𝑅 = ⎯⎯⎯⎯ K: constante, 0.61
tintorial de los tejidos se aprovecha para resaltar distintas estructuras utilizando 𝜆: longitud de onda de luz empleada
colores contrastantes. La mayor parte de los colorantes actúa por afinidad química. AN: apertura numérica del objetivo, viene inscrita en la
 Técnica de Hematoxilina-Eosina: montura del objetivo.
1. Desparafinado de los cortes con inmersiones en xilon. 𝑨𝑵 = 𝐬𝐢𝐧 𝝁 × 𝒏 n: índice de refracción
2. Hidratación de los cortes mediante pasajes de concentración decreciente,
hasta agua destilada.
3. Solución de Hematoxilina (originalmente color rojizo) MAGNITUD Símbolo Equivalencia (mm)
4. Viraje en agua corriente (cambia a color violeta azulado) Milímetro mm 1
5. Solución Eosina (color rosado)
6. Deshidratación del corte mediante pasaje por alcoholes de concentración Micrometro μ 0,001 = 10-3
creciente.
Nanómetro nm 0,000001 = 10-6
 Montaje: a fin de preservar los preparados lo mejor posible, se procede a cubrir
los cortes teñidos con una fina laminilla de vidrio, el cubreobjeto. El medio de Angstrom Ȧ 0,0000001 = 10-7
adhesión debe tener un índice de refracción similar al vidrio y debe ser incoloro
para evitar distorsiones ópticas.
 Etiquetado: una vez secos los portaobjetos, se identifican convenientemente En la mayoría de las células las sustancias ácidas
con etiquetas autoadhesivas o bien lápices de widia para rayar vidrio. (Basófilas) son los componentes nucleares
(cromatina, nucleolo) y los ribosomas
Son técnicas histológica especial que se basa en citoplasmáticos, por contener ácidos nucleicos.
una reacción bioquímica entre los componentes del sistema reactivo y sustrato. El citoplasma es rico en proteínas que si bien son
anfóteras, al pH de la mayoría de las coloraciones
 Técnica de Sudán: sirven para poner en evidencia lípidos intracelulares, de rutina se comportan como base, y por lo tanto
utilizando colorantes liposolubles como el sudán III (rojo) o el sudán IV (negro) que suelen ser acidófilos.
colorean por afinidad física.
Componentes que perduran luego de la fijación:
 Técnica de P.A.S.: sirven para identificar glucógeno, carbohidratos,  Nucleoproteínas
macromoléculas y glucoproteínas. Mediante el tratamiento de los cortes  Proteínas intracelulares del citoesqueleto
desparafinados con ácido periódico se exponen los grupos aldehídos presentes en  Proteínas extracelulares
las uniones 1-2 glicol de los polisacáridos mencionados. Y estos grupos se observan  Complejos de fosfolípidos y proteínas/carbohidratos
de color fucsia. en la membrana.
 en la membrana.

• Técnica de Feulgen: se utiliza para evidenciar ADN. Es similar a la técnica Los lípidos se disuelven en los solventes utilizados
de PAS salvo que los cortes se tratan con ClH diluido. Expone grupos aldehídos de para deshidratar y aclarar. Por lo que se hacen cortes
la desoxirribosa de ADN. La cromatina nuclear se ve de color fucsia, quedando en por congelación en lugar de parafina.
nucleolo sin teñir. Hidroliza las bases púricas dejando expuesto los radicales ▫ La hematoxilina es un colorante Natural, Orgánico y
aldehidos de las pentosas. Catiónico (Básico)
• Técnica Tricrómica de Mallory: Permite diferenciar estructuras ▫ Auxocromo: son los grupos auxiliares que les permite
acidofilas, poco diferenciables con eosina. Distingue fibras de colágeno tipo I por unirse a ciertos sustratos.
su afinidad con el azul de anilina de otras sustancias acidófilas. utilizan para medir ▫ Ortocromático: Es aquel colorante que no cambia su
en forma selectiva distintos componentes de los tejidos. Se usan 3 colorantes que color original al actual sobre su tejido o sustrato.
tiñen con selectividad el colágeno, citoplasma y los eritrocitos, por factores
relativos como el tamaño, permeabilidad y densidad del tejido : ▫ Coloración Especial: Es una técnica histológica
especial que se basa en un principio de afinidad físico
 Azul de anilina química del colorante por los sustratos.
 Fucsina ácida (tiñe núcleos)
 Naranja G Los Microscopio Electrónicos usan una corriente de
 Ácido Fosfotugnico es un mordiente. electrones como fuente de luz. Sus muestras se fijan con
glutaraldehido y se incluye en Resina de epoxi.
• Metacromasia: es la modificación de absorbancia de un tejido hacia un
colorante básico que reacciona con componentes hísticos (formación de Técnica Indirecta de la Inmunohistoquímica.:
aglomeraciones diméricas y poliméricas). 1. Obtención de Muestra
2. Fijación
• Impregnación Argénica: Estudia la morfología de las fibras nerviosas a 3. Incubación con anticuerpo primario (anti epitope
través del depósito de sales de plata. Nos permite evidenciar tejido nervioso y
especifico)
algunas fibras del tejido conectivo.
4. Incubación con anticuerpo secundario (anti fracción
• Técnica de Orceina: permite evidenciar fibras elásticas constante del primario)
• Técnica de Inmunohistoquímica: la fracción variable del anticuerpo 5. Incubación con sistema de revelado
primario se une de manera específica a lo que queremos evidenciar, puede ser
indirecta o directa.
Mitocondria: responsable de la respiración celular.
RER: afinidad por colorante basófilo
REL: tiene la capacidad de almacenar calcio
Núcleo: ocurre la transcripción de ADN.
Ribosoma: ocurre la traducción de ARNm.
Proteínas: son canales, transportadores y receptores que se encuentran en la membrana plasmática
Componentes del Citoesqueleto: microtúbulos, filamentos intermedios y filamentos de actina.
Nucleosoma: primer nivel de plegamiento de la cromatina.
Fosfolipidos y Proteínas : principales componentes de la membrana plasmática

Formas Célulares
 Célula Estrellada: célula con presencia de muchas prolongaciones que le dan un aspecto ramificado o de estrella.
 Célula Cilíndrica: célula con forma de cilindro en donde predomina uno de sus ejes con núcleo generalmente basal.
 Célula Cúbica: célula con estructura de cubo por el predominio de caras iguales con un núcleo generalmente en posición central.
 Célula Esférica: célula con forma de forma de esfera o pelota, el núcleo generalmente es de localización central.
 Célula Fusiforme: célula con predominio de uno de sus ejes.
 Célula Plana: célula con predominio del eje longitudinal, siendo sus espesor delgado y aplanado.
 Célula Poliédrica: célula con presencia de muchas caras y forma generalmente irregular/variable.

Las células Isodiamétricas son aquellas que desde su centro geométrico a todos los puntos periféricos tienen el mismo radio (Cúbica, Esférica,
Poliédrica).