PROCESAMIENTO HISTOPATOLOGICO

• Toma de muestra:
- Biopsia: Insicional (toma parte de la lesión) y escisional (se corta toda la lesión y márgenes de tejido sano, además del
dx se hace terapéutica in situ xq se saca toda la lesión)
- Punch/raze de piel: Con un bisturí en forma de cilindro, rota y llega a la hipodermis.
- Biopsia tipo shave: Es mas superficial, epidermis y dermis.
- Legrado uterino: Con una cruetra se toman muestras de las paredes uterinas.
- Biopsia transuretral (RTU): Con un resectoscopio q llega a la uretra prostática.
- Biopsia endoscópica: Xa vías digestivas. Con resectoscopio. Se usa un endoscopio con una cámara, una luz y una zona
xa reseccionar el tejido.
- Biopsia percutánea: X ej xa riñones, hígado. Se guía con un ecógrafo.
- Biopsia esterotaxica: Guiadas x resonancia magnética.
Citologías:
- Triple toma Wied (PAP): Con una espatula se toma muestra del fondo de saco vaginal; con una paleta de Ayre del
exocervix y con un citobrush del endocervix. Se puede fijar x inmersión o aerosol.
- Liquido de cavidades: Ej toracocentesis. El líquido se centrifuga, se toma con una pipeta el sedimento (cel) y se
extiende en un portaobjetos. Se ven cel sueltas.
- Bloque cel: Ej el líquido pleural se centrifuga, se saca el sobrenadante del tubo y al sedimento se le pone formaldehido
y dsp de un tiempo se forma un bloque de cel cohesionadas. Se pone la muestra fijada en un caset de procesamiento
(como una biopsia). Permite ver la histoarquitectura.
- Punción-aspiración aguja gruesa (PAAG): Permite evaluar in situ si la muestra es satisfactoria; inmediatamente se
extiende, colorea y se ve in situ al MO, si no es satisfactoria se espera un poco y se toma otra muestra.

• Fijación: Mantiene la histoarquitectura del tejido, evita la putrefacción x bacterias (heterolisis) y autolisis. Clave el
tiempo (según el tamaño de la muestra, ej 5mm x 14h) y el volumen de fijador (1:20, 1 muestra: 20 fijador xq se va
consumiendo x lo q hay q ponerlo en exceso xa q no quede parte de la muestra sin fijar).
Fijadores:
- Formaldehido 10%. Ppal, se bufea xa evitar la acidificación q lleva a la formación de pigmento formolico
- Bouin: Ac acético (fija xq cambia el grado coloidal de las cel) + formaldehido (fija x crosslinking) + ac pítrico (fija x
formación de pitratos/sales con prot). Ppal xa tejidos embrionarios, piel, testículo.
- Etanol 96%: Mas usado en citologías. Se usa de forma ascendente. Fija pero ppal se usa xa deshidratar.
- Cito fixative: Xa citologías. Etanol 95% + éter + proglenglicol.
Mecanismo físico-químico crosslinking: El formaldehido se diluye en agua y se transforma a metilenglicol q tiene 2 OH q
forma enlacen covalentes con el NH3 de prot q se desnaturalizan.

• Deshidratación: Con etanol desde 70% a 100%, se aumenta la [] de a poco xq evitar q el tejido se retraiga. Forma
puentes de H con el agua. Xq la parafina no es misible con el agua del tejido.

• Aclaramiento: Xq la parafina no es 100% misible en etanol. Se usa xilol q es misible en parafina y etanol. Se extrae el
etanol del intra y extracel xq tiene una cola apolar q es soluble en el anillo aromatico del xilol.
El xilol tmb elimina el colesterol, ac grasos de cadena larga y TAG. La muestra se aclara x la extracción de las grasas.
Los AG de cadena corta no son tan misibles en xilol xq tienen la cabeza polar q se puede unir a otras estructuras. Los
fosfolípidos como tiene grupos P cargados se unen a estructuras polares y no son extraídos.
Se hace en 3 frascos; en el 1° se extrae la mayor cant de alcohol posible; en el 2° se sustituye casi todo el alcohol y en el
3° ya no hay restos de alcohol.

• Impregnación: En dif frascos. Xa reemplazar el xilol x parafina. La parafina se pone en un frasco de aluminio y se
funde en una placa calefactora a 62°C (esto tmb evapora el xilol), dsp se pone la muestra en el frasco y se deja 1h.
Cuando la muestra tiene consistencia suficiente xa ser cortada se hace:

• Inclusión: Se pone la muestra impregnada en un molde de inclusión a 62° y se pone parafina xa formar un bloque.
Arriba se pone un cassette y dsp se pasa a una placa fría xa solidificarlo.
• Corte/microtomia: Fino xa q la luz atraviese. Angulo perpendicular entre el tejido y la cuchilla. Da una tira de cortes
seriados. Los cortes se ponen en un equipo con agua destilada xa estirar el tejido (baño de flotación). Dsp se pone en
un portaobjetos y se colorea.

• Coloración/montaje: Hay q eliminar la parafina xq no es misible con colorantes. La muestra se pone en una estufa x
20-25min xq eliminar la parafina de alrededor del tejido; dsp se pone en 3 frascos con xilol (en el 3° ya no debería hacer
parafina). Dsp se pasa x [] descendentes de alcohol xa hidratar el tejido y teñirlo.
1° se pone hematoxilina; si se usa una hematoxilina regresiva (ej de Harris) q sobrecolorea dsp hay q pasar la muestra
en alcohol ácido xa eliminar el exceso. Dsp se pasa x agua amoniacal xq q el color de la hematoxilina vire de un violeta-
negruzco a un violeta-azulado. Dsp se pasa x agua y dsp se tiñe con eosina.
Dsp xa q se preserve la muestra se pasa x alcohol de 70% a 100% y xilol. Dsp se monta la muestra con un medio de
montaje misible con xilol.
Xa q la hematoxilina tiña hay q oxidarla con oxido rojo de mercurio y yodato potasio. Como no tiene mucha afinidad x
los tejidos hay q usar alumbre de potasio (sal con aluminio); el aluminio con carga + permite q se una a restos ac del
tejido. La eosina tiene carga neg x lo q se une a restos básicos de aa de las proteínas.

Biopsia intraoperatoria
Se pone la muestra en un recipiente con isopentano enfriado y el recipiente se pone en nitrógeno líquido q fija x
congelación (-170, -190°C). Forma un hielo intra y extracel; se forman cristales vítreos q no altera la histoarquitectura.
Dsp se le da consistencia con OCT; como es líquido se congela devuelta con isopentano-N y dsp se corta con criostato q
tiene una cámara frigorífica xa mantener la muestra. Dsp se tiñe con HyE y se ve al MO.
A veces se puede hacer una segunda fijación con alcohol-acetona (mejor) o con xilol.
Xa hacerlo con xilol, hay q pasar la muestra x alcoholes xa deshidratarla xq el líquido de montaje (se pone entre el porta
y cubreobjetos xa q se fijen) es misible en xilol (q no es misible en agua). El alcohol tmb hace de fijador.
Ej se hace xa saber si los bordes reseccionados tienen o no tejido maligno xa saber si hay q sacar mas margen.